民族藥烏桕氯仿部位的化學成分研究

貴陽中醫學院藥學院，貴州 貴陽 550025

烏桕(Sapiumsebiferum(L.)Roxb)為我國原生樹種，分布于我國黃河以南各省區。同時，烏桕的栽培和利用歷史悠久，資源豐富[1-2]。作為我國最早被熟知和利用的經濟樹種之一，烏桕既可用于園林綠化，也可作為提取天然黑色染料(葉)、桕油和類可可脂(種子)的工業原料[2-3]。此外，烏桕作為民族藥被廣泛使用，極具開發潛力。如作為苗藥，又名烏交晾，其根皮用于水腫脹痛；作為侗藥，又名波安，用其樹皮治療慢性鼻炎；作為土家藥，又名木仔，取其根皮、莖葉治療內傷出血、腹部淤血和腹痛[4]。現代研究表明，烏桕在體外抑菌、抗炎、降膽固醇等展示出多樣的生理活性[3,5,6]。迄今，已從烏桕中分離鑒定化合物70余個，包括三萜、二萜、黃酮、香豆素、酚酸和甾體等成分類型[6-8]。同時，還從中發現了一系列活性天然產物，如具有抗病毒活性的12-O-十六酰基佛波醇-13-乙酸酯[9]和6-O-沒食子酰基-D-葡萄糖[10]等。為進一步探究烏桕的活性成分，本項目對烏桕枝葉氯仿部位的化學成分進行了研究，從中分離并鑒定5個化合物：莫雷亭酮(1)、3-表莫雷亭醇(2)、莫雷亭醇(3)、乙酰油酮酸(4)和β-谷甾醇(5)。其中，化合物4為首次從烏桕中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 儀器 核磁共振波譜儀(Bruker Avance 600，TMS為內標)；ESI-MS質譜儀(Waters Xevo TQ)；柱層析硅膠和GF254薄層層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；RE-5210A旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-DIII循環水式多用真空泵(鞏義市科華儀器設備有限公司)。

1.2 材料 藥材于2016年7月采自貴州省貴陽市開陽縣，經貴陽中醫學院趙俊華教授鑒定為大戟科烏桕屬烏桕(Sapiumsebiferum)的枝葉。樣品標本(201607)存于貴陽中醫學院苗醫藥重點實驗室。10%硫酸乙醇顯色劑；所有溶劑均為工業級，使用前均經過蒸餾處理。

2 提取與分離

取干燥烏桕粗粉6.6 kg，常溫下以30 L 95% EtOH浸提3次，每次7天。完畢，過濾，合并濾液，減壓條件下回收乙醇后得總浸膏449.7 g。將總浸膏分散于2 L水中，依次以石油醚(1.5 L×3)、氯仿(1.5 L×3)、乙酸乙酯(1.5 L×3)、正丁醇(1.5 L×3)進行萃取，減壓條件下分別回收溶劑后得石油醚部位(P，19 g)、氯仿部位(C，19 g)、乙酸乙酯部位(E，21 g)和正丁醇部位(B，115 g)。

氯仿部位經硅膠柱層析，以石油醚/丙酮梯度洗脫(1∶0→0∶1)后得14個亞組分C1-C14。組分C1(0.147 g)以石油醚/氯仿(3∶1)溶解，放置后析出無色針狀物，即為化合物1(33 mg)。組分C2(0.257 g)經硅膠柱層析，以石油醚/氯仿等度洗脫(2.5∶1)后得到5個亞組分C2A-C2E。其中，組分C2A進一步經重結晶(氯仿/甲醇 1∶3)后得化合物2(5 mg)。組分C3(0.381 g)經硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯(15∶1)洗脫得到5個亞組分C3A-C3E。組分C3A以石油醚/氯仿(1∶1)等度洗脫得化合物3(31 mg)。組分C3B經重結晶(氯仿/甲醇1∶3)后得到化合物4(5 mg)。組分C3D(0.139 g)先后經硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯10∶1)和重結晶(氯仿/甲醇 1∶3)后得化合物5(13 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：無色針狀結晶(石油醚/氯仿 3∶1)；ESI-MS:m/z447.4 [M+Na]+；1H NMR (600 MHz, CDCl3):δ4.66 (2H, d,J= 13.1 Hz, H-29), 1.65 (3H, s, H-30), 1.05 (3H, s, H-23), 1.00 (6H, s, H-25/26), 0.93 (3H, s, H-24), 0.91 (3H, s, H-27), 0.67 (3H, s, H-28)；13C NMR (151 MHz, CDCl3):δ217.9 (C-3), 148.0 (C-22), 109.6 (C-29), 54.9 (C-5), 54.0 (C-17), 49.8 (C-9), 48.9 (C-13), 47.9 (C-21), 47.4 (C-4), 44.3 (C-18), 42.4 (C-14), 41.7 (C-8), 40.3 (C-19), 39.7 (C-1), 36.9 (C-10), 34.2 (C-2), 32.8 (C-7/15), 27.4 (C-20), 26.7 (C-23), 24.0 (C-12), 21.7 (C-11), 21.2 (C-24), 20.9 (C-16), 19.9 (C-6), 19.8 (C-30), 16.6 (C-26/27), 15.8 (C-25), 15.3 (C-28)。以上數據與文獻報道[11]的數據基本一致，故鑒定為莫雷亭酮。

化合物2：無色針狀結晶(氯仿/甲醇1∶3)；ESI-MS:m/z449.4[M+Na]+；1H NMR (600 MHz, CDCl3): 4.68 (2H, d,J= 11.3 Hz, H-29), 3.39 (1H, t,J= 3.0 Hz, H-3), 1.67 (3H, s, H-30), 0.98 (3H, s, H-23), 0.96 (3H, s, H-26), 0.94 (3H, s, H-27), 0.84 (3H, s, H-25), 0.83 (3H, s, H-24), 0.68 (3H, s, H-28)；13C NMR (151 MHz, CDCl3):δ148.4 (C-22), 109.6 (C-29), 76.4 (C-3), 54.1 (C-17), 50.4 (C-5), 49.0 (C-9), 48.8 (C-13), 48.1 (C-21), 44.4 (C-18), 42.5 (C-14), 42.1 (C-8), 40.4 (C-19), 37.7 (C-10), 37.4 (C-4), 33.4 (C-1/7), 32.8 (C-15), 28.4 (C-23), 27.5 (C-20), 25.5 (C-2), 24.1 (C-12), 22.3 (C-24), 21.1 (C-16), 21.0 (C-11), 19.8 (C-30), 18.5 (C-6), 16.9 (C-26/27), 15.9 (C-25), 15.3 (C-28)。以上數據與其差向異構體莫雷亭醇(3-OH為β取代)相比，顯著差異體現在以下兩方面：一是H-3的偶合常數差異，前者為3.0 Hz(三重峰)，區別于后者為11.0 Hz(寬雙重峰)，表明3-OH為α取代；二是碳化學位移差異，前者C-3(ΔC-2.8)、C-5(ΔC-4.9)較后者顯著移向高場，而C-24(ΔC+6.8)則顯著移向低場。這些均這符合3α-OH取代何伯烷型三萜的規律[12]。此外，該化合物(H-21為α取代)與另一差向異構體3α-羥基何伯-22(29)-烯(H-21為β取代)的顯著差異主要體現在C-21(ΔC+1.6)和C-30(ΔC-5.5)的化學位移差異，符合H-21為α取代的何伯烷型三萜的特征[12-13]。綜上，鑒定該化合物為3-表莫雷亭醇。

化合物3：白色粉末；ESI-MS:m/z449.4 [M+Na]+；1H NMR (600 MHz, CDCl3):δ4.68 (2H, d,J= 13.4 Hz, H-29), 3.20 (1H, d,J= 11.2 Hz, H-3), 1.67 (3H, s, H-30), 0.98 (3H, s, H-23), 0.97 (3H, s, H-26), 0.94 (3H, s, H-27), 0.83 (3H, s, H-25), 0.76 (3H, s, H-24), 0.68 (3H, s, H-28)；13C NMR (151 MHz, CDCl3):δ148.4 (C-22), 109.6 (C-29), 79.2 (C-3), 55.3 (C-5), 54.1 (C-17), 50.6 (C-9), 48.9 (C-13), 48.1 (C-21), 44.4 (C-18), 42.4 (C-14), 41.9 (C-8), 40.3 (C-19), 39.0 (C-4), 38.9 (C-1), 37.3 (C-10), 33.5 (C-7), 32.8 (C-15), 28.2 (C-23), 27.6 (C-2/20), 24.1 (C-12), 21.2 (C-11), 21.0 (C-16), 19.8 (C-30), 18.6 (C-6), 16.9 (C-25), 16.8 (C-27), 16.1 (C-26), 15.5 (C-24), 15.3 (C-28)。以上數據與文獻報道[14-15]的數據基本一致，故鑒定為莫雷亭醇。

化合物4：無色針狀結晶(氯仿/甲醇 1∶3)；ESI-MS:m/z521.4 [M+Na]+；1H NMR (600 MHz, CDCl3):δ5.53 (1H, dd,J= 7.9, 3.5 Hz, H-15), 4.46 (1H, dd,J= 10.9, 5.1 Hz, H-3), 2.04 (3H, s, COCH3), 0.95 (6H, s, H-26/27), 0.94 (3H, s, H-23), 0.92 (6H, s, H-24/25), 0.88 (3H, s, H-29), 0.85 (3H, s, H-30)；13C NMR (151 MHz, CDCl3)δ184.2 (C-28), 171.2 (COCH3), 160.7 (C-14), 117.0 (C-15), 81.1 (C-3), 55.8 (C-5), 51.6 (C-17), 49.3 (C-9), 41.6 (C-18), 41.0 (C-7), 39.2 (C-8), 38.1 (C-10), 37.9 (C-1), 37.6 (C-4), 37.5 (C-13), 35.5 (C-19), 33.9 (C-21), 33.5 (C-12), 32.1 (C-29), 31.5 (C-16), 30.9 (C-22), 29.5 (C-20), 28.8 (C-30), 28.1 (C-23), 26.3 (C-26), 23.6 (C-2), 22.6 (C-27), 21.4 (COCH3), 18.9 (C-6), 17.5 (C-11), 16.8 (C-24), 15.8 (C-25)。以上數據與文獻報道[14]的數據基本一致，故鑒定為乙酰油酮酸。

化合物5：無色針狀結晶(氯仿/甲醇1∶3)；10%硫酸乙醇顯紫紅色。3種展開劑條件下(石油醚/乙酸乙酯 6∶1；石油醚/氯仿1∶1；石油醚/丙酮10∶1)，該化合物與對照品β-谷甾醇的Rf值均保持一致，故確定該化合物為β-谷甾醇。

4 討論

本項目對烏桕枝葉氯仿部位的化學成分進行了研究，并首次從烏桕中分離得到了乙酰油酮酸(4)。據報道，該化合物具有抗菌[16]、鎮痛[17]、抗腫瘤[18]，以及潛在的抗炎活性[19]。這為闡明烏桕的藥效物質基礎奠定了良好的基礎，有助于烏桕資源的開發與利用。