HPLC 法同時(shí)測定黨參中煙酸及黨參炔苷含量的方法探究

蔡迪鳴

（葫蘆島市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 遼寧 葫蘆島 125000）

黨參屬于桔梗科植物，《中國藥典》數(shù)據(jù)[1]認(rèn)為黨參是黨參、川黨參 或素花黨參三種黨參的干燥根部，味甘性平，其主要產(chǎn)地為陜西、甘肅、湖北、貴州等地，主要功效為潤肺生津、補(bǔ)中益氣[2]。黨參的有效成分包括煙酸、黨參炔苷、黨參多糖等。本文圍繞高效液相色譜法測定黨參中的煙酸與黨參炔苷含量展開研究，取得了較為滿意的結(jié)果，現(xiàn)具體報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 材料

（1）實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)儀器選用產(chǎn)自沒過沃特世公司的高效液相色譜儀Waters e2695，其中包含Waters 2998 PDA檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、四元泵。采用產(chǎn)自瑞士梅特勒公司的型號(hào)為AE240的電子天平，其感量為0.01毫克；產(chǎn)自昆山超聲儀器公司的型號(hào)為KQ-252TTB高頻數(shù)控超聲波清洗器；產(chǎn)自蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品公司型號(hào)為HH-D的恒溫水浴鍋；產(chǎn)自南京實(shí)驗(yàn)儀器公司型號(hào)為DGF24-IA的電熱風(fēng)鼓風(fēng)干燥箱。

（2）實(shí)驗(yàn)對(duì)照物（煙酸及黨參炔苷）為產(chǎn)自成都瑞芬思生物科技公司，其批號(hào)分別為D-026-150728、Y-062-150801，純度高于98.0%；乙腈為產(chǎn)自湖北昌泰興業(yè)公的特技色譜純；磷酸為產(chǎn)自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司的色譜純。其他實(shí)驗(yàn)所涉及的藥劑均屬于分析純，采用超純水Milli-Q。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 實(shí)驗(yàn)所用色譜柱為Syncronis AQ(250mm×1.5mm，5μm)，流動(dòng)相A為乙腈，B為磷酸水溶液，其比例為32：68，1.0mL/min流速，30℃柱溫，檢測的紫外線波長為285nm。實(shí)驗(yàn)參考為黨參炔苷理論塔板，其數(shù)值＞5000。在上述條件下煙酸及黨參炔苷均可到達(dá)基線分離。

1.2.2 對(duì)照物配置方法 量取對(duì)照物煙酸及黨參炔苷適量，分別溶于甲醇溶液中至定容刻度，配置成濃度為480μg/mL、496μg/mL的對(duì)照物儲(chǔ)備液。通過微量加樣槍從對(duì)照物儲(chǔ)備液中各采集1mL放于容量為10mL的容量瓶中，甲醇溶液定容后搖勻，此時(shí)對(duì)照物濃度為48.0μg/mL、49.6μg/mL。再通過微量加樣槍采集2mL放于容量為10mL的容量瓶中，此時(shí)對(duì)照物濃度為96.0μg/mL、99.2μg/mL，保存于-20℃的環(huán)境中。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)品溶液制取 量取實(shí)驗(yàn)測試品黨參粉末1g，經(jīng)直徑為450μm的孔徑篩后置于具塞三角瓶中，與80mL甲醇混合，密塞稱重，于45℃、40kHz、200W的環(huán)境中超聲提取30min，冷卻后再次稱重，補(bǔ)足損失的甲醇質(zhì)量，搖勻后過濾。精密量取50mL濾液，使其蒸干，所得殘?jiān)尤爰状既芙夂筠D(zhuǎn)移至容積為5mL的容量瓶中，加入甲醇至定標(biāo)后搖勻。經(jīng)直徑為0.45μm的孔徑篩后，取所得濾液為實(shí)驗(yàn)品溶液。

2.結(jié)果

2.1 優(yōu)化提取條件

實(shí)驗(yàn)指標(biāo)為煙酸及黨參炔苷，對(duì)黨參的提取條件進(jìn)行評(píng)估，分別于30℃、45℃、60℃的溫度下進(jìn)行提取，結(jié)果在45℃環(huán)境下效率最高。同時(shí)，對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行評(píng)估，分別為30min、60min，結(jié)果差異不著，則選擇了30min。因此，本實(shí)驗(yàn)提取條件定為45℃的純度為100%的甲醇溶液下30min。

2.2 檢測波長

通過PDA檢測器對(duì)范圍為210～400nm內(nèi)的波長進(jìn)行掃描，分別采集其光譜圖。結(jié)果顯示波長為285nm時(shí)煙酸及黨參炔苷色譜圖的峰面積均較為理想，因此波長定為285nm。

2.3 流動(dòng)相

為達(dá)到良好分離的要求，實(shí)驗(yàn)測試了梯度洗脫及等度洗脫，并分別對(duì)比甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.2%甲酸水溶液、乙腈-0.2%乙酸水溶液，結(jié)果顯示乙腈-0.2%磷酸水溶液較為理想，在此流動(dòng)相下基線平穩(wěn)、分離度高，重復(fù)性強(qiáng)。

2.4 線性方程與檢出限

以X（質(zhì)量濃度）為橫坐標(biāo)，Y（峰面積）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算兩者的線性方程等結(jié)果。具體結(jié)果為：煙酸的線性方程、檢出限/（μg/mL）、線性范圍（μg/mL）分別為Y=724.8X+5155.6、0.95、9.5～57.9，黨參炔苷組對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)為Y=15105X+875.9、0.11、9.98～59.8。煙酸及黨參炔苷的線性方程、線性范圍、檢出限均能滿足要求。

2.5 穩(wěn)定性

對(duì)同一樣品進(jìn)行測定，分別于0、2、4、8、12、24各進(jìn)樣一次，記錄兩者的色譜峰面積，評(píng)定其穩(wěn)定性。煙酸及黨參炔苷的偏差值RSD分別為2.0%、1.1%。具體數(shù)值為：煙酸在0、2、4、8、12、24時(shí)的峰面積值分別為：21240、21743、21168、21373、22135、21629，RSD/%值為2.0；黨參炔苷對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)為：627438、634571 632459、634325、645475、637536、1.1。

3.小結(jié)

煙酸通過緩解因機(jī)體低密度脂蛋白增多、高密度脂蛋白減少帶來的血脂異常，從而可降低冠心病等疾病的發(fā)病率[3]。黨參炔苷的藥理活性包括抗?jié)儭⒖寡趸梢约せ頝F-kB[4]。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了檢測時(shí)色譜條件、環(huán)境溫度等，所得的煙酸及黨參炔苷的線性方程、線性范圍、檢出限均能滿足要求，且其偏差值RSD分別為2.0%、1.1%。說明HPLC法對(duì)同時(shí)測定兩者的含量便捷精準(zhǔn)、穩(wěn)定理想，因此對(duì)黨參的質(zhì)量控制有重要的臨床意義。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2015版[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:199.

[2]陳前鋒，鄧小艷，祝慧鳳．HPLC法測定不同產(chǎn)地黨參中黨參炔苷和丁香苷的含量[J].食品工業(yè)科技，2016(6):64-67．

[3]竇武宇，崔治家，侯嘉，等.甘肅不同產(chǎn)地黨參藥材總皂苷含量測定[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2015，1(6):59-62．

[4]陳慧慧，牛偉霞，李士棟，等．HPLC測定不同產(chǎn)地黨參中黨參炔苷的含量[J].食品與藥品，2014，16(1):37-38，39．