DRD4基因rs752306多態性與蒙古族學齡兒童攻擊行為的相關性研究

王燕

摘要：為了解DRD4基因rs752306多態性與蒙古族學齡兒童攻擊行為的相關性，選取內蒙古赤峰市天山鎮蒙古族實驗小學302名7～12歲蒙古族兒童為調查對象，運用Achenbach兒童行為量表（CBCL）評價了兒童攻擊行為得分;采集所有兒童口腔上皮細胞并提取DNA，采用iMLDR法測定了位點基因型;利用廣義線性模型（GLM）檢驗了主效應及交互作用大小。研究結果發現：DRD4基因rs752306住點有三種基因型GG、GA、AA，攜帶A等位基因的蒙古族學齡兒童攻擊行為得分高于其他兩種基因型;蒙古族學齡兒童年齡和父親職業對蒙古族兒童攻擊行為有影響，差異具有統計學意義（P<0.05）;蒙古族兒童年齡和rs752306多態性的主效應及兩者的交互作用對蒙古族兒童攻擊行為有顯著影響（P<0.05）。因此，DRD4基因rs752306多態性與蒙古族兒童攻擊行為問題可能存在一定相關性。

關鍵詞：蒙古族;學齡兒童;攻擊行為;基因多態性

中圖分類號：R72

文獻標識碼：A

文章編號：1674-9944（2018）01-0220-04

1 引言

攻擊行為可以用多種方式評估，研究采用蘇林雁等標準化的常模評價兒童行為問題得分高低。攻擊行為是兒童青少年最常見的一種社會行為，其發生率較高。學齡期兒童的攻擊行為會持續影響其身心發展，導致青少年期的行為問題及成年期精神障礙甚至犯罪等[1]。雙生子研究表明，兒童攻擊行為的遺傳度為中等偏高水平51%～72%[2，3]。

近年來，相關研究發現，多巴胺D4受體（D4 dopamine receptor，DRD4）基因多態性與不同行為存在相關性，包括暴力攻擊行為[4]、帕金森病[5]、酒精中毒[6]、注意缺陷多動障礙[7]、精神分裂癥[8]、雙相情感障礙[9]、獵奇的人格特征[10]等。目前共發現DRD4基因有21種多態性，非編碼區存在至少18種多態性，其中rs752306（ MAF—0.18）位于DRD4基因第1內含子中，為非編碼標記位點，但其位置與編碼區非常接近。rs752306多態性干擾轉錄因子與至少5種以上位點的結合。Zhang等11]研究發現，DRD4基因rs752306多態性與兒童智力發育遲緩存在弱相關性。Docherty等[12]對基因間協同作用的機制進行了探究，發現rs752306多態性與DNA甲基化相關。目前，國內外對兒童攻擊性行為的同類研究較少，內蒙古自治區是一個以蒙古族為主體，多民族聚居的少數民族地區，擁有多元化的文化特點。不同民族存在遺傳背景、文化等差異，對個體的行為發展可能會造成一定影響。因此，本研究以蒙古族學齡兒童為研究對象，報道DRD4基因rs752306多態性與攻擊行為的相關性，對于加強相關研究深入了解蒙古族學齡兒童心理行為問題的影響因素將有重要意義。

2 材料與方法

2.1 研究對象

以學校為單位，隨機整群抽取赤峰市天山鎮蒙古族實驗小學7～12歲蒙古族學齡兒童進行問卷調查及口腔上皮組織采集，有效樣本量302名，兒童平均年齡為9. 22±1.52歲。按照統一標準篩選，被試兒童直系三代均為蒙古族，且所有個體均無心理疾病和明顯行為異常，家中無精神疾病史。本研究均在取得學校、家長的知情同意基礎上完成。

2.2 研究方法

2.2.1 問卷調查

由家長填寫Achenbach兒童行為量表（ChiLd Be-havior Checklist，CBCL） [13]并計算攻擊行為得分，得分越高，表明攻擊行為水平越高。該量表具有較高的信度和效度。同時，家長填寫家庭一般情況調查問卷，問卷中包括兒童性別、年齡、父母職業及文化程度等一系列家庭一般狀況。

2.2.2 全基因組DNA提取

兒童用清水漱口后，采用一次性口腔拭子刮取口腔上皮細胞，置于含樣本保存液的離心管中保存。天根試劑盒提取全基因組DNA，利用紫外分光光度計、瓊脂糖凝膠電泳檢測其濃度和純度。

2.2.3

DRD4基因rs752306多態性檢測

檢索與DRD4基因相關的單核苷酸多態性（SingleNucleotide Polymorphisms，SNP）位點，采用的iMLDR（improved multiple ligase detection reaction）法測定位點基因型，上游引物：5- AGACGCCCACCAACTC-CTTCAT -3;下游引物：5- GTAGGGACAGGGACGGGGAAC -3。聚合酶鏈式反應（ polymerasechain reaction，PCR）體系：lx GC -I buffer，3.o mMMg2+，0.3 mM dNTP，l U HotStarTaq polymerase，lμL樣本DNA和上下游各1μL引物。PCR循環程序：95℃2 min預變性，94℃20 s變性，65℃40 s退火，72℃1.5 min延伸，72℃2 min后延伸，4℃forever。然后進行產物純化：在20 μL PCR產物中加入5 U SAP酶和2 U Exonuclease I酶，37℃溫浴th然后75℃滅活15 min。連接引物：FC; TTCCGCGTTCGGACT-GATATGGCYGCACGAGCATCCTGAC

FT： TACGGTTATTCGGGCTCCTGTGGCYGCACGAGCATCCTGAT

RP： CTGCTCCTCGGTTCCCCGTTTTTTTTT

連接反應體系：連接緩沖液lμL、高溫連接酶0. 25μL、5連接引物混合液（μM）0.4μL，3連接引物混合液（2 μM）O.4 μL、純化后多重PCR產物2μL、ddH206μL混勻。連接程序：94℃1 min變性，56℃4 min退火延伸，38次循環，4℃保存。取0.5μL稀釋后的連接產物，上ABI3730XL毛細管電泳儀，收集數據分析。

2.3 統計學分析

使用SPSS 16.O統計軟件進行數據處理與分析。運用KoLmogorow Smirnov檢驗對攻擊行為得分進行正態性檢驗。單因素分析采用非參數檢驗，兩個獨立樣本比較采用Kolmogorov - Smirnov Z檢驗（簡稱K-S檢驗），多個獨立樣本間比較采用Kruskal Wallis檢驗（簡稱K-W檢驗）;多因素分析采用廣義線性模型（GeneraLized Linear Models，GLM）檢驗主效應及交互作用大小。

3 結果

3.1 Hardy- Weinberg平衡的吻合度檢驗

對DRD4基因rs752306位點進行Hardy - Weinberg平衡吻合度檢驗。結果顯示，該位點的基因型（GG、GA、AA）期望值與觀測值吻合度較好（x²=2. 733，P>O05），符合Hardy- Weinberg平衡定律。

3.2 DRD4基因rs752306多態性對蒙古族學齡兒童攻擊行為得分的影響

經非參數檢驗分析，DRD4基因rs752306多態性與蒙古族兒童攻擊行為問題得分可能存在相關性（ x²=5.908，P=O.05），P值接近統計檢驗臨界值（見表1），攜帶A等位基因的蒙古族學齡兒童攻擊行為得分高于其他兩種基因型。

3.3 影響蒙古族學齡兒童攻擊行為得分的單因素分析

以蒙古族學齡兒童攻擊行為得分為因變量，以可能影響攻擊行為得分的性別、年齡、父母職業、父母文化程度等因素為自變量，進行單因素分析。結果顯示，年齡、父親職業是蒙古族兒童攻擊行為得分的影響因素（P<0.05），11～12歲蒙古族兒童攻擊行為得分明顯高于其他年齡段，父親職業為企事業的蒙古族兒童攻擊行為得分明顯低于其他職業，見表2。因此，將年齡分為低年齡段（7～lO歲）和高年齡段（11～12歲）兩組，父親職業分為“企事業”和“其他”兩組進行多因素分析。

3.4 DRD4基因rs752306多態性與環境因素交互作用對蒙古族學齡兒童攻擊行為的影響

將蒙古族兒童攻擊行為得分作為因變量，年齡、父親職業為自變量，進行廣義線性模型（Generalized Line-ar Models，GLM）分析主效應及交互作用對攻擊行為的影響。由于rs752306的AA基因型出現次數很少，因此，在進行主效應與交互作用時將AA基因型與GA基因型進行了合并。結果顯示，兒童年齡和rs752306多態性的主效應及兩者的交互作用對蒙古族兒童攻擊行為有顯著影響（P<0.05），見表3。

4 討論

據WHO報告顯示，全世界10%～20%的兒童青少年患有精神障礙，精神疾病是導致自殘、自殺等的主要原因。由中國兒童中心（CNCC）最近公布的數據顯示，在中國至少有3000萬名17歲以下兒童青少年表現出一系列的行為問題[14]。近年來，隨著城鎮化進程加快，大多數來自牧區或農村的蒙古學齡兒童到城市求學，他們寄宿在學校、親戚家或者由爺爺奶奶等陪讀，父母沒有更多時間照顧兒童的身心問題，導致父母與兒童關系越來越緊張，兒童出現的心理行為問題可能得不到及時指導和治療。攻擊行為是一種最常見的心理行為問題，嚴重會導致暴力、犯罪等行為的發生[15]。Ettekal等[1]研究發現，兒童早期的攻擊行為會隨年齡不斷增加，持續到兒童后期且更具有敵意。與本研究結果相似，11～12歲兒童的攻擊行為得分明顯高于其他年齡段。因此，兒童心理行為問題應早預防、早發現及早治療，對其健康成長非常重要。此外，父親職業是企事業的蒙古族兒童攻擊行為得分低于其他父親職業的兒童（P

DRD4基因位于人類第11號染色體短臂15區5帶（11P15.5），具有5個外顯子，4個內含子。DRD4基因mRNA主要集中分布于大腦皮層的邊緣系統，提示在認知與情緒方面具有重要作用[17]。目前，DRD4基因第3外顯子48bp多態性及編碼區SNP位點如rs1800955、rs936461是注意缺陷多動障礙、攻擊行為、認知能力及人格特質等研究的熱點[18～20]，而位于非編碼區SNP位點相關研究較為罕見，非編碼區序列有與RNA聚合酶的結合位點，它的調控作用不容忽視。研究表明rs752306多態性具有干擾轉錄因子與位點結合的功能[12]。

本研究中rs752306多態性基因型出現頻率（GG：79.14%，GA：18. 54%，AA：2.31%）與Lee等[21]對韓國人群研究結果基本一致。另外，經非參數檢驗發現，rs752306多態性與攻擊行為可能存在相關性，攜帶A型等位基因的蒙古族學齡兒童攻擊行為得分最高，更容易發生攻擊行為。因此，對于攜帶有A型等位基因的兒童，教養時更應注意適度關注兒童的發展，給與其多方面的愛護，從而減少兒童心理行為問題的發生。本研究還發現，rs752306多態性與年齡的交互作用對攻擊行為得分的影響具有統計學意義（P<0.05），提示攜帶A等位基因的高年齡段蒙古族兒童可能更容易發生攻擊行為，G等位基因的保護作用只有在低年齡段時才能體現。因此，攜帶A等位基因蒙古族兒童攻擊行為在低年齡段就應該需要得到較多關注。

以往的研究中忽略DRD4基因非編碼區多態性的作用及功能，本研究以蒙古族學齡兒童為對象探討了rs752306多態性與攻擊行為的相關性問題，其研究結果可為相關研究提供一定線索。今后可考慮對更多蒙古族族群兒童心理行為問題進行研究，同時考慮分析多個基因對蒙古族兒童心理行為問題的協同作用，并結合蒙古族兒童家系、雙生子及表觀遺傳學的角度開展更深入的研究。

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