尿路上皮癌胚抗原1在卵巢癌組織中的表達及臨床意義

譚歆

（江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇鎮(zhèn)江212002）

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是女性常見的惡性腫瘤，由于環(huán)境因素和生活方式的改變，其發(fā)病率呈逐年增高，且發(fā)病年齡趨于年輕化[1－2]，5年生存率低于 50%[1]。尿路上皮癌胚抗原1（urothelial carcinoembryonic antigen 1，UCA1）是一種常見的長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA），在胃癌、膽囊癌、肺癌等多種實體腫瘤中異常高表達，且與腫瘤的進展、增殖和轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[3－5]。已有文獻報道 UCA1可促進 EOC細胞株OMC685、A2780以及 SKOV3的侵襲和轉(zhuǎn)移[6]。目前關(guān)于EOC臨床標本中的UCA1表達尚不清楚，因此，本研究擬檢測EOC腫瘤標本中UCA1的表達并進一步分析其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本研究包括66例EOC患者和30例卵巢良性疾病者（作為對照），均為2008年1月至2016年12月在江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院婦產(chǎn)科就診患者。EOC患者年齡38～87歲（中位55歲）；卵巢良性疾病者年齡35～85歲（中位50歲）；患者術(shù)前均未行放療、化療，未服用激素類藥物。

卵巢組織標本均為手術(shù)切除獲得，在離體10 min內(nèi)取材，液氮速凍后于－80℃保存。所有標本均經(jīng)術(shù)后病理診斷證實。本研究經(jīng)江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院倫理委員會同意，并獲得所有受試者的知情同意。

1.2 組織RNA提取和cDNA合成

所有組織經(jīng)研磨勻漿后用Trizol試劑（美國Invitrogen公司）提取總RNA。通過紫外分光光度計評價RNA濃度和純度，并據(jù)此將濃度統(tǒng)一標準化。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系總體積為40μL，含17μL無RNA酶水、4μL隨機引物、4μL樣品RNA、8μL 5×緩沖液、4μL dNTP、1μL RNA酶抑制劑和2μL反轉(zhuǎn)錄酶（美國Thermo Fisher Scientific公司）。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物于4℃保存。

1.3 實時熒光定量 PCR（qRT-PCR）檢測 UCA1 mRNA的表達

應(yīng)用SYBR?Premix ExTaqTM試劑（日本TaKaRa公司）檢測UCA1轉(zhuǎn)錄本水平。UCA1引物序列：上游 5′-CTCTCCATTGGGTTCACCATTC-3′；下游5′-GCGGCAGGTCTTAAGAGATGAG-3′[7]。內(nèi)參基因GAPDH引物序列：上游 5′-GAAGGTCGGAGTCAACGG-3′；下游 5′-TGGAAGATGGTGATGGGAT-3′。具體反應(yīng)配比參照試劑說明書。反應(yīng)條件：95℃變性5 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s，75℃收集熒光30 s，共40個循環(huán)。每個樣品均檢測3孔，且每次實驗都含陽性和陰性質(zhì)控。UCA1相對表達水平采用2－△△CT進行分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用軟件SPSS 20.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。χ2檢驗用于分析EOC中UCA1表達與各臨床參數(shù)的相關(guān)性。非正態(tài)性連續(xù)型變量采用Wilcoxon秩和檢驗分析。依據(jù)ROC曲線和曲線下面積（AUC）評價UCA1表達對EOC的診斷意義。Kaplan-Meier生存曲線分析UCA1表達對EOC患者生存的影響。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UCA1在卵巢癌組織中的表達

由圖1可見，EOC患者卵巢癌組織中UCA1表達水平明顯高于良性疾病卵巢組織（U＝320.000，P＜0.01）。

圖1 不同卵巢組織中UCA1表達水平比較

2.2 UCA1表達對EOC的診斷價值

ROC分析提示UCA1診斷EOC的AUC值為0.838（95%CI：0.749～0.927，P＜0.05）。見圖2。

圖2 UCA1表達診斷上皮性卵巢癌的ROC曲線

將UCA1表達水平的臨界值設(shè)定為0.463，通過ROC曲線區(qū)分EOC和卵巢良性疾病者的靈敏度為53%，特異性為90%。結(jié)果提示UCA1表達能較好地判別EOC患者與卵巢良性疾病者，并可能是鑒別EOC與非腫瘤疾病的潛在標志物。

2.3 UCA1表達與臨床參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系

以截斷值0.463為界，將EOC患者分為UCA1高表達組和低表達組，分析兩組間臨床病理參數(shù)的差異。兩組患者年齡、腫瘤直徑、血漿CA125水平以及腹腔積液等差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），而UCA1異常表達與FIGO分期、腫瘤分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05）。見表1。

Kaplan-Meier生存分析顯示，UCA1高表達者總體生存、無病生存較UCA1低表達者明顯縮短（P＝0.004，P＝0.037）。見圖3。

表1 UCA1表達與卵巢癌患者的臨床參數(shù)分析

圖3 UCA1表達對EOC患者總體生存和無病生存的影響

3 討論

UCA1在多種實體腫瘤及血液腫瘤中表達顯著上調(diào)，并作為促癌基因參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[8－9]。而UCA1在EOC中的研究也得到越來越多的關(guān)注。Zhang等[10]發(fā)現(xiàn)UCA1過表達與EOC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期以及化療反應(yīng)相關(guān)。本研究進一步證實 UCA1在 EOC中呈過表達，且高水平的UCA1與較晚的臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移以及低分化有關(guān)。此外，ROC分析也提示UCA1過表達可輔助鑒別診斷EOC患者和卵巢良性疾病患者，具有一定的臨床應(yīng)用價值。

除扮演癌基因角色外，UCA1也與患者腫瘤耐藥及預(yù)后密切相關(guān)[9，11]。研究報道UCA1過表達與食管癌、下咽癌、骨肉瘤等惡性腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)[12－14]。本研究發(fā)現(xiàn)UCA1過表達的EOC患者總體生存和無病生存顯著縮短，提示UCA1表達也是EOC患者預(yù)后監(jiān)測的重要分子標志。既往已有報道指出UCA1可競爭性抑制miR-485-5p從而上調(diào)癌性蛋白編碼基因MMP14，促進EOC細胞的遷移和侵襲[6]。Wang等[7]也揭示 UCA1過表達可增強EOC細胞株SKOV3對順鉑的耐藥性，并且抑制細胞凋亡。上述研究結(jié)果間接闡述了UCA1過表達致EOC患者預(yù)后不良的潛在機制，以及UCA1在EOC疾病發(fā)生中的作用。本研究中UCA1過表達與EOC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而關(guān)于其具體的作用機制是否與miRNA調(diào)節(jié)有關(guān)或存在其他的作用途徑，仍有待后續(xù)深入研究。

綜上所述，本研究表明lncRNA UCA1過表達是EOC患者的常見分子事件，可作為輔助診斷EOC以及判斷預(yù)后的生物分子標志。

[1]Torre LA，Bray F，Siegel RL，et al.Global cancer statistics，2012[J].CA Cancer JClin，2015，65（2）：87－108.

[2]Bast RC Jr，Hennessy B，Mills GB.The biology of ovarian cancer：new opportunities for translation[J].Nat Rev Cancer，2009，9（6）：415－428.

[3]Li C，Liang G，Yang S，et al.Dysregulated lncRNAUCA1 contributes to the progression of gastric cancer through regulation of the PI3K-Akt-mTOR signaling pathway[J].Oncotarget，2017，8（55）：93476－93491.

[4]Cai Q，Jin L，Wang S，et al.Long non-coding RNA UCA1 promotes gallbladder cancer progression by epigenetically repressing p21 and E-cadherin expression[J].Oncotarget，2017，8（29）：47957－47968.

[5]Li D，Li H，Yang Y，et al.Long noncoding RNA urothelial carcinoma associated 1 promotes the proliferation and metastasis of human lung tumor cells by regulatingmicroRNA-144[J].Oncol Res，2017.[Epub ahead of print].

[6]Yang Y，Jiang Y，Wan Y，et al.UCA1 functions as a competing endogenous RNA to suppress epithelial ovarian cancermetastasis[J].Tumour Biol，2016，37（8）：10633－10641.

[7]Wang F，Zhou J，Xie X，et al.Involvement of SRPK1 in cisplatin resistance related to long non-coding RNA UCA1 in human ovarian cancer cells[J].Neoplasma，2015，62（3）：432－438.

[8]Xue M，Chen W，Li X.Urothelial cancer associated 1：a long noncoding RNA with a crucial role in cancer[J].JCancer Res Clin Oncol，2016，142（7）：1407－1419.

[9]He A，Hu R，Chen Z，et al.Role of long noncoding RNA UCA1 as a common molecular marker for lymph nodemetastasis and prognosis in various cancers：ameta-analysis[J].Oncotarget，2017，8（1）：1937－1943.

[10]Zhang L，Cao X，Zhang L，et al.UCA1 overexpression predicts clinical outcome of patients with ovarian cancer receiving adjuvant chemotherapy[J].Cancer Chemother Pharmacol，2016，77（3）：629－634.

[11]Wang H，Guan Z，He K，etal.LncRNA UCA1 in anticancer drug resistance[J].Oncotarget，2017，8（28）：64638－64650.

[12]Jiao C，Song Z，Chen J，etal.lncRNA-UCA1 enhances cell proliferation through functioning as a ceRNA of Sox4 in esophageal cancer[J].Oncol Rep，2016，36（5）：2960－2966.

[13]Qian Y，Liu D，Cao S，et al.Upregulation of the long noncoding RNA UCA1 affects the proliferation，invasion，and survival of hypopharyngeal carcinoma[J].Mol Cancer，2017，16（1）：68.

[14]Wen JJ，Ma YD，Yang GS，et al.Analysis of circulating long non-coding RNA UCA1 as potential biomarkers for diagnosis and prognosis of osteosarcoma[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci，2017，21（3）：498－503.