弓形蟲(chóng)感染對(duì)大鼠、小鼠血清一氧化氮濃度的影響

苑藝 李小靜

【摘 要】目的分析弓形蟲(chóng)感染對(duì)大鼠、小鼠血清一氧化氮濃度的影響。方法 從實(shí)驗(yàn)室中挑選出36只雌性的大鼠分成6組，每組6只。其中1組是正常對(duì)照組；2組是弓形蟲(chóng)感染組；3組是地塞米松體重，隔天給予皮下注射，2周后停止注射；4組是地塞米松，隔天皮下組織注射2周后感染弓形蟲(chóng)，并且停止注射；5組是試驗(yàn)期間，地塞米松隔天皮下組織注射；6組同五組基本相同，在隔天給予皮下組織注射后，繼續(xù)注射地塞米松。每周觀察實(shí)驗(yàn)大鼠的血液分離的血清濃度。第6周時(shí)處死大鼠，收集血清，將弓形蟲(chóng)感染鼠的腦組織均漿轉(zhuǎn)種小鼠，并以腦組織為基本模板，RCR擴(kuò)增弓形蟲(chóng)SAGI基因。雌性昆明小鼠有36只，出于弓形蟲(chóng)感染后5個(gè)小時(shí)處死6只小鼠，應(yīng)用硝酸根還原酶法測(cè)定大鼠和小鼠血清一氧化氮濃度。結(jié)果正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲(chóng)后，血清一氧化氮在第3周時(shí)逐漸提升，最后持續(xù)下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點(diǎn)時(shí)，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，應(yīng)用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴(kuò)增SADI片段。結(jié)論應(yīng)用地塞米松可以減少大鼠的血清一氧化氮情況，弓形蟲(chóng)感染也可以提升大鼠血清一氧化氮的水準(zhǔn)，注射地塞米松或是在實(shí)驗(yàn)檢測(cè)當(dāng)中出現(xiàn)未注射地塞米松的大鼠感染弓形蟲(chóng)后其血清一氧化氮的水準(zhǔn)也會(huì)逐漸升高，但升高的幅度與速度并不相同，未注射地塞米松的大鼠所呈現(xiàn)的升高趨勢(shì)更加快速。小鼠感染弓形蟲(chóng)后血清一氧化氮的情況是現(xiàn)減少再提升，但不能夠避免小鼠出現(xiàn)急性感染導(dǎo)致死亡的現(xiàn)象出現(xiàn)。

【關(guān)鍵詞】：弓形蟲(chóng)；大鼠；小鼠；血清一氧化氮

【中圖分類(lèi)號(hào)】R382 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1005-0019（2018）19-0-01

弓形蟲(chóng)是臨床中比較罕見(jiàn)性的專(zhuān)門(mén)寄生在有核細(xì)胞體內(nèi)的機(jī)會(huì)性致病原蟲(chóng)感染菌，并且可以做到長(zhǎng)時(shí)間的寄托在宿主體內(nèi)，通常也是人們畏懼的艾滋病疾病等器官移植等患者的免疫功能受到損害或是出現(xiàn)現(xiàn)感染并發(fā)癥導(dǎo)致死亡的重要因素。針對(duì)弓形蟲(chóng)的宿主來(lái)詳細(xì)分析，其分布的面積比較廣，針對(duì)不同動(dòng)物所對(duì)待的弓形蟲(chóng)存在容易感染的癥狀均不一樣[1]。在實(shí)施動(dòng)物當(dāng)中，小鼠對(duì)弓形蟲(chóng)感染后5個(gè)小時(shí)后會(huì)出現(xiàn)死亡跡象。而大鼠則是不敏感，正常大鼠感染弓形蟲(chóng)后，仍然是不明顯的臨床表現(xiàn)和身體特征。根據(jù)相關(guān)的報(bào)道顯示，大鼠對(duì)弓形蟲(chóng)具有較強(qiáng)的抵抗力，可以通過(guò)應(yīng)用免疫系統(tǒng)來(lái)壓制感染菌，腎上腺皮質(zhì)激素在注射后，可以有效減少大鼠其巨吞噬細(xì)胞的能力。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室中的DNA試劑盒作為輔助測(cè)試，應(yīng)用來(lái)自美國(guó)的生物工程公司，針對(duì)安徽生物工程有效公司出品，在實(shí)驗(yàn)室給地塞米松藥液注射，需要采用廣東南部藥液公司所出品為主。針對(duì)一氧化化氮所測(cè)定的試劑盒和硝酸銀，都是來(lái)自南京建成生物工程有效公司[2]。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

針對(duì)實(shí)驗(yàn)室中的雌性大鼠以及清潔級(jí)雌性昆明小鼠都是由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心所給予提供[3]。

2-5組大鼠均在第3周給予腹腔種植弓形蟲(chóng)株。每組大鼠在每周給予靜脈采血，待血液凝固后，離心分離血清，并且放在零下20度的設(shè)備中給予冷藏備用。在大鼠感染弓形蟲(chóng)后的4周時(shí)，向其腹腔注射適量的鈉溶液，打麻醉后打開(kāi)腹腔，腹部主動(dòng)采集血液，放到溫度低的設(shè)備中等待凝固，2個(gè)小時(shí)候后分離血清。取出弓形蟲(chóng)感染大鼠的腦組織進(jìn)行均漿，并且還要取出一部分均漿液體用于提取DNA備用。

1.4 小鼠實(shí)驗(yàn)

所有經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)小鼠的數(shù)量為30只，均在統(tǒng)一接受腹腔接種弓形蟲(chóng)RH株種植10只后，分別于感染后5個(gè)小時(shí)，處死6只，正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲(chóng)后，血清一氧化氮在第3周時(shí)逐漸提升，最后持續(xù)下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點(diǎn)時(shí)，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，應(yīng)用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴(kuò)增SADI片段。給予摘眼球采血技術(shù)，并且對(duì)于正常的昆明小鼠6只，給予摘眼球采血措施，在血清濃度上進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將1-6組大鼠和小鼠的實(shí)驗(yàn)資料以及各項(xiàng)研究數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的錄入SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，平均年齡等計(jì)量資料描述為（），檢驗(yàn)方法為t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料描述為[n（%）]，檢驗(yàn)方法為x2檢驗(yàn)。若P<0.05，代表觀察組以及對(duì)照組數(shù)據(jù)間的差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 分析6組大鼠血清一氧化氮濃度測(cè)定結(jié)果

經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)， 正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲(chóng)后，血清一氧化氮在第3周時(shí)逐漸提升，最后持續(xù)下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點(diǎn)時(shí)，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，應(yīng)用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴(kuò)增SADI片段。詳情見(jiàn)以下表格。

2.2 腦勻漿轉(zhuǎn)種小鼠結(jié)果

5組實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的大鼠腦組織勻漿轉(zhuǎn)種小鼠 ， 其余均未分離出。

2.3 分析PCR結(jié)果

經(jīng)過(guò)研究得知，4組 1-6組大鼠腦組織擴(kuò)增出大小為 522 bp 特異的 SAG1 片段， 其他大鼠結(jié)果呈現(xiàn)陰性， 其 PCR 結(jié)果見(jiàn)圖 2。

3 討論

現(xiàn)如今，對(duì)殺滅或是控制弓形蟲(chóng)速殖的機(jī)制還并不是完全的掌握，但一氧化氮被認(rèn)為在感染菌當(dāng)中起到了很重要的作用[5]。為了分析大鼠和小鼠對(duì)弓形蟲(chóng)容易感染的不同與其體內(nèi)的血清一氧化氮水平的不同關(guān)系，以此地塞米松對(duì)弓形蟲(chóng)感染對(duì)大鼠血清一氧化氮水平的有直接的影響[6]。面對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的一氧化氮廣泛的出現(xiàn)在每個(gè)組織當(dāng)中，在出現(xiàn)免疫調(diào)解等情況中起到了很多重要的影響。很多疾病因素能夠出現(xiàn)一氧化氮表達(dá)在逐漸提升，從而造成大量的血清組織濃度，從而可以有效提高激發(fā)特異性免疫功能和避免感染菌。一氧化氮在弓形蟲(chóng)感染被認(rèn)為最重要的因素附在宿主的體內(nèi)。針對(duì)實(shí)驗(yàn)的大鼠和小鼠詳細(xì)情況顯示，大鼠體內(nèi)的一氧化氮對(duì)抗體起到了很大的保護(hù)作用。

綜合上述分析可以有效明確，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為，正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲(chóng)后，血清一氧化氮在第3周時(shí)逐漸提升，最后持續(xù)下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點(diǎn)時(shí)，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，應(yīng)用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴(kuò)增SADI片段[7]。采用地塞米松可以減少大鼠的血清一氧化氮情況，弓形蟲(chóng)感染也可以提升大鼠血清一氧化氮的水準(zhǔn)，注射地塞米松或是未注射地塞米松的大鼠感染弓形蟲(chóng)后其血清一氧化氮的水準(zhǔn)也會(huì)逐漸升高，但升高的幅度與速度并不相同，未注射地塞米松的大鼠所呈現(xiàn)的升高趨勢(shì)更加快速。小鼠感染弓形蟲(chóng)后血清一氧化氮的情況是現(xiàn)減少再提升，但不能夠避免小鼠出現(xiàn)急性感染導(dǎo)致死亡的現(xiàn)象出現(xiàn)[8]。

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