中藥材GAP體系下白芨組織培養(yǎng)與栽植技術(shù)

潘正偉

（大理農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院，云南 大理 671003）

1 白芨形態(tài)特征與作用

白芨［Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.］是蘭科白芨屬多年生草本植物，株高33～50 cm。肉質(zhì)塊莖，乳白色，具1～3叉呈菱角狀；根系為須根，常并生；總狀花序，常有花2～7朵，花為淡紫紅色，不整齊；蒴果呈柱狀，外具縱棱，兩端微尖；種子極小，多數(shù)。花期5—7月，果期8—9月。白芨有2種生態(tài)類型，一種花白色稍黃，葉條狀披針形，為狹葉白芨。另一種為紫花白芨，紫花白芨又有大種白芨、小種白芨之分，其中以大種白芨塊莖產(chǎn)量較高［1］。

白芨是一種重要的傳統(tǒng)中藥，主要分布在云南、貴州等省區(qū)。此外，安徽、江西等省區(qū)也有少量分布。幾乎遍布于云南省海拔1 600～2 600 m的林下、溝谷巖縫中、潮濕山坡與巖石上，喜溫暖，耐陰性強。藥用假鱗莖，10月莖葉黃枯時采收。性微寒，味苦，用于治療肺傷咳血、外傷出血、潰瘍疼痛等。《本草綱目》載：“氣味苦辛，無毒。主治癰瘡惡瘡敗疽，傷陰死肌，胃中邪氣，賊風鬼擊，痱緩不收。除白癬疥蟲。結(jié)熱不消，陰下痿，面上皯皰，令人肌滑。止驚邪血邪血疬，痢疾風痹，赤眼癥結(jié)，溫熱瘧疾，發(fā)背瘰疬，腸風癢痿，撲損，刀箭瘡，湯火瘡，生肌止痛。止肺血。附方：跌打骨折：酒調(diào)白芨末二錢服，其功不減自然銅、古銖錢也”。江西省、湖南省與云南省近15家中藥廠用白芨假鱗莖制白芨片、粉、糖漿與沖劑。白芨現(xiàn)已列入瀕危野生保護植物，也是云南省地道藥材及《中華人民共和國藥典》2005年版收載藥物。

2 白芨培育現(xiàn)狀

目前，白芨繁殖方式主要有2種：種子繁殖、分株繁殖。野生白芨種子非常細小，千粒重僅為0.005 6 g，缺乏營養(yǎng)，常規(guī)播種育苗出苗率低，生長緩慢。有的采用分株繁殖，分株繁殖雖然速度快、繁殖系數(shù)高，但是繁殖原材料耗費較多，難以適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)的需要。

自新世紀以來，國家把傳統(tǒng)的種植、養(yǎng)殖業(yè)與現(xiàn)代化生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（Good Agricultural Practice，GAP）相結(jié)合，加速了我國傳統(tǒng)中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)管理。2002年7月我國正式頒布《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GAP），2003年9月頒布《認證管理辦法》（試行）和《中藥材GAP認證檢查評定標準》（試行）。此規(guī)范即大家平時所說的中藥材GAP（GAP for Traditional Chinese Medicine）。自提出中藥材GAP技術(shù)概念以來，國內(nèi)眾多中藥材生產(chǎn)基地、相關(guān)專業(yè)高職院校、科研院所和制藥企業(yè)就踏上了探索實施中藥材GAP之路。從2003年11月1日起國家食品藥品監(jiān)督管理局已正式受理中藥材GAP認證申請。中藥材GAP技術(shù)不僅能繼承發(fā)揚傳統(tǒng)的種植、養(yǎng)殖技術(shù)和經(jīng)驗，而且可使按規(guī)范生產(chǎn)出的中藥材達到“優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、穩(wěn)定、可控”的要求，使中藥材走出國門，縮小與國外發(fā)達國家之間的差距。因此，白芨開展GAP技術(shù)栽培生產(chǎn)具有重大意義。而白芨組織培養(yǎng)是白芨GAP栽培種植的前提，所以白芨組織培養(yǎng)是目前及將來最佳的一種繁殖方式［2］。

3 白芨組織培養(yǎng)技術(shù)

3.1 外植體的選擇

外植體選擇健康白芨種子。

3.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

①無菌萌發(fā)的培養(yǎng)基為Kundson和MS培養(yǎng)基；②愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MS+2，4-D 1.1 mg/L+KT 0.12 mg/L；③分化培養(yǎng)基為MS+KT 2.04 mg/L；④生根培養(yǎng)基為MS+IBA 2.05 mg/L+NAA 1.84 mg/L。分化形成苗后連續(xù)光照。培養(yǎng)基均添加蔗糖22 g、瓊脂8 g［3］。

3.3 培養(yǎng)方法

首先，種子采集于成熟而未開裂的蒴果，外果皮常規(guī)消毒，在無菌狀態(tài)下取出種子，接種于Kundson培養(yǎng)基上，30 d后可直接形成幼苗。

其次，種子萌發(fā)后，在②號愈傷組織誘導培養(yǎng)基上快速形成白色或淡綠色的愈傷組織。

然后，叢生芽體的分化將上述愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基③上，12～16 d后出現(xiàn)大量叢生芽體，光照后叢生芽轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色，并可不斷增殖。

再次，生根培養(yǎng)將叢生芽體切割后轉(zhuǎn)接到④號生根培養(yǎng)基上，可長出粗壯根系，如將愈傷組織轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基中也可以分化出芽體和根系，但是生長速度緩慢，一粒種子經(jīng)過上述多次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)，可獲得大量植株，每株3～5枚葉片。

最后，試管苗移栽。白芨組培苗在培養(yǎng)瓶中長至4～6 cm，可出瓶練苗。為使試管苗適應(yīng)新的自然環(huán)境，要將試管苗放在溫室內(nèi)煉苗4～6 d，以提高小苗的抗病能力。白芨練苗苗床pH值呈弱酸性，一般要求為5.8～6.8。移栽基質(zhì)可以使用天然腐殖質(zhì)，或35%珍珠巖+蛭石35%+泥炭15%+無菌壤土15%，只要管理到位，成活率可達90%。栽苗前，可用高錳酸鉀1 000倍液噴灑消毒［4］。

4 白芨組培苗GAP栽培技術(shù)要點

4.1 凈苗

出瓶取苗要操作規(guī)范，否則根部受損將嚴重影響成活率。開瓶后向瓶內(nèi)注入1/3清水，搖晃使白芨苗與營養(yǎng)液分開后，將瓶內(nèi)苗和營養(yǎng)液一起倒入洗苗盆內(nèi)，用清水沖洗干凈苗根部的營養(yǎng)液。若清洗不干凈，用小刷輕刷后用清水沖洗干凈，將洗干凈的苗根部進行消毒。不能用手直接搓揉苗根部。如果苗根部有部分交纏，不可強行分開，以免拉扯造成傷口感染，整體栽種即可。

4.2 消毒

苗根部用600～1 200倍甲基托布津或多菌靈液浸泡根部10～15 min，陰干，植入消毒腐熟的腐殖質(zhì)中。

4.3 栽種

苗床要求為高墑，防止生理積水。栽苗時，根部覆蓋厚度以蓋住球莖為宜，覆土太厚將嚴重影響根部生長及有氧呼吸。栽種完畢后，澆足定根水，打開遮陽網(wǎng)，調(diào)節(jié)空氣濕度至85%～90%，適當通風，并使環(huán)境溫度維持在22～26℃。并每隔兩三天噴施一次，當移栽小苗新葉展開、苗根伸長后，每月用葉面肥稀釋液噴施追肥，促進生長發(fā)育［5］。

4.4 濕度控制

白芨屬于陰生植物，空氣濕度要求為85%～90%，剛栽種的幼苗需要足夠的葉面水，基質(zhì)要求半濕半干但不能形成積水，空氣濕度的控制可利用霧化水加強或者減少。白芨喜濕潤、怕積水，積水過多過久會使根莖因為無氧呼吸使根腐爛而死。因此，基質(zhì)的透氣性和保濕性決定著幼苗的成活率。

4.5 溫度控制

通常白芨生長的最適合溫度為25～30℃，所以要通過大棚的通風口大小來提供，調(diào)節(jié)合適的溫度。夏季高溫可用噴霧降溫。白芨馴化3～5個月后，春季外界氣溫逐漸回升，有利于組培苗適應(yīng)自然環(huán)境，最宜移栽。但由于各地土質(zhì)營養(yǎng)成分含量不同，氣溫也存在差異，因此，溫度管理和每年的長勢均存在很大的差異。

4.6 光照

大棚需蓋上透光率為75%的遮陰網(wǎng)。冬季氣溫下降后，可根據(jù)情況去掉遮陽網(wǎng)，具體根據(jù)當?shù)貙嶋H溫度來決定。

4.7 中后期病蟲害防治

4.7.1 常見病害的防治。白芨病害主要有葉斑灰霉病、黑斑病、根腐病等。①為防治葉斑灰霉病，建議清除病株殘體，發(fā)病早期摘除下部病葉；及時采取藥劑防治，可以輪換使用以下藥劑：50%多菌靈可濕性粉劑600～800倍液、75%百菌清可濕性粉劑500～700倍液、65%代森鋅可濕性粉劑500～600倍液噴施。②白芨較易發(fā)生黑斑病，病菌以菌絲體或分生孢子盤在枯枝或土壤中越冬。翌年5月中下旬開始侵染發(fā)病，7—9月為發(fā)病盛期。孢子借風、雨或昆蟲傳播、擴大再侵染。為有效防治白芨黑斑病，一般可以用50%多菌靈500～600倍液或70%甲基托布津可濕性粉劑800～1 000倍液浸種，也可在栽苗時浸苗基部10～15 min。③雨水過多是根腐病流行的主要條件，降雨早而多的年份，發(fā)病早而重。低洼積水、通風不良、光照不足、肥水不當?shù)葪l件有利于發(fā)病。根腐病的防治以預(yù)防為主，發(fā)病后無根治的方法。一般可用50%多菌靈600～800倍液或50%百菌清600～800倍液噴施，苗床加強通風排水。

4.7.2 常見蟲害的防治。白芨蟲害主要為地下害蟲，可食害假鱗莖、幼芽、根莖，造成缺苗死苗，地下害蟲主要有螻蛄、蠐螬、金針蟲和地老虎。①蠐螬即金龜子的幼蟲，取食作物的幼根、莖的地下部分，常將根部咬傷或咬斷，使幼苗枯萎死亡。可在蠐螬發(fā)生嚴重區(qū)塊，栽種前采取拌肥、悶種等措施，用50%辛硫磷乳劑1 000倍液將種苗悶2～5 h后栽種，來防治蠐螬危害。②金針蟲即叩甲的幼蟲，咬食塊莖，將幼根莖食成小孔，致使死苗、缺苗或引起塊莖腐爛。可在金針蟲發(fā)生嚴重區(qū)塊，與防治蠐螬相似，用拌肥、悶種等措施進行處理。③螻蛄在地下咬食剛播下的種子或發(fā)芽的種子，并取食嫩莖、根。危害特點是將白芨地下莖咬成亂麻狀，同時螻蛄在地表層活動，形成隧道，使幼苗根與土壤分離，造成幼苗凋枯死亡。在螻蛄發(fā)生嚴重區(qū)塊，以毒餌引誘捕殺為主進行防治。④地老虎幼蟲食性很雜，白天潛伏土中，夜晚出土危害，可將莖基部咬斷，常造成白芨缺苗斷條。在地老虎發(fā)生嚴重區(qū)塊，以深翻滅卵、除草殺蟲和藥劑防治相結(jié)合的辦法進行防治。還可用90%敵百蟲800倍液或75%辛硫磷1 200～1 600倍液灌根。

5 結(jié)語

發(fā)展白芨GAP生產(chǎn)體系，要從白芨組織培養(yǎng)操作開始，并加強田間栽培管理，才有利于不斷提升白芨種植技術(shù)，促進白芨栽培事業(yè)不斷發(fā)展壯大。一方面，能保證白芨的質(zhì)量，實現(xiàn)安全、有效、穩(wěn)定，做到質(zhì)量可控；另一方面，可擴大生產(chǎn)規(guī)模化，在產(chǎn)量上能滿足制藥企業(yè)對白芨原料需求的同時，保證市場價格相對穩(wěn)定，保證種植戶和商家的利益平衡，為白芨生產(chǎn)持續(xù)發(fā)展保駕護航。