赤芍總苷制備工藝優化研究

王桂清

摘 要：目的：本文主要對赤芍總苷制備工藝進行優化流程做出詳細的分析。方法：本文實驗人員主要使用紫外分光光度法及其高效液相色譜法對赤芍總苷制備工藝進行優化工作做出深入研究，并得出相應的結論。結果：實驗人員通過在TPG洗脫的時候，使用UV光譜法來對洗脫液里面存在的PAE進行精準的研究，進而收集諸多的洗脫液，將PAE的純度加以提升，和TLC及其HPLC方法進行對有著較多的優勢，例如方法簡便、有著較強的靈敏性。結論：本文實驗人員主要使用了大孔吸附樹脂當作分離手段，并設計相應的正交實驗，對溶劑提取、次數等諸多因素進行研究，將PAE當作控制指標進行論述，并采取紫外光譜及其高效液相色譜法進行檢測，而且對TPG制備工藝加以完善，進而獲得制備TPG最為完善的工藝。

關鍵詞：赤芍總苷；芍藥苷；紫外分光光度法；高效液相色譜法；正交設計；大孔吸附樹脂

通常情況下，赤芍屬于一種常見的中藥，主要來自于毛茛科植物芍藥亦或是相關川赤芍的干燥根里面。而以往醫學認為赤芍這種中藥有著較多的作用，例如可以起到散淤止痛的作用，所以在臨床中得到了大力的推廣。赤芍總苷經過實驗人員提取以后大部分為水提亦或是醇提后進行萃取的制備方式，依據相關報道將乙醇提取以后通過采取大孔吸附樹脂將白芍總苷分離出來，但是赤芍總苷的制備方式存在較大的差異性，得率之間存在一定的區別。基于此，本文實驗人員主要使用了大孔吸附樹脂當作分離手段，并設計相應的正交實驗，對溶劑提取、次數等諸多因素進行研究，將PAE當作控制指標進行論述，并采取紫外光譜及其高效液相色譜法進行檢測，而且對TPG制備工藝加以完善，進而獲得制備TPG最為完善的工藝。

1 儀器、藥品與試藥

1.1 儀器設備

SSI222HPLC儀，SSI525UV/Vis檢測器，ANASTARChromatographyDataSystem軟件，OV-100Suntek柱溫箱，S-GelC18，5μm色譜柱；UV-2401PC紫外分光光度計。

1.2 藥材、藥品與試劑

甲醇（色譜純）：批號971111，上海化學試劑研究所；藥用95酒精；無水乙醇（分析純）：批號001201，蚌埠化學試劑廠；芍藥苷對照品（含量測定用）：批號0736-20015，中國藥品生物制品檢定所；純化水；赤芍飲片。

2 方法與結果

2.1 TPG制備

2.1.1 正交設計。考察提取溶劑乙醇濃度、體積、提取時間、提取次數對TPG得率的影響，每因素設計3水平，因此采用四因素三水平表L9（34）。

2.1.2 選擇大孔吸附樹脂。取處理好的大孔吸附樹脂D101和DA201各100g，分別裝入層析柱（3cm×100cm）中備用。乙醇提取的干膏各4.0g，加熱水溶解后，滴加入大孔樹脂柱，平衡2h，加水洗脫，UV檢測是否有PAE洗出。水洗至近無色，再分別用20的乙醇洗脫，以UV定性檢測，收集含PAE洗脫液，以HPLC檢測PAE含量，減壓回收乙醇后，置真空干燥箱干燥（68°C，-0.08MPa）干燥24h，稱重。實驗重復3次，比較樹脂差異。實驗表明，大孔吸附樹脂DA201與D101兩種型號分離TPG無明顯差異，用20乙醇作洗脫液洗脫PAE，DA201型洗脫液用量，洗脫時間明顯低于D101型，因此選擇DA201型。

2.1.3 確定TPG洗脫液。取6份赤芍醇提干膏各4g，水溶，緩慢加入6支DA201MAR柱（已分別編號），平衡2h，水洗，UV定性檢測水洗液是否含有PAE至Molisch反應呈陰性且洗脫液澄清，分別改用10，20，40，80，90等不同濃度乙醇洗脫，UV定性檢測PAE并確定收集洗脫液體積，以HPLC檢測PAE含量，減壓回收溶劑，置真空干燥箱（68°C，-0.08MPa）干燥24h，稱重，為TPG得率。表4結果表明，洗脫溶劑乙醇濃度在20以上，均有PAE洗脫出，乙醇濃度增高，雜質含量增高，同時發現洗脫液顏色增深。故確定20乙醇為TPG洗脫液。

2.1.3 正交設計提取分離TPG。取赤芍飲片，粉碎成粗粉（過20目篩），加8倍量乙醇，浸漬1h，回流1h，抽濾分離出提取液，提取3次（實際操作按正交表），合并濾液，減壓回收溶劑得干膏，以適量水加熱溶解后，緩慢加到處理好的樹脂柱（干膏和樹脂比1∶15）上，平衡2h，先用水洗至還原糖反應成陰性（Molisch反應檢測）且洗脫液無色澄清，改用20乙醇洗至PAE量很少（UV檢測）。UV定性檢測PAE并確定收集含PAE洗脫液，以HPLC測定PAE含量，減壓濃縮得浸膏，置真空干燥箱（68°C，-0.08MPa），干燥24h即得。制得TPG性狀為淡黃、疏松粉末，味苦。正交實驗結果見表1。

表1 正交實驗結果

其中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ為各因素同水平x總和：Ⅰ=（Ⅰ2+Ⅱ2+Ⅲ2）/3-（∑x）2/9。

對正交實驗結果作方差分析，由于A，B，C，D等四因素Ⅰ值相差較大，可將Ⅰ小者合并當作誤差（Se）。

2.1.4 TPG優化工藝驗證實驗

取3份赤芍各100g，按正交優化條件70乙醇，8倍量，1h，3次進行提取，采用DA201大孔吸附樹脂進行分離，20乙醇為洗脫溶劑。結果見表2，可見優化結果較為理想。

表2 TPG優化工藝驗證實驗

3 討論

3.1 大孔吸附樹脂的選用

通常情況下，大孔吸附樹脂屬于交聯聚合物的一種，有著較強的理化行政，無論對無機鹽類還是低分子化合物都不會產生一定的影響，作為一類吸附及其篩選性能有機結合起來組成的一種分離材料，在相關領域中已經得到了普遍的認可。由于TPG作為單萜苷類化合物，實驗人員需要對洗脫劑為乙醇做好充分的考慮，這個時候實驗人員應當選擇較弱亦或是非極性樹脂比較適宜，利用相關實驗對存在的DA201型大孔吸附樹脂要比非極性的D101型大孔吸附樹脂使用到TPG中較為適合，所得到的PAE含量當作82.2。

3.2 洗脫溶劑的確定

通過相關實驗對水及其系列濃度乙醇存在的洗脫效果進行了詳細的對比，依據產生的結果可以得知濃度高于20乙醇無法把TPG從相關樹脂柱通過洗脫的方式進行分離，而水不會通過TPG的方式從樹脂柱上面洗脫出來；倘若乙醇濃度較高的情況下，那么就會很容易通過TPG方法從樹脂柱做好洗脫作業，然而雜質含量也在明顯的提升。為了進一步提升TPG中PAE純度實驗選擇了具有代表性的20乙醇當作相應的洗脫溶劑。依據相關報道可以得知：所含有的乙醇濃度在大于30的時候，那么無法采取TPG方法從樹脂柱進行洗脫，和該實驗產生的結果存在一定的差異，這種情況的出現可能因為樹脂型號有著不同的型號。

3.3 紫外定性檢測洗脫液

實驗人員通過在TPG洗脫的時候，使用UV光譜法來對洗脫液里面存在的PAE進行精準的研究，進而收集諸多的洗脫液，將PAE的純度加以提升，和TLC及其HPLC方法進行對有著較多的優勢，例如方法簡便、有著較強的靈敏性。

3.4 正交設計的采用

所謂正交設計，簡單的說是具有諸多因素實驗設計的科學手段。和單因素比較法進行詳細的比較，為可以對實驗里面的規律提供方便，對具有的綜合影響進行明確，避免花費較多的實驗次數，進而起到節約資金的作用。依據該實驗通過采取TPG的方式進行提取，并且選擇了四因素三水平正交表，也就是即L9（34）表，能夠在某種程度上達到制備工藝的效果，采取TPG的方法得率是5.6。

參考文獻

[1]張虹，柳正良，王洪泉.大孔吸附樹脂在藥學領域的應用[J].中國醫藥工業雜志，2001（01）.

[2]馬雙成，鄧少偉.赤芍總苷的生產工藝條件研究[J].中草藥，1998（10）.

[3]金繼曙，都述虎，種明才.用大孔吸附樹脂分離白芍總甙[J].中國中藥雜志，1994（01）.