高效液相色譜法測(cè)定樂山梔子熊果酸含量

錢婉霞

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了樂山梔子中熊果酸的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。熊果酸在5～55μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。熊果酸的平均回收率為99.5%，RSD為0.76%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于樂山梔子中熊果酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：樂山梔子；熊果酸；含量

梔子（學(xué)名：Gardenia jasminoides Ellis）別名：黃梔子、山梔、白蟾，是茜草科植物梔子的果實(shí)。《醫(yī)學(xué)啟源》記載：“療心經(jīng)客熱，除煩躁，去上焦虛熱，治風(fēng)。”梔子具有護(hù)肝、利膽、降壓、鎮(zhèn)靜、止血、消腫等作用。梔子果實(shí)含有梔子甙（gardenoside）、都桷子甙（geniposide）、山梔甙（shanzhiside）、梔子酮甙（gardo-side）、都桷子甙酸（geniposidic acid）、綠原酸（chlorogenic acid）、熊果酸、D-甘露醇（D-mannitol）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、葉黃素（xanthophyll）等成分。熊果酸具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)儭⒔档脱堑榷喾N生物學(xué)效應(yīng)。桅子產(chǎn)于浙江、江西、云南、貴州、江蘇、安徽、湖南、福建、四川、湖北、廣東、廣西、河南等地。本文采用高校液相測(cè)定了樂山梔子中熊果酸的含量。

1 儀器與試藥

STI-501Plus梯度高效液相色譜儀（賽智科技（杭州）有限公司）；UV-6雙光束掃描型紫外可見分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；HN-6AL功率可調(diào)超聲波清洗（上海汗諾儀器有限公司）；XSYF-D實(shí)驗(yàn)室廢水處理設(shè)備（北京湘順源科技有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；BT賽多利斯電子天平（北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）。大黃素和大黃酚對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。熊果酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇（杭州匯普化工儀器有限公司）、磷酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、乙腈（杭州匯普化工儀器有限公司）、磷酸二氫鉀（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、冰乙酸（杭州匯普化工儀器有限公司）、三乙胺（天津市順隆達(dá)科技有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。理論板數(shù)按熊果酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取梔子，粉碎過40目，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇40毫升，超聲處理30分鐘，放冷，過濾，將濾渣再加甲醇30毫升，超聲處理20分鐘，過濾，合并濾液，濾液置100ml量瓶中，用甲醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V人同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取熊果酸對(duì)照品約5mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含20？滋g的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

取流動(dòng)相依上述方法測(cè)定，結(jié)果在熊果酸出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，熊果酸對(duì)照品在5～55μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取熊果酸對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.76%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的樂山梔子樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.68%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.2項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品熊果酸峰面積積分值的RSD為0.67%。結(jié)果表明熊果酸至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的熊果酸對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.5%，RSD為0.76%。

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定樂山梔子三批樣品中熊果酸的含量，含量為0.266mg/g、0.256mg/g、0.255mg/g。

3 討論

分別考察甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（80∶20∶0.02∶0.01），甲醇-0.1%磷酸水溶液（30：70），甲醇-水-磷酸（30：70：0.1），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（70∶30∶0.02∶0.01），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（含三乙胺0.5%，磷酸調(diào)pH至3.0）（40：60）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-0.1%磷酸水溶液（21：79）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于樂山梔子中熊果酸的含量測(cè)定。樂山梔子中熊果酸的含量應(yīng)不少于0.2mg/g。

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