常用的基因修飾大小鼠有哪幾大類，構建的方法如何？

答：常用的基因修飾大小鼠可以分為以下5大類，構建的方法如下：

(1)全身敲除大小鼠：目前主要采用基因編輯工具(如TALENs、CRISPR/Cas9)造成基因移碼突變，或刪除一段DNA片段來實現全身敲除基因大小鼠。

(2)條件性敲除大小鼠：通常利用基因條件性表達體系(如Cre/loxP)來實現，具體需要兩種小鼠進行交配：a. 帶有兩個loxP位點的小鼠；b. 組織特異性表達Cre的小鼠。兩種小鼠交配后繁育的子代中可實現在特定組織或器官中基因敲除。

(3)點突變敲除大小鼠：利用基因編輯工具，如CRISPR/Cas9造成DNA雙鏈斷裂，引入含有點突變的dsDNA和ssDNA，進而通過同源重組，實現基因的定點突變。

(4)轉基因大小鼠：通常采用DNA原核顯微注射將外源DNA插入到大小鼠的基因組中實現轉基因大小鼠構建。

(5)基因定點敲入大小鼠：將外源基因定點插入到ROSA26或Hipp11位點，實現外源基因穩定表達。或在基因特定位點，如內源基因啟動子后敲入外源目的基因實現基因定點敲入。