淺談辛伐他汀對大鼠脂肪源性干細胞的增殖和成骨分化的影響

付明

目前有很多關于辛伐他汀誘導骨髓間充質干細胞成骨誘導分化及增殖的報道，但是對于辛伐他汀影響脂肪源性干細胞成骨分化的報道比較少，此次文章對辛伐他汀影響大鼠脂肪源性干細胞的增殖和成骨分化開展了研究分析，有以下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

主要試劑：辛伐他汀（默沙東），I型膠原酶（Sigma），CCK-8（ 碧 云 天 ），RNAiso Plus（TAKARA）， PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser（TAKARA）， SYBR〇 R Premix Ex TaqTM II （TAKARA），茜素紅S（Sigma），引物合成（上海introvigen），常規細胞培養器械。

1.2 方法

將大鼠用0.6%戊巴比妥鈉（0.5 ml/100 g）腹腔注射麻醉，雙側腹股溝去毛，消毒鋪單，取腹股溝直切口，分離皮下脂肪，操作注意無菌原則。將約1.2 g脂肪移入超凈臺，含2%雙抗的PBS漂洗5遍，剔除結締組織和血管，然后剪碎。PBS沖洗2編后，加入3倍體積的0.15% I型膠原酶，37℃恒溫震蕩（250 rpm）消化60 min，待消化液渾濁。白色液性脂肪漂浮于表層，殘余組織沉淀于底層。用含10% FBS+1%雙抗的低糖DMEM培養基混懸細胞，70 μm篩網過濾[1]。從第二代開始，消化后按每1×106個細胞每支凍存管的量凍存細胞，長期保存。后將細胞分為5組，前4組分別以0.01μm/L、0.1μm/L、1μm/L、10μm/L濃度辛伐他丁培養，第5組不加入任何其他干預藥物，為對照組。

1.3 觀察指標

將實驗組和對照組ADSCs分別接種于24孔板中,接種密度為5×104個細胞/孔,并設調零孔和對照孔，運用手持式細胞計數儀計數細胞分別計算各組第1天、第7天細胞數量。

2 結果

在接種24 h后，細胞體比較小，形狀為星形，存在漂浮脂肪液滴。接種48 h之后，部分細胞出現集落生長，細胞的體積不斷增加。接種72 h后，細胞生長呈現纖維狀，部分聚集成團。經過7天培養，梭形細胞快速生長，細胞密度達到80%，可以進行傳代。辛伐他丁檢測顯示，7 d時0.01 μm/L組細胞個數為（2.19±0.14）×104個，0.1μm/L組的ADSCs細胞個數為（1.98±0.12）×104個，細胞個數最多。隨著辛伐他汀濃度的增加，ADSCs細胞個數逐漸降低，1 μm/L組細胞個數為（1.86±0.11）×104個，與對照組的ADSCs（1.83±0.13）×104個無差異性，10 μm/L組ADCSs的細胞個數為（1.58±0.08）×104個，已出現明顯的抑制作用。

3 討論

目前臨床對于干細胞的研究不斷深入，脂肪源性干細胞被廣泛關注[2]，對于脂肪肝細胞的研究持續了很久，沒有停止過。脂肪組織是中胚層產物，在組織中廣泛存在，因為中胚層來源屬性，ADSCs的跨胚層多向分化能力較強[3]。ADSCs組織具有很好的相容性，可以保持良好生物相容性并且不會有免疫排斥情況出現。芬蘭的一位外科醫生進行了自體脂肪干細胞異位誘導修復上頜骨大面積骨缺損，其效果比較理想[4]。還有研究是將ADSCs注射到小鼠皮下，一年內沒有出現瘤體[5]。

他汀類藥物可以改善血管內皮功能，消除血管炎癥[6-8]。他汀類藥物可以影響骨髓間充質干細胞的成骨分化。我們就其是否能夠影響脂肪源性干細胞的成骨能力進行了分析，結果顯示，隨著辛伐他汀濃度的增加，ADSCs能力降低，1μm/L組與對照組的ADSCs增殖能力無差異性，經過7天培養，梭形細胞快速生長，細胞密度達到80%，可以進行傳代。

綜上所述，辛伐他汀安全性高，獲取容易，促成骨效果好，因此在組織工程化骨應用方面具有很高的價值。

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