免疫分析新方法在食品安全檢測中的應用

□ 劉 欣 姜子健 齊衍超 濰坊市食品藥品檢驗檢測中心

1 膠體金的概念

膠體金是氯金酸在還原劑的作用下聚合為特定大小的金顆粒，并在靜電作用下生成的一種穩定膠體溶液。因膠體金顆粒具備電子密度較高的特點，并且在顆粒聚集達到107個/mm2的密度條件時，會出現粉紅色斑點，故可用作實驗指示物[1]。

2 免疫層析技術的概念

免疫層析技術是誕生于20世紀80年代初期的一種獨特的免疫分析方法，這一方法的關鍵技術在于將條狀纖維層析材料作為固相，使樣品泳動，并使待測物與其受體發生免疫反應，通過酶反應或直接使用標記物進而得到如顯色等直觀現象。

3 食品安全快速檢測中GICA技術的應用

GICA是以膠體金為標記物的一種免疫層板方法。在GICA技術的應用時，應實現膜上抗體或特異性抗原的固定，在毛細作用下使樣品游動于層析條上，進而之與受體產生免疫反應。而在此階段，因檢測帶上會截留相關物質，檢測結果也一目了然[2]。

GICA在醫學上的應用較早，已被普遍應用于寄生蟲、早孕、乙肝等疾病的檢測中，并被普遍應用于動物細菌性、病毒性疾病的動物疫病診斷方面。在食品檢測領域，GICA的應用時間較晚，但近期以來，已在迅猛發展并被普遍應用于致病菌、霉菌毒素等食品安全快速檢測領域。

3.1 霉菌毒素檢測

霉菌毒素是霉菌生成的有毒的次級代謝物，對人類以及動物均有害，廣泛存在于飼料以及糧油食品中。在全球范圍內，所發現的結構不一的霉菌毒素在400種以上，其中被分離鑒定的霉菌毒素在20種以上，如T2/HT2毒素、嘔吐毒素等均會帶來較大危害。當前，全球范圍內對糧食中主要霉菌毒素的限量做出規定的國家在100個以上，我國GB2761-2017中也對食品中霉菌毒素的限量做出了規定。

當前在霉菌毒素檢測中，GICA的應用已極其廣泛。例如在5 min內，Charm Rosa霉菌毒素定量檢測系統便可對T2/HT2毒素、嘔吐毒素等谷物飼料中的霉菌毒素進行快速定量測定。樣品制備流程簡單、快捷，檢測流程也并不復雜，所得結果與采用國際方法所得結果極其相符。當前這一方法已被世界各國普遍應用[3]。

3.2 獸藥殘留檢測

獸藥殘留不但會對人體健康構成威脅，并且也會給畜產品的質量帶來不良影響。國際上往往會采用初篩加確證的方法來檢測獸藥殘留，即在采用一種簡單、靈敏、便捷的方法對將要檢測的樣品快速進行初步篩選之后，如結果呈陽性，應采用較為精準的方法對該樣品進行確證分析。在對將要檢測的樣品快速進行初步篩選時，往往會采用膠體金試紙條進行檢測。張改平等會基于特異性抗體的獲取，并利用膠體金進行標記以制得試紙條。此外，如紅霉素、磺胺等藥物也已具備相應的試紙條產品。當前市面上已有試紙條產品可對獸藥殘留（抗生素類、磺胺類、呋喃類、抗寄生蟲類和激素類藥物）進行同步檢測，使得檢測時間與成本大幅節省。在各類檢測方法中，除了無需使用大型儀器設備以外，GICA也具備快捷、簡便的特點，因此被普遍應用于獸藥檢測中。

3.3 非法添加物檢測

三鹿奶粉事件發生以后，三聚氰胺便走入大眾視野，我國相關部門便對非法添加物進行了大力抽查并要求各大企業務必具備相應檢測能力。除了會增加成本以外，儀器檢測也具備速度較為緩慢的缺陷，無法與檢測要求保持同步，在此情況下誕生了三聚氰胺膠體金檢測技術。當前該技術已發展得極其成熟，檢測限可達0.05 mg/kg。

3.4 致病菌檢測

在各類食源性致病菌，沙門氏菌、大腸桿菌等病菌均是常見的病菌。邵晨東等以條帶狀將抗沙門氏菌O9抗原的特異性單克隆抗體4-7-7、羊抗鼠IgG，分別包被于硝酸纖維膜的檢測帶以及質控帶上，采用膠體金對另一株單抗3-47-0進行標記，并將之吸附于結合墊上以制備成沙門氏菌O9抗原試紙條。對沙門氏菌O9抗原而言，這一試紙條的檢測限為4×105CFU。目前，對于食品中存在的引發疾病的病菌，往往會在進行增菌的基礎上，進行分離、培養、生化鑒定進而對病菌進行檢測，這一方法不但會花費較長時間，操作復雜、流程繁瑣，并且極易受到主觀以及環境因素的影響而使檢測結果的精準性大打折扣，而GICA技術則能有效解決操作流程繁瑣、特異性以及靈敏度均較低的問題。

4 結語

相較于其他檢測技術，GICA技術不但操作簡便、可快捷檢測，并且可節省成本，降低了操作難度，也由此成為一項核心技術，被用于現場快速測定中，但該技術大都用于定性研究中，也導致這一技術的應用大幅受限。在不久的將來，在科研人員的不懈努力下，GICA技術的定量檢測也必定為期不遠。