雞鴨鵝新城疫病毒毒力及生物學特性的研究

路振香，，張訓海，，郭偉娜，，楊　平，徐義巧，劉　暢，（.安徽科技學院動物科學學院，安徽 鳳陽 3300；.家禽疫病防控監測安徽省重點實驗室，安徽 鳳陽 3300）

雞鴨鵝新城疫病毒毒力及生物學特性的研究

路振香1，2，張訓海1，2，郭偉娜1，2，楊平1，徐義巧1，劉暢1，2
（1.安徽科技學院動物科學學院，安徽 鳳陽 233100；2.家禽疫病防控監測安徽省重點實驗室，安徽 鳳陽 233100）

為了測定雞、鴨、鵝新城疫病毒的毒力強弱。測定其血凝價、血凝素熱穩定性試驗、血凝解脫試驗、氯仿敏感性試驗、耐酸性試驗，并對3株病毒進行理化特性測定；測定其1日齡雛鴨腦內接種致病指數、6周齡鴨靜脈接種致病指數和對13日齡非免疫鴨胚的半數感染量（EID50）。結果雞、鴨、鵝新城疫病毒的血凝價依次為29、28、28；血凝素熱穩定性指數分別為5、15、15 min；血凝均為快速解脫型；對氯仿敏感；對pH值3.0、pH值5.0均敏感；1日齡雛鴨腦內致病指數分別為0.59、0.84、1.04；6周齡靜脈接種致病指數均為0；對13日齡鴨胚的半數感染量（EID50）分別為：10-5.31/0.1 mL、10-6.5/ 0.1 mL，10-7.79/0.1 mL。表明雞新城疫為中等偏弱毒力毒株，而鴨、鵝新城疫病毒均為中等毒力毒株。

新城疫病毒；生物學特性；毒力測定

雞新城疫是由雞新城疫病毒（Newcastle dis?ease virus，NDV）引起的一種主要侵害雞、火雞、野禽和觀賞鳥，亦可感染人的高度接觸性、急性、致死性傳染病。以往人們一直認為，鵝感染新城疫病毒后一般只帶毒和排毒，但不發病。自1997以來，鵝發生新城疫的報道較多，并引起很高的發病率和死亡率[1]，從而改變了人們認為NDV對水禽不致病的觀點。

為了弄清從送檢的疑似新城疫的病死雞、鴨、鵝的腦組織中分離的新城疫病毒的毒力強弱，本文對3株新城疫病毒的毒力及生物學特性進行研究。

1　材料與方法

1.1材料非免疫的13日齡鴨胚180枚，采用血凝抑制試驗抽檢其新城疫病毒的抗體效價為0，購自鳳陽武店，在安徽科技學院畜牧科技園孵化至13日齡；病毒 雞、鴨、鵝新城疫病毒均分別從送檢的疑似新城疫的雞、鴨、鵝的腦組織中分離鑒定得到；9～10日齡SPF雞胚，購自南京藥械廠；1日齡雛鴨50只，購自鳳陽某孵化室，6周齡鴨為購買的1日齡雛鴨經隔離飼養獲得。

1.2方法

1.2.1血凝試驗按參考文獻[2]方法進行。

1.2.2病毒理化特性測定血凝素熱穩定性試驗參考諸敏等[3]、范根成等[4]方法進行；血凝解脫試驗參考范根成等[4]、姜平等[2]方法進行；氯仿敏感性試驗按文獻[1、6]方法進行；耐酸性試驗按文獻[1]方法進行。

1.2.3病毒毒力測定1日齡雛鴨腦內致病指數（ICPI）參考文獻[7]方法進行。6周齡鴨靜脈接種致病指數（IVPI）參考文獻[7]方法進行。雞、鴨、鵝新城疫病毒對鴨胚半數感染量（即EID50）的測定。

按參照文獻[1]的方法進行。將病毒液進行10倍遞進梯度稀釋，即病毒的稀釋倍數依次為1∶ 10，1∶102，……，至1∶1012，每一稀釋度病毒液接種5枚鴨胚，接種部位為絨毛尿囊腔內，每胚接種0.1 mL，另設對照組，即每枚鴨胚接種0.1 mL生理鹽水。接種后將鴨胚繼續置于37.5℃孵化，每天上、下午各照蛋1次，棄去24 h內死亡的鴨胚，觀察至小鴨出殼，對死亡鴨胚進行記錄。死亡鴨胚，置4℃過夜，然后觀察鴨胚病變。

2　結果

2.1雞、鴨、鵝新城疫病毒的血凝價依次為：29、28、28。

2.2病毒理化特性測定結果。

2.2.1血凝素熱穩定性試驗結果見表1。

表1　血凝素熱穩定性試驗結果

由表1可看出，雞、鵝新城疫病毒的血凝價在56℃，5 min內迅速下降，前者在20 min后血凝性完全消失，后者則在40 min后血凝性完全消失；鴨新城疫病毒在56℃，5 min內僅下降1個滴度，15 min內迅速下降，40 min后血凝性完全消失。以血凝價下降21的最短受熱時間作為該毒株的血凝素熱穩定性指數，所以雞、鴨、鵝新城疫病毒的血凝素熱穩定性指數分別為5、15、15 min。

2.2.2血凝解脫試驗結果見表2。

表2　血凝解脫試驗結果

由表2可以看出，雞、鴨、鵝新城疫病毒在第1次懸浮過夜和第2次懸浮2 h后的血凝價均變為0，表明3種病毒均不凝集，可判定這3株病毒為快速解脫型。

2.2.3氯仿敏感性試驗結果見表3。

從表3可看出，3株病毒與對照組相比，試驗組血凝價均明顯下降，說明雞、鴨源、鵝新城疫病毒均對氯仿敏感。

2.2.4耐酸性試驗結果見表4。

表4　耐酸性試驗結果

由表4可看出，3株病毒經pH值5.0、pH值3.0處理后，試驗組的血凝價均比對照組明顯下降，表明3株病毒對pH值5.0、pH值3.0均敏感。

2.3病毒毒力測定結果

2.3.11日齡雛鴨腦內致病指數（ICPI）測定結果

雞、鴨、鵝新城疫病毒的1日齡雛鴨腦內致病指數分別為0.59、0.84和1.04。

2.3.26周齡鴨靜脈接種致病指數（IVPI）測定結果3株新城疫病毒的6周齡靜脈接種致病指數均為0，接種后小鴨均未發病。

2.3.3雞、鴨、鵝新城疫病毒對鴨胚的EID50的測定結果分別為：10-5.31/0.1 mL、10-6.5/0.1 mL和10-7.79/0.1 mL。

2.3.4雞、鴨、鵝新城疫病毒感染鴨胚后，死亡鴨胚的病理變化3株新城疫病毒致死的鴨胚病理變化基本相同：死亡鴨胚的喙、頭、頸出血較嚴重（呈出血斑），爪出血最嚴重（基本上都出血），背部彌漫性點狀出血。

接近29日齡死亡的鴨胚，剖檢后可見有大量白色尿酸鹽沉積，而且胚體出血。接種病毒未致死的鴨胚孵出的小鴨，體型較小，發育不良。

3株新城疫病毒使鴨胚致死的時間集中在第2天至第7天，即接種后36～168 h之間，接種后36 h開始死亡，36～108h之間出現死亡高峰，接種204 h后停止死亡，接種病毒組共孵化出9只小鴨。

另外，5枚接種生理鹽水的對照組鴨胚全部孵出健康小鴨。

3　討論

近些年來，國內陸續報道發生鴨、鵝副黏病毒病，從而改變了NDV不引起水禽發病的觀點。本試驗從血凝素熱穩定性、血凝解脫速度、胰蛋白酶消化、氯仿敏感性及對酸敏感性等方面對雞、鴨、鵝新城疫病毒株進行理化特性研究，結果表明，3株毒株血凝素熱穩定性指數分別為5、15、15 min；血凝均為快速解脫型；對胰蛋白酶、氯仿均敏感；對pH值3.0，pH值5.0均敏感。這些符合新城疫病毒的特性。

雞、鴨、鵝新城疫病毒腦內接種1日齡雛鴨致病指數（ICPI）分別為0.59、0.84、1.04；6周齡靜脈接種致病指數（IVPI）均為0，表明6周齡鴨對3株新城疫病毒均具有抵抗力。從上述兩項結果可判定，雞新城疫病毒屬于中等偏弱毒力毒株，鴨、鵝新城疫病毒屬于中等毒力毒株。從3株新城疫病毒對鴨胚的EID50可知，鵝新城疫病毒的致病力最強，鴨新城疫病毒的致病力次之，雞新城疫病毒的致病力最弱，但它們對鴨胚的致病力都很強。

[1]殷震，劉景華.動物病毒學[M].2版.北京：科學出版社，1997：743-750，736-766.

[2]姚火春.獸醫微生物學實驗指導[M].2版.北京：中國農業出版社，2002：105-106.

[3]諸敏，陳昌.鴿新城疫病毒QL株一些理化及培養特性[J].中國獸藥雜志，2001，35（5）：9-10.

[4]范根成，朱萬光，王永玲，等.新城疫病毒強毒株的分離與鑒定[J].中國獸醫學報，1999，19（2）：114-117.

[5]姜平，陳溥言，蔡寶祥.從鵪鶉分離的一株新城疫病毒的性狀研究[J].畜牧與獸醫，1990，22（1）：9-10.

[6]孫泉云，周錦萍，張蘇華，等.蛋雞新城疫病毒的分離與鑒定[A].中國畜牧獸醫學會家畜傳染病學分會第五界全國會員代表大會暨第九次學術研討會論文集[C].山東省煙臺市2001：609-609.

[7]鄭明球.家畜傳染病學實驗指導[M].3版.北京：中國農業出版社，2001：107-108.

Experimental Research on Virulent Biological Characteristics of thechicken and duck and gooseNewcastlediseasevirus

LU Zhen-xiang1，2，ZHANG Xun-hai1，2，GUO Wei-na1，2，YANG Ping1，XU Yi-qiao1，LIU Chang1，2
（1.Anhui Science and Technology University，Animal Science College，Fengyang 233100，China；2.Anhui Key Laboratory of Poultry Infectious Disease Prevention and Control，Fengyang 233100，China）

To test NDV from chicken，duck and goose.The biological characteristics of three NDVs were tested by digesting trypsin test，thermostability of haemagglutinin test，Hemagglutinin hot stability test，Hemagglutination free trial of strains to chloro?form，and hydrochloric acid test.Their virulences were analyzed by intracerebral pathogenicity index（ICPI）for one-day-old ducks and intravenous pathogenicity index（IVPI）in 6-week-old ducks，and 13-day-old non-immune infection of duck embryo（EID50）. The haemagglutinin index of NDV from chicken，duck and goose was 29，28，and 28，respectively.Thermostability index of three strains was 5 minutes，15minutes，and 15 minutes at 56℃，respectively.The haemagglutination elution test showed their rapid elut?ing pattern.There were sensitive to choloroform and trypsin，pH3.0 and pH5.0.The intracerebral pathogenicity index（ICPI）for oneday-old chicks was 0.59，0.84，and 1.04，respectively.Intravenoous pathogenicity index（IVPI）in 6-week-old ducks of all the three NDV strains was 0.The duck embryo'EID50 infected by NDV from chicken，duck and goose were10-5.31/0.1 mL，10-6.5/0.1 mL，and 10-7.79/0.1 mL，respectively.chick NDV was moderate to weak strain，but duck and goose NDV were moderate strains.

NDV；biological characteristics；Virulent measure

S852.65+9.5

A

0529-6005（2016）07-0006-02

2015-03-06

國家自然科學基金（30671556）；安徽科技學院重點學科建設基金（YZD2004-12）；安徽科技學院校級重點學科建設項目（AKZDXK205A04）

路振香（1964-），女，副教授，碩士，主要從事動物微生物學的教學與科研工作，E-mail：luzhenxiang2002@126.com