探索頭孢克肟顆粒測定高分子聚合物的方法

楊慧

摘 要：目的：建立頭孢克肟顆粒檢測高分子聚會物的方法。 方法：用葡聚糖凝膠G-10為填充劑，以含3.5%硫酸銨的pH7.0的0.1mol/l磷酸鹽緩沖液[0.1mol/l磷酸氫二鈉溶液：0.1mol/l磷酸二氫鈉溶液=（61：39）]為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，流速為每分鐘0.8ml，檢測波長為254nm，取1.5mg/ml藍(lán)色葡聚糖2000溶液100～200μl，注入液相色譜儀，分別以流動(dòng)相A、B進(jìn)行測定，記錄色譜圖。 結(jié)果：頭孢克肟顆粒聚會物<0.3%。該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高，適用于頭孢克肟顆粒中高分子聚合物的控制。

關(guān)鍵詞：頭孢克肟； 高分子聚合物； 凝膠色譜法

β- 內(nèi)酰胺類抗生素是目前臨床上最常用的抗感染藥物，但它們在臨床上常引發(fā)過敏性休克反應(yīng)，嚴(yán)重威脅患者的安全[1]。經(jīng)幾十年的研究證明，引發(fā) β- 內(nèi)酰胺類 抗生素速發(fā)型過敏反應(yīng)的過敏原與其中存在的高分子聚合物含量有關(guān)。因此藥物中高分子聚合物的測定越來越引起人們的重視[2]。

頭孢克肟是第三代口服頭孢菌素，抗菌譜廣，對化膿性鏈球菌、肺炎球菌、無乳鏈球菌、淋球菌、流感桿菌、 摩拉卡他菌、大腸埃希菌、肺炎桿菌等多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌具有良好抗菌活性[3]。由于頭孢克肟與頭孢他啶的化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，并且均屬于頭孢類藥品，所以頭孢克肟聚合物的方法參照頭孢他啶的標(biāo)準(zhǔn)并加以改進(jìn)優(yōu)化。

用葡聚糖凝膠G-10為填充劑，以含3.5%硫酸銨的pH7.0的0.1mol/l磷酸鹽緩沖液[0.1mol/l磷酸氫二鈉溶液：0.1mol/l磷酸二氫鈉溶液=（61：39）]為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，流速為每分鐘0.8ml，檢測波長為254nm，取1.5mg/ml藍(lán)色葡聚糖2000溶液100～200μl，注入液相色譜儀，分別以流動(dòng)相A、B進(jìn)行測定，記錄色譜圖。按藍(lán)色葡聚糖2000峰計(jì)算理論板數(shù)均不低于500，拖尾因子應(yīng)小于2.0。在兩種流動(dòng)相系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000峰的保留時(shí)間的比值均應(yīng)在0.93～1.07之間，對照溶液主峰和供試品溶液中聚合物峰與相應(yīng)色譜系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000峰的保留時(shí)間的比值均應(yīng)在0.93～1.07之間。另以流動(dòng)相B為流動(dòng)相，精密量取對照溶液100～200μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于5.0%。

對照溶液的制備取頭孢他啶對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含頭孢他啶0.1mg的溶液。

測定法精密稱取本品約0.2g與碳酸鈉20mg，置10ml量瓶中，加水適量使溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻。立即精密量取100～200μl注入液相色譜儀，以流動(dòng)相A為流動(dòng)相進(jìn)行測定，記錄色譜圖。另精密量取對照溶液100～200μl注入液相色譜儀，以流動(dòng)相B為流動(dòng)相進(jìn)行測定，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含頭孢克肟聚合物以頭孢他啶計(jì)不得過0.3%。

1、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用藍(lán)色葡聚糖2000的溶液（1mg/ml）作為參比溶液，測定在流動(dòng)相A、流動(dòng)相B中的Kav=0的保留時(shí)間，并計(jì)算出理論板數(shù)及拖尾因子。

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中規(guī)定，在兩種流動(dòng)相系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000峰與相應(yīng)色譜系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000峰的保留時(shí)間的比值均應(yīng)在0.93～1.07之間。

藍(lán)色葡聚糖2000在流動(dòng)相B中的保留時(shí)間t=9.40；藍(lán)色葡聚糖2000在流動(dòng)相A中的保留時(shí)間t=9.28 ，9.40÷9.28=1.01對照品主峰的保留時(shí)間t=9.35 ，9.40÷9.35=1.01 流動(dòng)相A中樣品的保留時(shí)間t=9.38，9.28÷9.38=0.99。

2、對照品重現(xiàn)性

以流動(dòng)相B為流動(dòng)相，精密量取對照品溶液200μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于5.0%。對照品溶液的峰面積分別為57536.45、57288.03、54903.12、56601.03、58822.34、57030.19結(jié)果表明樣品RSD為2.5%﹤5.0%，符合規(guī)定。

3、對照品線性

線性關(guān)系考察：制備系列的對照溶液，濃度范圍為規(guī)定濃度的20%～200%，供制備7份樣品，以測得的峰面積與溶液濃度進(jìn)行線性回歸，分析是否呈線性。

對照品濃度分別為20%、50%、80%、110%、140%、170%、200%，對照品峰面積為10160.34、26647.15、45056.54、60666.65、74344.66、94874.34、111845.50。線性方程為y=560474x-1138.50，R2=0.9985。結(jié)論：結(jié)果表明，樣品在濃度為20%～200%時(shí)，線性良好。

4、最低檢測限與測定量：

最低檢測限與測定量（濃度）：把已知低濃度的試樣測得的信號與空白樣品測得的信號比較，計(jì)算出能被可靠測出的最低濃度或量，以信噪比3：1相應(yīng)濃度確定最低檢測限，以檢測限×103 的量或濃度作為測定量（濃度）。

檢測限：基線峰高：0.02 mv；對照品濃度：0.1 mg/ml；對照品峰高：0.10 mv；

最低檢測限濃度：0.1×10-6 mg/ml；測定量濃度：0.1×10-3 mg/ml。

5、F值測定的重現(xiàn)性考察：

F值測定的重現(xiàn)性考察：F值為對照溶液的濃度（mg）與測得的峰面積的比值，要求日內(nèi)、日間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在5%以內(nèi)。配制6份對照品溶液，日內(nèi)進(jìn)樣，由同一人員操作。

日內(nèi)重現(xiàn)性：日內(nèi)C（mg）分別為0.01989、0.01977、0.01980、0.01983、0.01992、0.01994對應(yīng)的峰面積分別為59007.12、55593.18、57545.82、58787.87、59869.40、60691.71，F(xiàn)值為3.370780、3.556192、3.440736、3.373149、3.327242、3.285457；日間重現(xiàn)性：日間C（mg）分別為0.01989、0.01982、0.01997、0.01999、0.01977、0.01995對應(yīng)的峰面積分別為59015.32、58042.38、62525.71、62746.50、55947.47、60681.19，F(xiàn)值為3.370311、3.414746、3.193886、3.185835、3.533672、3.287674；結(jié)論：F值重現(xiàn)性RSD為3.5%﹤5%，符合規(guī)定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙靜，王晶，陳海怡，等. β- 內(nèi)酰胺類抗生素的皮膚過敏試驗(yàn)現(xiàn)狀及建議[J]. 中國臨床藥理學(xué)雜志，2009，12（9）： 158-160.

[2] 王宏. β- 內(nèi)酰胺類抗生素皮膚過敏試驗(yàn)探討[J]. 醫(yī)藥論壇雜志，2006，27（17）：125-126.

[3] 李萇清，薛青山，張陸勇，等. 含 β- 內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)方抗生素中高聚物的研究進(jìn)展[J]. 國外醫(yī)藥：抗生素分冊， 2013，34（2）：53-59.endprint