重組禽流感病毒 （H5+H7）二價滅活疫苗免疫效果評估

高蕓 董釗 田慶雷 權亞瑋

（陜西省西安市動物疫病預防控制中心 710000）

近年全國各地畜間H7動物流感形勢嚴峻，疫情呈點狀發生，陜西省部分地區也出現了養雞場H7N9疫情[1]。動物流感的疫情及監測陽性動物不僅對養殖場造成損失，更對整個養禽業及相關貿易造成長期的消極影響。更為重要的是高致病性禽流感及H7動物流感還對公共衛生造成嚴重威脅[2]。農業農村部要求從2017年秋季防疫起實施家禽重組禽流感病毒 （H5+H7）二價滅活疫苗強制免疫，實現一次免疫同時防控H5和H7兩種亞型禽流感流行毒株的目的[3]。西安市也按照要求，首次采用該二價滅活苗對所轄區域內的家禽實施了強制免疫，為了掌握該二價滅活苗的免疫效果，了解抗體變化情況，對免疫地區的部分區域的免疫效果進行評估，報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗疫苗與試劑

疫苗：政府招標采購的重組禽流感病毒 （H5+H7）二價滅活疫苗，肇慶大華生產，批號0172103J；新城疫弱毒疫苗，楊凌綠方生產，批號20161218。

試劑：禽流感病毒H7亞型血凝抑制試驗抗原 （H7N9株），哈爾濱維科生產，批號2017012；禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原 （Re-8株），哈爾濱維科生產，批號2017001；新城疫血凝抑制試驗抗原，哈爾濱維科生產，批號2017062。

1.2 試驗方法

1.2.1 預實驗

將40只雞按照疫苗說明書進行禽流感免疫；另設5只雞作為對照組。免疫后每天觀察有無副反應。于免疫后第22天翅靜脈采全血，自然析出血清，-20℃保存。采用HA/HI試驗（GB/T18936-2003）對血清樣品進行H7亞型禽流感血凝抑制抗體 （H7-Ab）及H5亞型禽流感血凝抑制抗 (H5-Ab)檢測，抗體滴度≥4log2時，判為合格。

1.2.2 臨床試驗

在全市隨機選取32個采用政府招標疫苗的場戶作為采樣點，其包括15個規模場及17個散養戶，進行禽流感及新城疫免疫。試劑、方法及抗體滴度合格標準同上。

根據試驗結果計算抗體的個體合格率及群體合格率。其中群體合格率為個體合格率≥70%的場群數占總場群數的百分比；計算臨床試驗3組抗體平均滴度。

2 試驗結果

2.1 預實驗結果

2.1.1 抗體血凝抑制抗體效價

檢測40份血清樣本H5-Ab、H7-Ab抗體合格率均為100.00%。其中H5-Ab抗體效價在8log2～10log2之間分布，且10log2占效價的62.5%，H7-Ab抗體效價在5log2～10log2之間分布，主要集中在6log2～8log2。對照組樣本H7-Ab及H5-Ab效價均為陰性。

2.1.2 免疫副反應

在觀察期內試驗動物未見免疫副反應。

2.2 臨床試驗

2.2.1 H5-Ab檢測結果

共檢測360份血清，其中規模場 （15）和散養戶 （17）個體合格率、群體合格率都達到100.00%。

2.2.2 H7-Ab檢測結果

共檢測360份血清，個體合格率94.16% （339/360）；群體合格率90.62% （29/32）。其中規模場個體合格率、群體合格率均為100.00%。散養戶個體合格率83.20%(104/125)；群體合格率 82.35% （14/17）。

2.2.3 NDV-Ab檢測結果

共檢測360份血清，個體合格率96.67% （348/360）；群體合格率96.87% （31/32）。其中規模場個體合格率99.57% （234/235）；群體合格率 100.00% （15/15）。散養戶個體合格率91.20% （114/125）； 群體合格率94.12% （16/17）。

2.2.4 H5-Ab、H7-Ab及NDV-Ab效價分布情況

H5-Ab及NDV-Ab的效價在10log2所占的比例較高，分別為89.72%及76.39%；而H7-Ab主要集中在效價6log2～10log2范圍內。經過計算H5-Ab、H7-Ab、NDV-Ab平均效價分別為9.74log2、 7.51log2、 9.08log2。

3 討論

預實驗檢測結果表明該疫苗在試驗動物免疫后22d H5-Ab及H7-Ab水平均在農業農村部規定的70%以上，且未見免疫副反應，該疫苗產生抗體時間較快，安全性好。臨床試驗中H5-Ab及NDV-Ab效果理想，無論是規模場還是散養戶的個體合格率或群體合格率均達到很高的水平，個體合格率分別為100%及96.67%；環比2017上半年使用單苗免疫效果集中檢測（H5-Ab個體合格率：99.73%；NDV-Ab：99.46%）及同比2016下半年單苗免疫效果集中檢測 （H5-Ab個體合格率：99.45%；NDV-Ab：99.18%）結果相比差異不顯著。此外H5-Ab及NDV-Ab達到10log2所占分別為89.72%及76.39%，樣本的整體效價極高，表明該疫苗能產生高的H5-Ab且對NDV疫苗免疫沒有負面影響。

H7-Ab所產生的抗體效價大多集中在6log2～10log2范圍內，而10log2滴度僅占27.22%。說明該疫苗雖然在臨床試驗中整體能達到70%以上的合格水平，相比于H5-Ab及NDV-Ab水平，其所產生的抗體平均滴度較低，加之散養戶在冷鏈及操作存在的不規范導致合格率較低，應及時調查免疫失敗原因及時補免并繼續開展免疫效果評價。