等效色譜柱選擇在大黃和補(bǔ)骨脂多成分高效液相色譜分析中的應(yīng)用

張傳燕

（宜賓市第三人民醫(yī)院藥劑科 四川 宜賓 644000）

高效液相色譜法，簡(jiǎn)稱HPLC，是現(xiàn)今各國(guó)藥典收錄過程中最常用的分析方法，因?yàn)槠涓咝А㈧`敏、選擇性好等諸多優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于藥物和制劑的含量測(cè)定以及雜質(zhì)的分析過程中。就目前的實(shí)際情況而言，在市場(chǎng)中，色譜柱是多種多樣的，不僅品牌繁多，而且種類繁多，而在色譜柱的選擇過程中對(duì)某種具體樣品進(jìn)行具體分析時(shí)，也往往因?yàn)樯V柱在選擇性上存在差異，最終導(dǎo)致在溶質(zhì)的保留值、色譜峰之間的分離度以及在色譜峰的出峰順序都存在較大的差異。由此可見，在高效液相色譜法中，對(duì)色譜柱進(jìn)行選擇是尤為重要的，直接關(guān)系到中藥成分分析的好壞以及成敗。

1.資料和方法

1.1 一般資料

儀器：Agilent1260高效液相色譜儀、Waterse2695高效液相色譜儀、Agilent6320Ion Trap型質(zhì)譜儀。

對(duì)照品：蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、大黃對(duì)照藥材、補(bǔ)骨脂對(duì)照藥材等[1]。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 大黃：將乙腈作為流動(dòng)相A，將0.1%磷酸水溶液作為B，梯度洗脫為：0～50分鐘，95%A→64%A；50～73分鐘，64%A→15%A；73～74分鐘，15%A→95%A；74～80分鐘，95%A，其流速為1.0毫升/每分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)為254、431nm，柱溫為40攝氏度，進(jìn)樣量在10μL。

補(bǔ)骨脂：將甲醇作為流動(dòng)相A，將水作為B，梯度洗脫為：0～20分鐘，50%A→70%A；20～45分鐘，70%A→85%A；45～50分鐘，85%A→90%A；50～60分鐘，90%A，其流速為1.0毫升/每分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)為308nm，柱溫為30攝氏度，進(jìn)樣量在10μL[2]。

1.2.2 制備對(duì)照品溶液 首先，取適量的對(duì)照品，其次，在其中加入甲醇，使其變成1毫升且含有蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚各16μL，另外，番瀉苷A、HBGG等各8μL。最后，在對(duì)照品溶液中加入乙醇，制成每1毫升對(duì)照品中就含有10μL補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的溶液。

1.2.3 植被供試品溶液 大黃：取0.5克的大黃對(duì)照藥材，將其放入錐形瓶中，在其中加入50毫升有70%乙醇，再采用超聲對(duì)其進(jìn)行30分鐘的處理（300w，45kHz），最后，采用0.45μL的濾膜進(jìn)行過濾，取續(xù)濾液即可得到[3]。

補(bǔ)骨脂：取0.5克的大黃對(duì)照藥材，將其放入錐形瓶中，在其中加入25毫升70%乙醇，再采用超聲對(duì)其進(jìn)行30分鐘的處理（300w，45kHz），最后，采用0.45μL的濾膜進(jìn)行過濾，取續(xù)濾液即可得到[4]。

2.結(jié)果

色譜柱的相似度越高，對(duì)大黃的分離效果也就越弱，對(duì)補(bǔ)骨脂的分離規(guī)律也就越不明顯。

3.討論

在USP法中，高效液相色譜在進(jìn)行性能評(píng)價(jià)時(shí)，一般采用NIST標(biāo)準(zhǔn)參照物來評(píng)價(jià)色譜柱，具體而言，參照物可包括尿嘧啶、甲苯、乙苯、阿米替林等。而通過一系列的測(cè)試，最終得出了色譜柱的四個(gè)參數(shù)，即：疏水性、螯合性、硅醇基活性、空間選擇性。而在對(duì)這四個(gè)參數(shù)進(jìn)行比較時(shí)，一般采用5個(gè)值來進(jìn)行表示，即：Hy、CTF、CFA、TFA、BD，分別表示為乙苯的容量因子、醌茜的拖尾因子、阿米替林的容量因子、阿米替林的拖尾因子、結(jié)合密度。

通過上文的應(yīng)用試驗(yàn)證明，色譜柱的相似度越高，對(duì)大黃的分離效果也就越弱，對(duì)補(bǔ)骨脂的分離規(guī)律也就越不明顯。而通過對(duì)大黃、補(bǔ)骨脂的分析，可以對(duì)以下三點(diǎn)進(jìn)行明確，即：

（1）現(xiàn)今所存在的色譜柱選擇方法可以應(yīng)用在中藥分析中，不僅可以提升分析方法的重現(xiàn)性，而且可以實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的傳遞。

（2）色譜柱的評(píng)價(jià)較為復(fù)雜，且分離效能不僅與色譜柱本身存在聯(lián)系，而且和藥材的性質(zhì)存在一定的聯(lián)系。

（3）色譜柱選擇方法不夠完整，有待改善，一種色譜柱選擇方法也難以適應(yīng)多種中藥材的分析。

[1]童杰文，張盛，李娟，李佳銀，蔡燕南，李銀花.高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分析[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2015，(02):44-46.

[2]葉六平，孫磊，王明娟，金紅宇，汪暐東，馬雙成.等效色譜柱選擇在大黃和補(bǔ)骨脂多成分高效液相色譜分析中的應(yīng)用[J].藥物分析雜志，2015，35(06):945-953.[2017-08-04].DOI：

[3]陳永剛，張培影，馬傳學(xué)，吳世強(qiáng)，劉大躍.五參二連顆粒高效液相色譜指紋圖譜研究及多成分定量分析[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2013，44(06):604-608.[2017-08-04].

[4]賴正權(quán)，易宇陽，廖慧君，蘇冀彥，廖祝元，林吉，蘇子仁.苦木注射液高效液相色譜指紋圖譜研究及多成分定量分析[J].中國(guó)中藥志，2011，36(13):1739-1743.[2017-08-04].