綿羊精液制備及輸精注意事項

蔡世芹

（黑龍江省林口縣畜牧獸醫(yī)局157699）

1 精液采集和保存

綿羊可采用假陰道或電刺激采精，常規(guī)檢查精子活力和密度。綿羊一次射精量小，直接輸精很難控制輸入的精子量，通常先對精液用簡單稀釋液進(jìn)行稀釋后輸精。稀釋比例、最終輸入的精子量及精子濃度取決于輸精方式及精液從采集到輸精期間的保存方式等。

1.1 液態(tài)精液

通常使用的非冷凍精液的稀釋液為檸檬酸鹽或TriS緩沖液，加上卵黃或者牛奶。牛奶需經(jīng)脫脂或者高溫處理。高溫處理的目的是破壞其中對精子有殺滅作用的乳烴素。精液稀釋后降溫到15℃或4℃保存?zhèn)溆谩＞簯?yīng)在采集后8h內(nèi)使用，此后受精能力逐漸下降，24h后使用受胎率可降低30%。

1.2 冷凍保存

盡管使用簡單的稀釋液可在短期內(nèi)保持精子活力，但長時間保存需要冷凍。由于冷凍保存可使綿羊精子嚴(yán)重受損，所以綿羊精液的冷凍保存存在一定的困難。冷凍保存的綿羊精液不宜用于陰道內(nèi)輸精，雖然可進(jìn)行子宮頸輸精，但生育力仍相對較低。凍精宮頸內(nèi)輸精也有許多問題，主要是在子宮頸內(nèi)輸入一定量的凍精時，要求其要含有足夠量的精子 （總精子量要達(dá)到 1.5×108～2.0×108）。 由于子宮頸腔的解剖特點，輸入的精液量不能超過0.25ml，因此稀釋比例應(yīng)限制在1∶1～1∶4。 但由于稀釋液總量受到限制，其提供的保護(hù)不足以抵抗冷休克和凍害，冷凍-解凍后僅有中等數(shù)量的精子具有功能。子宮內(nèi)輸精時所需精子數(shù)量較少，可以適當(dāng)提高稀釋倍數(shù)，因此，更適合于冷凍保存精液。由于精液直接輸入子宮，精子活力低于子宮頸內(nèi)輸精，而受胎率可與同期發(fā)情后的自然配種相當(dāng)。

1.3 稀釋液

早期采用的稀釋液以檸檬酸鹽、卵黃、葡萄糖和果糖等單糖和牛奶為基礎(chǔ)，其他冷凍稀釋液主要由二糖（如乳糖）、三糖 （如棉子糖），多糖復(fù)合物 （阿拉伯膠）或者其他復(fù)合分子（如聚乙烯吡咯烷酮，PVP）組成。甘油濃度受到稀釋液中其他成分如卵黃和糖類含量的影響，適宜濃度在4～6%。早期研究表明，甘油在5℃添加或者分步添加較為適宜，但目前在實踐中通常在大約30℃時添加。目前廣泛使用的兩種稀釋液是Tris-檸檬酸-卵黃液和Tris-檸檬酸-果糖-卵黃液。用于宮頸內(nèi)輸精的精液在低倍稀釋時存在許多問題，有人已將此問題解決，即在制備凍精時，應(yīng)先將高濃度的稀釋液按 1∶1～1∶4 的比例進(jìn)行稀釋， 然后將稀釋后的稀釋液用于凍精的制備，從而優(yōu)化稀釋液與精清的體積比，有效提高精液的稀釋倍數(shù)，避免精液在低倍稀釋時存在的問題。還有人使用不同比例的兩種稀釋液 （卵黃-乳糖稀釋液和甘油脫脂奶稀釋液），按最終稀釋比例進(jìn)行調(diào)整，同樣也能解決該問題。

1.4 冷凍程序

精液稀釋后緩慢從30℃降到5℃，如果降速過快會導(dǎo)致精子存活率降低。因此，將精液冷卻到5℃一般需要1.5～2h，最好用水浴冷卻降溫。在冷卻過程中，精子與甘油逐步達(dá)到平衡，可在干冰表面制備顆粒凍精，或用液氮熏蒸制備片狀凍精。冷凍后不同公羊精子的成活率差異很大，有的公羊精液不能耐受冷凍過程。凍精顆粒可在水中解凍，通常解凍溫度為35～40℃。片狀凍精可以放入干燥試管中在水浴中解凍，也可在預(yù)熱的解凍液中溶解。建議將顆粒凍精在40℃解凍，并保存在30℃水浴中備用。

2 輸精注意事項

實施綿羊人工授精相對較為困難。母羊一般只有在有公羊存在時才表現(xiàn)發(fā)情行為，因此，為了確定輸精時間，需要人工控制發(fā)情開始的時間或利用公羊進(jìn)行發(fā)情鑒定。可以采用藥物處理誘導(dǎo)同期發(fā)情，以確定母羊可受配期；也可以用繁殖功能受損或結(jié)扎輸精管的公羊試情。綿羊人工授精投入較高，如飼養(yǎng)公羊、購買藥品、控制母羊同期發(fā)情、人工授精操作等，在決定是否采用人工授精時，應(yīng)考慮人工授精使綿羊胴體和羊毛品質(zhì)提高帶來經(jīng)濟(jì)利益的同時，還應(yīng)考慮授精成本。目前，限制綿羊人工授精最重要的因素是輸精方法。由于母羊子宮頸彎曲，很難直接將精液輸入子宮內(nèi)。子宮頸內(nèi)輸精的受胎率和產(chǎn)羔率都低于自然交配。目前廣泛使用的技術(shù)有：陰道內(nèi)人工授精、子宮頸管內(nèi)人工授精、經(jīng)子宮頸子宮內(nèi)輸精和腹腔鏡子宮內(nèi)人工授精。