血府逐瘀口服液中苦杏仁苷鑒別和羥基紅花黃色素A的含量測定

鄭宏亮

摘 要：目的：建立血府逐瘀口服液鑒別和含量測定方法。方法：采用薄層色譜法對苦杏仁苷進行定性鑒別，HPLC法測定羥基紅花黃色素A含量。結果：薄層色譜法專屬性良好，能準確定性鑒別。羥基紅花黃色素A在5.03μg·mL-1～100.51μg·mL-1內呈現良好的線性關系，r=0.99994；平均回收率為99.15%，RSD（%）=0.49%。結論：該方法能準確控制血府逐瘀口服液的質量。

關鍵詞：血府逐瘀口服液；薄層色譜法；HPLC；羥基紅花黃色素A；苦杏仁苷

血府逐瘀口服液主要成份為桃仁、紅花、當歸、川芎、地黃、赤芍、牛膝、柴胡、枳殼、桔梗、甘草。具有活血化瘀，行氣止痛，用于淤血內阻，頭痛或胸痛，內熱憋悶，失眠多夢，心悸怔忡，急躁善怒。為了更好的控制本品質量，參照藥典，建立了桃仁藥材中苦杏仁苷的薄層定性鑒別，紅花藥材中羥基紅花黃色素A的含量測定方法，并對建立的方法進行了方法學驗證試驗。

1 儀器、試藥和材料

高效液相色譜儀（Agilent1200）；羥基紅花黃色素A對照品（中檢所，批號：110737-201516，含量：98%）、苦杏仁苷對照品（中檢所，批號：110820-201506）；乙腈、甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純；血府逐瘀口服液（市售樣品，規格：10ml/支）；硅膠G薄層板（100mm×200mm，青島海洋化工廠）。

2 含量測定

2.1對照品溶液的制備：取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1m1含50μg的溶液，即得。

2.2供試品溶液的制備：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加入25%甲醇適量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）15分鐘，放冷，用25%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過.取續濾液，即得。

2.3線性關系考察：精密稱取羥基紅花黃色素A對照品12.82mg，置25ml量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液0.1ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml，分別置10ml量瓶中，加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為不同濃度的對照品溶液。精密吸取10？滋l，分別注入高效液相色譜儀，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，進行線性回歸，見表1。

表1 線性關系測定結果

結果羥基紅花黃色素A在5.03μgomL-1～100.51μgomL-1的濃度范圍內呈現良好的線性關系。

2.4 重復性試驗：取同一批號樣品，平行處理6份樣品，計算羥基紅花黃色素A的含量，結果6份樣品含量的RSD小于2.0%，重復性良好，見表2。

表2 重復性測定結果

2.5 加樣回收率試驗：精密量取已知含量的本品0.5ml，共9份，分別精密加入相當于已有量80%、100%、120%水平的對照品原液各3份，分別為0.4ml、0.5ml、0.6ml（精密稱取羥基紅花黃色素A對照品28.16mg，置10ml量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品原液），置50ml量瓶中，加入25%甲醇適量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）15分鐘，放冷，用25%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過.取續濾液，即得供試品溶液。進樣20ul，記錄峰面積，以外標法計算羥基紅花黃色素A回收率，結果表明本方法回收率良好，見表3。

表3 回收率測定結果

2.6溶液穩定性考察：取本品供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12小時，將供試品溶液注入液相色譜儀，分別記錄不同時間點羥基紅花黃色素A的峰面積。結果峰面積的RSD為0.34%，小于2.0%，表明12小時內樣品供試品溶液穩定。

2.7 不同色譜柱對色譜系統的影響：分別選擇Spursil C18（4.6×250mm，5？滋m）、Diamond C18（4.6×250mm，5？滋m）、Phenomenex C18（4.6×250mm，5？滋m）色譜柱，進行測定，記錄色譜圖，計算樣品中羥基紅花黃色素A含量，結果不同色譜柱對測定結果無影響。

2.8不同高效液相色譜儀對色譜系統的影響：分別選擇Agilent1100、Agilent1200、島津20A高效液相色譜儀，進行測定，記錄色譜圖，計算樣品中羥基紅花黃色素A含量，結果不同高效液相色譜儀對測定結果無影響。

3 結論

經過方法學驗證試驗，結果苦杏仁苷的薄層鑒別方法和羥基紅花黃色素A的含量測定方法專屬性強、準確可靠，可用于血府逐瘀口服液的質量控制。

4 討論

4.1薄層定性鑒別苦杏仁苷步驟中，本品水液用乙醚振搖棄去乙醚液，主要是脫脂，否則實驗結果不會顯苦杏仁苷斑點。

4.2 羥基紅花黃色素A是具有單查爾酮苷類結構的化合物，是紅花藥材功效的最有效水溶性成分，所以本品采用25%甲醇作為溶解溶劑。由于本品成分復雜，經摸索試驗流動相采用甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（23：2：75），增加水相比例，延長保留時間，使羥基紅花黃色素A峰與相鄰色譜峰達到完全分離。

參考文獻

[1]中華人民共和國藥典（一部）.化學工業出版社， 2015：277-278.

[2]中華人民共和國藥典（一部）.化學工業出版社， 2015：151.