當歸補血湯對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用※

吳 偉劉新燦

（1 河南中醫(yī)藥大學內(nèi)科學碩士研究生2015級，河南 鄭州 450000；2 河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院心臟中心，河南 鄭州 450000）

當歸補血湯是金元時代李東垣所創(chuàng)造的益氣補血方劑，由黃芪和當歸兩味藥以5∶1組成，功用益氣生血，廣泛用于勞倦內(nèi)傷，氣血虧虛，陽浮于外之虛熱證。現(xiàn)代研究表明當歸補血湯具有促進心肌代謝，解除冠狀動脈痙攣，減輕心肌的缺血性損傷等作用[1]。本實驗通過制備缺血再灌注模型，觀察其對缺血再灌注心肌及炎癥反應(yīng)等方面的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 健康雄性SD大鼠33只，體質(zhì)量 (250±20)g，由河南省動物實驗中心提供，實驗動物使用許可證號：SCXK(豫)2014-0002。

1.2 試劑、藥物、儀器 CK，LDH試劑盒（上海科興生物科技）；IL-6，IL-10，TNF-ɑ試劑盒 （美國R&D公司）。當歸和黃芪均來至河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院中藥房，采用黃芪：當歸=5∶1的比例，純水煎煮濃縮至3 g生藥/10 mL。動物心電圖機（上海茂生生物科技發(fā)展有限公司），小型動物呼吸機（瑞沃德生命科技有限公司）。

1.3 分組、給藥及造模 將33只大鼠隨機分3組，每組11只，即假手術(shù)組、模型組、當歸補血湯組。環(huán)境條件相同，常規(guī)飼養(yǎng)。當歸補血湯組按10 mL/Kg灌胃給藥，1日/次，連續(xù)給藥2周。藥物劑量換算按70 kg成人每日1劑用量換算出大鼠1日用量 (相當于人單位體重用量的6.3倍)。假手術(shù)組、模型組給予等容積生理鹽水。術(shù)前12 h禁食。最后一次給藥后2 h，進行實驗。大鼠稱量后，給予10%水合氯醛3 mL/kg麻醉，仰臥位固定、備皮、消毒。用標準肢體II導聯(lián)記錄心電圖變化。切開氣管，連接動物呼吸機。左側(cè)3～4肋間剪開皮膚，鈍性分離，打開胸腔，剪開心包膜，找出冠狀動脈左前降支，假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎，其余兩組以6-0號絲線結(jié)扎分支起點外約1～2 mm，記錄心電圖，以標準Ⅱ?qū)?lián)ST段弓背上抬，T波高聳作為模型成功的標志。30 min后松開結(jié)扎，關(guān)閉胸腔，再灌注120 min。

1.4標本采集及檢測 LDH，CK檢測：實驗結(jié)束后，腹主動脈取血5 mL，3000 r/min離心10 min，利用全自動生化分析儀進行檢測。

1.5 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，統(tǒng)計學處理采用組間t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清LDH、CK、IL-6、IL-10、TNF-ɑ的變化情況 模型組CK、LDH、CK、IL-6、TNF-ɑ均顯著高于假手術(shù)組 (P＜0.01)；而IL-10含量顯著降低 (P＜0.01)。與模型組比較，當歸補血湯組能降低CK、LDH含量，但差異不具有統(tǒng)計學意義；當歸補血湯組能顯著降低IL-6及TNF-ɑ的含量 (P＜0.01)，并同時提高IL-10含量(P＜0.01）。見表1。

表1 大鼠血清LDH、CK、IL-6、IL-10、TNF-ɑ的變化情況（x±s）

2.2 心電圖的變化 缺血再灌注后所有大鼠均出現(xiàn)心電圖ST段的抬高，模型組與假手術(shù)組相比ST段抬高顯著(P＜0.05)，當歸補血湯組與模型組相比具有統(tǒng)計學差異 (P＜0.05)，說明當歸補血湯具有較明顯的改善心肌缺血的作用。見表2。

表2 各組心電圖ST段的變化 （x±s，mm）

3 討論

既往當歸補血湯在心肌缺血及再灌注損傷方面的研究大多集中于其對心功能及血管內(nèi)皮保護方面的作用[2-3]。研究表明缺血再灌注顯著加劇了心肌的炎癥反應(yīng)[4-5]。在MI/RI中，炎癥因子的升高水平與心血管事件顯著相關(guān)[6]。炎癥因子如IL-6、TNF-ɑ釋放能刺激血管內(nèi)皮細胞和白細胞表達大量粘附分子、趨化因子，致使細胞粘附、聚集，阻塞毛細血管，產(chǎn)生血管活性物質(zhì)，釋放細胞毒性物質(zhì)，從而導致組織急性損傷[7]。而細胞因子IL-10是一種多功能、多細胞源性的炎癥抑制因子，在下調(diào)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[8]。本實驗顯示，MI/RI可引起IL-6、TNF-ɑ釋放增加同時IL-10含量下降，進一步證實了炎癥因子參與再灌注引起的心肌損傷。

當歸補血湯能夠降低再灌注損傷后IL-6及TNF-ɑ含量并上調(diào)抑炎因子IL-10含量，且降低缺血后心電圖ST段抬高程度，與模型組相比均有顯著差異 (P＜0.01)，提示當歸補血湯對再灌注損傷心肌的保護作用可能與其抑制炎癥因子釋放并改善心肌缺血等作用有關(guān)。

[1]劉康永，石美雅，林邁，等.中西醫(yī)結(jié)合治療冠心病84例療效觀察[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，17(2):128.

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[3]曾宇.當歸補血湯促進心肌梗死大鼠缺血區(qū)血管生成機制的研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學，2015.

[4]譚江寧，韓玲.心肌缺血-再灌注過程中的炎癥反應(yīng)[J].心血管病學進展，2004，25(12):62.

[5]董六一，陳志武.心肌缺血/再灌注損傷與炎癥反應(yīng)[J].中國臨床藥理學與治療學，2008，13（5）:582-588.

[6]張艷芳，張俊河，楊廷桐，等.白細胞介素1及白細胞介素8在心肌缺血再灌注損傷中的動態(tài)演變及藥物干預(yù)效果[J].中國組織工程研究與臨床康復，2007，45(11):9083.

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[8]唐丹麗，劉寨華.血府逐瘀湯對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].中國中藥雜志，2010，35（22）:3077-3079.