毛竹SQUAMOSA啟動子結合蛋白SBP家族基因的鑒定及表達模式分析*

王凱利 傅 鷹 周明兵,2

(1. 浙江農林大學 省部共建亞熱帶森林培育國家重點實驗室 杭州 311300； 2. 浙江省竹資源與高效利用協同創新中心 杭州 311300)

SBP(SQUAMOSA promoter-binding-protein，SQUA啟動子結合蛋白)-box基因家族編碼一類植物特有的轉錄因子——SBP轉錄因子(辛婧， 2006)，由于SBP轉錄因子能夠識別并結合MADS-box基因SQUAMOSA(SQUA)啟動子，所以又被稱為SQUA啟動子結合蛋白(辛婧， 2006； Chenetal.， 2010)。SBP基因首先在金魚草(Antirhinummajus)中發現(Kleinetal.， 1996)，近年來，在越來越多的植物中發現了SBP基因，如，擬南芥(Arabidopsisthaliana)(Cardonetal.，1997)、水稻(Oryzasativa)(Shaoetal.，1999)、番茄(Lycopersiconesculentum)(Salinasetal.， 2012)、葡萄(Vitisvinifera)(Houetal.， 2013)、大白菜(Brassicarapasubsp.pekinensis)(Tanetal.， 2015)、梅(Prunusmume)(Xuetal.， 2015)、甜瓜(Cucumismelo)(Maetal.， 2015)、菊花(Chrysanthemummorifolium)(Songetal.， 2016)、玉米(Zeamays)(Zhangetal.， 2016)等。但是關于毛竹(Phyllostachysedulis)中SBP家族基因的分析還未見報道。

SBP基因編碼的植物SBP轉錄因子參與了植物營養生長和生殖生長的調控。Martin等(2010)發現AtSBP13會影響擬南芥第1片真葉的發生，Wu等(2006)發現AtSBP3與擬南芥芽的發育有關。在生殖生長階段，SBP家族基因還與果實的成熟有關(Prestonetal.， 2013)。Jung等(2011)研究發現AtSBP3，AtSBP4與AtSBP5參與調控擬南芥營養生長與生殖生長的轉換。AtSBP8在植物中可以影響花粉囊與雌蕊群的發育(Unteetal.， 2003； Xingetal.， 2013)。Yu等(2010)研究發現AtSBP3，AtSBP9，AtSBP10和AtSBP13可以影響擬南芥花中毛狀體的分布狀況。Teotia等(2015)發現SBP家族基因是植物開花過程中的年齡基因，并且它們的反饋作用可以調節植物開花的時期。此外，SBP家族基因還廣泛參與植物對非生物與生物脅迫的應答(Houetal.， 2013)。Hou等(2013)發現葡萄的VvSBP6基因對外界非生物脅迫應答明顯，在高鹽處理與干旱處理時均出現明顯增高狀態。SBP基因還參與了對抗銅(Erikssonetal.， 2004)與真菌毒素脅迫(Stoneetal.， 2005)等應答反應。SBP家族基因在進化上高度保守，具有保守的典型SBP結構域(Tanetal.， 2015)。SBP轉錄因子的 DNA結合結構域有大約76～79個氨基酸殘基(Cardonetal.，1999； Kleinetal.，1996)，可結合順式作用元件TNCGTACAA(N表示任意堿基)(Cardonetal.，1997； 1999； Kropatetal.， 2005)，它包括2個鋅指結構域。2個鋅-結合位點蛋白序列為C-C-C-H 和 C-C-H-C，均具有3個反平行β折疊片。第2個鋅指結構域C端具有1個NLS結構域(nuclear localization signal)(Yamasakietal.， 2004； Xuetal.， 2015)。2個鋅指結構域各司其職，Yamasaki等(2006)發現，第1個鋅-結合位點的功能為維持SBP轉錄因子三級結構的穩定，若缺失位于C端結合區的Cys64則SBP轉錄因子不能結合在啟動子上，第2個鋅-結合位點則引導C端loop環正確進入DNA大溝，進行DNA結合。

SBP基因是miR156的靶基因(Songetal.， 2016)。水稻有19條SBP基因，其中有11條具有miR156位點(Xieetal.， 2006)。miR156不僅可以結合在基因的編碼區也可以結合在 3′UTR區(3′非翻譯區)(Houetal.， 2013; Lietal.， 2013)。例如，梅有15條SBP基因，有8條SBP基因的編碼區為miR156的靶點，3條SBP基因的3′UTR為miR156靶點，余下的4條未檢測到miR156結合位點。大白菜的miR156可以調節SBP家族基因編碼區或者3′UTR區(Tanetal.， 2015)。在葡萄(Houetal.， 2013)、擬南芥(Gandikotaetal.， 2007)等其他物種中也有類似的報道。

miR156是SBP家族基因表達調控的重要成員，高鹽脅迫可以引起miR156的表達量上調，進而抑制SBP基因的表達(Sunetal.， 2012)。Teotia等(2015)發現，miR156是擬南芥成花誘導5大途徑(年齡途徑、赤霉素途徑、光周期途徑、春化途徑、自主途徑)中年齡途徑中的一個關鍵microRNA。在植物開花過程中，SBP家族基因表達受到miR156在RNA水平上的調節，同樣，某些SBP轉錄因子會反饋調節miR156的表達水平，例如，Wei等(2012)發現，AtSBP15以結合miR156B啟動子的方式抑制其表達，而Wu等(2009)發現AtSBP9與AtSBP10促進miR156表達。

毛竹在我國分布廣泛，依據第八次全國森林資源清查報告，我國毛竹林面積為443萬hm2，占竹林總面積的74%(郭起榮等， 2015)。Peng等(2013)公布了毛竹基因組草圖與數據，這為毛竹的研究提供了可靠的基因組數據支持。自然狀態下毛竹開花周期長、結籽率低(Geetal.， 2017； 張瑩等， 2016)，因此研究毛竹開花相關基因對于毛竹開花分子機制的解析具有重要意義。

本文主要對與毛竹開花密切相關的SBP家族基因進行全基因組鑒定，并通過生物信息學工具對其結構和進化模式開展系統的調查，利用實時熒光定量PCR分析毛竹SBP基因在毛竹的不同組織部位及在鹽脅迫過程中的表達模式，為毛竹SBP家族基因功能分析奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 毛竹的SBP家族基因序列的獲得、篩選及進化樹的構建

為了鑒定毛竹的SBP家族基因序列，首先在PlanTFDB數據庫(http://plntfdb.bio.uni-potsdam.de/v3.0/)下載擬南芥和水稻SBP家族基因蛋白序列，然后在毛竹基因組數據庫(http://www.bamboogdb.org/index.jsp)下載毛竹基因組蛋白序列。以擬南芥和水稻的SBP家族基因序列為query，通過blastp檢索毛竹SBP家族基因蛋白序列(E<-10)。為了剔除假陽性序列，利用MEME軟件(http://meme-suite.org/tools/meme)檢索毛竹SBP家族基因蛋白序列保守結構域。

將毛竹SBP家族基因序列命名為PeSBP-N(N為序號)。

鑒定出的陽性毛竹SBP家族基因蛋白序列，利用MEGA6.0軟件，通過最大似然法(maximum likelihood，ML)分析構建系統發育樹的最佳模型。根據分析出的最佳進化模型構建毛竹SBP家族基因蛋白進化樹，重復次數為1 000次。

1.2 毛竹、擬南芥和水稻SBP家族基因進化樹的構建

將擬南芥、禾本科(Gramineae)植物水稻與毛竹SBP基因家族蛋白序列通過MEGA 6.0 軟件比對，通過最大似然法(maximum likelihood，ML)分析構建其系統發育樹的最佳模型。根據分析出的最佳進化模型構建3個物種間的系統發育樹，重復次數為1 000次。

1.3 毛竹SBP家族基因結構分析

在毛竹基因組數據庫(http://www.bamboogdb.org/index.jsp)下載SBP家族基因對應的DNA序列，并在scaffold的位置，利用Gene Structure Display Server 2.0(http://gsds.cbi.pku.edu.cn/index.php)軟件分析毛竹SBP家族基因結構。

1.4 毛竹SBP家族基因miR156靶位點預測

在毛竹基因組數據庫(http://www.bamboogdb.org/index.jsp)下載毛竹miR156 基因序列，利用 psRNATarget(http://plantgrn.noble.org/psRNATarget/?function=3)軟件檢索毛竹SBP家族基因中miR156靶位點。

1.5 毛竹SBP家族基因表達量分析

毛竹種子種植于泥炭∶蛭石∶珍珠巖體積比為1∶1∶1的人工培養基上，放置于溫室，16 h/8 h晝夜時數，23 ℃/18 ℃晝夜溫度，相對濕度控制在55%～60%(Wuetal.， 2015)。待株高達20～25 cm時，分別選取根、莖、葉(圖1A)立即放于液氮中速凍。

2015年6—7月間在廣西靈川縣收集毛竹花序樣品，將毛竹花序發育分為4個階段： 花序形成初期(P1)、小穗的分化(P2)、穎花的分化(P3)和小穗的生長(P4)(圖1B)(郭起榮等， 2015)。收集4個階段的花器官，迅速將樣品放入液氮速凍。

以上述相同的方法種植毛竹實生苗，待株高到達20～25 cm時，對照組澆灌無菌水，試驗組澆灌等量200 mmol·L-1的NaCl溶液(張智俊等， 2011)，分別在第1天、第3天、第5天取毛竹葉片，對照組分別命名為CK1，CK2與CK3，試驗組分別命名為T1，T2與T3，迅速將樣品放入液氮速凍。

所有樣品通過Trizol試劑(TaKaRa，日本)提取總RNA，采用反轉錄試劑盒(TaKaRa，日本)將RNA反轉錄為cDNA。以毛竹NTB基因(Nucleotide Tract-Binding Protein)為內參基因(Fanetal.， 2013)，通過Primer premier 5.0軟件設計SBP家族基因引物(表1)。選用SYBR? Premix Ex TaqTMII定量試劑(TaKaRa 日本)，在 CFX96熒光定量PCR儀(Bio-Rad，美國)上進行擴增： 95 ℃ 30 s預變性； 95 ℃ 5 s變性，55 ℃ 30 s復性延伸，40個循環； 最后得到熔解曲線。

表1 毛竹SBP家族基因的實時熒光定量PCR引物序列Tab.1 The primer sequences used in the quantitative real-time fluorescence PCR of Phyllostachys edulis SBP family genes

2 結果與分析

2.1 毛竹的SBP基因家族的鑒定與進化關系分析

在PlanTFDB數據庫分別獲得15條擬南芥和19條水稻SBP家族基因序列，通過blastp比對獲得37條疑似毛竹SBP家族基因序列。通過MEME軟件獲得具有完整SBP結構域的基因18條(表2，圖2 A，B)。毛竹中SBP結構域自C-Q-V到R-R-R，共2個鋅指結構域和1個核定位信號結構域(NLS)，共有74個氨基酸殘基(圖2C)。

通過MEME軟件鑒定出的18個結構域中，Motif 2和Motif 1組成完整的SBP結構域(圖2A)。Motif 2是第1個鋅指結構域(C-C-C-H)，Motif 1是第2個鋅指結構域(C-C-H-C)和NLS結構域(核定位信號)(圖2C)。18條SBP蛋白中Motif超過5個的有10條(圖2B)。

毛竹18條SBP家族基因蛋白序列最佳進化樹分析模型為JTT+G+I，重復1 000次，根據進化關系遠近可分為6組(圖2B)。

表2 毛竹SBP家族基因信息Tab.2 The information of Phyllostachys edulis SBP family genes

圖2 毛竹SBP家族基因蛋白序列保守結構鑒定Fig.2 Characterization of conserved motifs of amino acid sequences of Phyllostachys edulis SBP family genesA. 毛竹SBP家族基因蛋白序列18個保守結構域； B. 毛竹SBP家族基因保守基序分布圖，每一個Motif都分別以不同的彩色背景與數字標注，左側為進化樹； C. 毛竹SBP 蛋白序列SBP結構域，利用DNAMAN獲得多序列比對結果，2個鋅離子結合結構域與NLS已經標注。氨基酸的高度表示此處氨基酸的保守性。A. Eighteen motifs of SBP transcription factor. B. Motif distribution of P. edulis SBP family genes. Each motif is represented by a colored block with a number. The left is phylogenetic tree of P. edulis SBP family genes. C. Multiple sequence alignment and sequence logo of the P. edulis SBP domain. Multiple sequence alignment was performed using DNAMAN. The two conserved zinc finger and NLS are indicated. The overall height of the stack indicates the sequence conservation at that position.

2.2 毛竹、擬南芥和水稻SBP基因親緣關系分析

擬南芥、水稻與毛竹3個物種SBP家族基因蛋白序列最佳進化模型為JTT+G，重復1 000次。54條SBP蛋白序列可以分為12組(Clade1-Clade12)(圖3)。毛竹SBP家族基因與水稻SBP家族基因親緣關系最近，每一條毛竹中的SBP蛋白序列均能找到進化關系相近的水稻SBP轉錄因子。

圖3 擬南芥、水稻與毛竹中SBP 家族基因進化關系Fig.3 Unrooted phylogenetic tree of SBP family genes from Phyllostachys edulis，Arabidopsis thaliana and Oryza sativa

2.3 毛竹SBP基因結構

通過Gene Structure Display Server 2.0軟件分析，得到毛竹SBP家族基因DNA序列中內含子、外顯子、 5′UTR和 3′UTR的分布情況(圖4 A)。18條SBP家族基因的平均長度為5 464 bp。Group1、Group4與Group5相比于Group2、Group3和 Group6 SBP家族基因DNA序列較長。PeSBP2、PeSBP5和PeSBP14的內含子與外顯子最多，均有10個內含子和11個外顯子；PeSBP13僅有1個內含子與外顯子。

2.4 毛竹SBP家族基因miR156靶位點預測

在毛竹基因組數據庫里共找到miR156序列7條，分別為Pe-miR156b以及Pe-miR156e-1-Pe-miR156e-6。經過DNAMAN比對分析后發現，Pe-miR156e-1-Pe-miR156e-6序列完全一致，序列為UGACAGAAGAGAGUGAGCACA，共21 nt； 而Pe-miR156b為GACAGAAGGGAGUGAGCACA，共有20 nt，相比較Pe-miR156e，缺失第1個堿基U并且第10位堿基為G，而Pe-miR156e第10位堿基為A(圖4B)。

將7條miR156序列與毛竹SBP基因序列比對之后發現，有10條SBP家族基因序列有miR156靶位點，9條基因的miR156靶位點位于基因的編碼區，1條位于3′UTR 區(圖4B)。PeSBP8，PeSBP10，PeSBP11，PeSBP17與PeSBP18的miR156靶位點位于各自第4外顯子處，PeSBP15，PeSBP16 miR156靶位點位于各自第3外顯子處，PeSBP9 miR156靶位點位于其第7外顯子處，PeSBP12 miR156靶位點位于其第4內含子處，僅PeSBP13的miR156靶位點位于3′UTR區。并且miR156靶位點均位于基因接近尾部的位置(圖4A)。

圖4 毛竹SBP家族基因結構及miRNA靶位點Fig.4 The structure of Phyllostachys edulis SBP family genes and target sites of miRNAA. 毛竹SBP家族基因內含子、外顯子、5′與3′UTR分布圖。黑色直線表示內含子，左側藍色圓柱形表示5′UTR，右側藍色圓柱形表示3′UTR，黃色圓柱形表示外顯子。紅色標記為miR156位置。標尺標注了基因的長度。B. 毛竹miR156序列與毛竹SBP 家族基因 DNA序列比對圖，數字表示堿基位置。A. Exon-intron structures of P. edulis SBP family genes. Phylogenetic tree was constructed based on P. edulis SBP protein sequences. UTR, exons and introns are indicated by blue rounded rectangles, yellow rounded rectangles, and black lines, respectively. Red line indicated the miR156 position. The scale represents the lengths of the genes. B. Multiple sequence alignment of Ph-miR156 complementary sequences with P. edulis SBP family genes. Numbers indicate the position of the nucleotide sequences.

2.5 毛竹SBP家族基因表達量分析

通過實時熒光定量PCR檢測了毛竹SBP 家族基因在毛竹實生苗根、莖、葉中的表達情況。在根中，PeSBP16相對表達量最高，PeSBP9相對表達量較高，其他PeSBP基因在根中的表達量較低。在莖中，PeSBP11相對表達量最高，PeSBP5，PeSBP9和PeSBP10有較高的表達量，而其他PeSBP基因在莖中相對表達量較低。在葉中，PeSBP5相對表達量最高，PeSBP6在葉中的相對表達量高于其在根和莖中的相對表達量(圖5)。

圖5 毛竹不同組織SBP家族基因相對表達量Fig.5 Relative expression of Phyllostachys edulis SBP family genes in different organs

本研究分析了毛竹SBP家族基因自花序形成初期(P1)經過小穗的分化(P2)和穎花的分化(P3)到小穗的生長(P4)4個階段表達模式的變化(圖1B； 圖6)。在毛竹花序發育的4個時期，毛竹SBP家族基因相對表達量發生了不同程度的變化，根據基因相對表達量趨勢，可以將SBP家族基因分成5類。第1類： 無明顯表達量，且表達趨勢變化不明顯，包括有PeSBP1，PeSBP2，PeSBP3，PeSBP7，PeSBP15與PeSBP17共6個基因。第2類： 先降后升，P1-P3期PeSBP4與PeSBP13相對表達量逐漸下降，在P3期到達最低點，P4期又重新上升。第3類： 先升后降，PeSBP10與PeSBP14相對表達量逐漸上升在P3期到達最高點，PeSBP12與PeSBP18相對表達量逐漸上升在P2期到達最高點，之后相對表達量均下降。第4類： 先升后降再升，P1-P2期PeSBP5，PeSBP9與PeSBP16 相對表達量逐漸升高，P3期下降，到P4期相對表達量又上升。第5類： 先降后升再降，P1-P2期PeSBP6，PeSBP8與PeSBP11相對表達量逐漸下降，P3期相對表達量上升，到P4期相對表達量又下降。

圖6 毛竹花序發育過程SBP家族基因相對表達量Fig.6 Relative expression levels of Phyllostachys edulis SBP genes in the development of inflorescences

本研究也調查了毛竹SBP基因受鹽脅迫過程表達模式的變化，當毛竹實生苗受高鹽脅迫后，毛竹所有SBP家族基因均發生了不同程度的表達量變化(圖7)。根據基因表達量變化趨勢可以將毛竹SBP家族基因分為3類。第1類： 基因相對表達量逐漸下降，包括PeSBP1，PeSBP5，PeSBP6，PeSBP7，PeSBP13，PeSBP15，PeSBP16，PeSBP17與PeSBP18。第2類： 基因相對表達量逐漸上升，包括PeSBP2，PeSBP3，PeSBP4，PeSBP8，PeSBP10，PeSBP11，PeSBP12與PeSBP14。第3類： 基因相對表達量先升后降，PeSBP9在高鹽脅迫的第1～3天(T1-T2期)相對表達量逐漸上升，在第3天(T2期)到達最高點，在第5天(T3期)相對表達量下降并低于第1天(T1期)相對表達量。

圖7 鹽脅迫下毛竹SBP家族基因相對表達量Fig.7 Relative expression levels of Phyllostachys edulis SBP family genes under salinity treatment

3 討論

SBP家族基因編碼的SBP轉錄因子為植物所特有，此類家族基因具有高度保守性，參與植物生長發育的多個階段，在花發育中的作用尤為重要。SBP基因在多種植物中均有發現，尤其在模式植物擬南芥中研究較為透徹，但在竹亞科(Bambusoideae)植物毛竹中卻未有報道。

3.1 毛竹SBP家族基因特性

本研究最初在毛竹中共發現37條疑似SBP家族基因序列，經MEME檢索結構域確認， 18條SBP轉錄因子具有完整的74個氨基酸殘基的SBP結構域。毛竹SBP家族基因蛋白序列中NLS序列為K-R-S-C-R-R-R-L-A-G-H-N-R-R-R-R，僅1個氨基酸殘基與梅(Yuetal.， 2010)中的NLS序列(K-R-S-C-R-R-R-L-A-G-H-N-E-R-R-R)不同。這18條基因被認為是真正的SBP家族基因。構建進化樹發現，進化關系相近的毛竹SBP轉錄因子的Motif和基因結構均具相似性，例如，PeSBP11與PeSBP12親緣關系比較近，2條基因的Motif完全一致。組內Motif數目也大致具有相似性，例如，Group3中PeSBP15與PeSBP16的Motif最多達到了10個，而PeSBP6、PeSBP7與PeSBP13僅有1個SBP結構域。PeSBP2、PeSBP5和PeSBP14均有10個內含子和11個外顯子，PeSBP13僅1個內含子與外顯子。擬南芥、水稻和毛竹SBP家族基因進化樹分析得出，毛竹SBP家族基因與擬南芥SBP家族基因親緣關系較遠，毛竹SBP家族基因與水稻SBP家族基因進化關系近，并且在水稻中都可以找到相應的毛竹SBP同源基因，推測在進化過程中毛竹基因組并未出現特異的SBP家族基因。也從側面證實了SBP家族基因在進化上的保守性。10條毛竹SBP家族基因具有miR156靶位點，并且均靠近基因尾端，miR156既可以結合于基因編碼區也可以結合于基因UTR區(Houetal.， 2013; Lietal.， 2013)。

3.2 毛竹SBP家族基因具有多樣的表達模式

調查了毛竹SBP家族基因在毛竹實生苗根、莖、葉中的相對表達量。PeSBP11和PeSBP16相對表達量分別在莖和根中最高，暗示它們分別在莖和根發育中可能發揮著重要作用。PeSBP9在根中相對表達量較高(圖5)，可能參與了毛竹根的發育。PeSBP5，PeSBP9，PeSBP10與PeSBP11在莖和葉中均呈現出高相對表達量，表明這些基因可能參與了毛竹莖和葉的發育(Wangetal.， 2008； Martinetal.， 2010)。

在花序發育過程的P1-P4期，有6個基因(PeSBP1，PeSBP2，PeSBP3，PeSBP7，PeSBP15與PeSBP17)表達量較低，且無明顯的表達量變化，暗示它們可能與花序發育關系不大。有7個毛竹SBP家族基因(PeSBP5，PeSBP9，PeSBP10，PeSBP12，PeSBP14，PeSBP16和PeSBP18)在P1-P2表達量上升，表明可能參與了早期的花序發育(王翊等， 2011)，其中PeSBP10與PeSBP14高表達延續到P3期。在P3期毛竹花序繼續伸長，生長錐形成，雄雌蕊發育成花器官，第1朵小花形成。7個基因(PeSBP6，PeSBP8，PeSBP9，PeSBP10，PeSBP14，PeSBP16和PeSBP18)在P3期表達值較高，表明這7個基因可能參與了雄雌蕊發育(郭起榮等， 2015)。P4期側生與頂端小穗迅速生長(郭起榮等， 2015)，毛竹SBP家族基因中有5個基因(PeSBP4，PeSBP5，PeSBP9，PeSBP13與PeSBP16)在P4期表達值較高，表明這5個基因可能參與了小穗的生長(郭起榮等， 2015)。

AtSBP8可以影響花粉囊與雌蕊群的發育(Unteetal.， 2003； Xingetal.， 2013)。AtSBP8缺失突變體導致植物生育能力降低，它的敲除可能也會影響萼片上的毛狀體形成和雄蕊絲伸長(Unteetal.， 2003)。擬南芥的花器官具有典型的花萼但是毛竹卻無明顯的花萼(田大剛等， 2011； 孫立方等， 2012)，與AtSBP8同源的PeSBP3在花發育4個時期相對表達量均比較低，可能與毛竹特有花序結構有關。AtSBP9和AtSBP15在擬南芥由營養生長到生殖生長的轉換中起到了促進作用(Schwarzetal.， 2008； Wangetal.， 2008)，與AtSBP9同源的PeSBP5，PeSBP6及與AtSBP15同源的PeSBP14在毛竹花發育的4個時期均有較為明顯的表達，暗示著這3個基因可能參與毛竹營養生長向生殖生長轉變的調控。

葡萄SBP家族基因在高鹽環境下表現出了不同的表達模式，參與了葡萄對于鹽脅迫的反應(Houetal.， 2013)。在菊花的鹽脅迫中，CmSBP4，CmSBP9與CmSBP11對鹽脅迫的反應趨勢比其他9個菊花SBP家族基因反應更為明顯(Songetal.， 2016)。高鹽脅迫環境下毛竹SBP家族基因表現出了3類不同的表達趨勢。第1類，PeSBP1，PeSBP5，PeSBP6，PeSBP7，PeSBP13，PeSBP15，PeSBP16，PeSBP17與PeSBP18隨著高鹽處理時間從第1～5天(T1-T3期)相對表達量逐漸下降，可能是它們的表達受鹽脅迫反饋抑制(Houetal.， 2013； Songetal.， 2016)； 第2類，自高鹽脅迫第1天(T1期)開始隨著高鹽脅迫處理時間的延長，PeSBP2，PeSBP3，PeSBP4，PeSBP8，PeSBP10，PeSBP11，PeSBP12與PeSBP14相對表達量逐漸上升，暗示著這些基因可能在毛竹高鹽脅迫響應的過程中起到了主要作用(Houetal.， 2013； Songetal.， 2016)； 第3類，相對表達量先升后降(PeSBP9)，表明PeSBP9在高鹽脅迫第1～3天(T1-T2期)參與了鹽脅迫的響應，隨著處理時間延長又被抑制。

4 結論

本研究利用生物信息學技術鑒定了毛竹18條SBP家族基因，證明了毛竹18條SBP家族基因具有完整的SBP結構域并且非常保守。毛竹與水稻SBP家族基因進化關系較近。在18條毛竹SBP家族基因中有10條基因在靠近基因尾端有miR156識別的靶位點。SBP家族基因參與了毛竹營養生長與生殖生長的調控，PeSBP5，PeSBP9，PeSBP10與PeSBP11對葉的發育具有重要的影響，PeSBP8，PeSBP9，PeSBP10，PeSBP11，PeSBP12，PeSBP13，PeSBP16與PeSBP18可能在毛竹花序發育過程中發揮了重要的作用。在毛竹高鹽脅迫處理中，SBP家族基因均表現出了相對表達量的變化，大部分基因參與了毛竹對高鹽脅迫的應答反應。

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