高膽紅素對干、濕化學(xué)法測定血氨的影響

李海寧，李小佩，宋曉東，劉 波，張春艷

(南京醫(yī)科大學(xué)：1康達(dá)學(xué)院,2康達(dá)學(xué)院附屬醫(yī)院,江蘇連云港222100)

0 引言

肝性腦病是指在排除其他已知腦疾病前提下,繼發(fā)于肝功能紊亂的一系列嚴(yán)重的精神神經(jīng)綜合征,主要臨床表現(xiàn)為意識障礙、行為異常和昏迷［1］。血氨是一個(gè)反映肝功能嚴(yán)重?fù)p傷與否的良好指標(biāo),肝臟嚴(yán)重?fù)p傷時(shí),血氨濃度升高,是引起肝性腦病的重要原因［2－5］。臨床血氨的測定過程中,由于肝炎患者的血清標(biāo)本多為高膽紅素性血清標(biāo)本,對血氨的測定有一定的干擾,導(dǎo)致血氨的檢測結(jié)果明顯低于實(shí)際水平,甚至出現(xiàn)負(fù)值這種明顯偏離臨床的現(xiàn)象［6］。為此,本研究通過濕化學(xué)法與干化學(xué)法比較高膽紅素血清原標(biāo)本和稀釋后標(biāo)本的血氨濃度,發(fā)現(xiàn)采用稀釋去除膽紅素的方法或采用準(zhǔn)確性、特異性較好的干化學(xué)法來檢測肝病患者血氨水平,可獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本來源選取南京醫(yī)科大學(xué)康達(dá)學(xué)院附屬醫(yī)院自2017年6月至2018年6月收治的重度黃疸肝病患者40例作為觀察組,其中男22例,女18例,年齡40～65歲,平均年齡為(53.6±3.5)歲,膽紅素含量＞100 μmol/L；同時(shí)期正常對照組40例,其中男23例,女17例,年齡42～66歲,平均年齡為(54.2±3.6)歲,膽紅素含量＜19 μmol/L。兩組標(biāo)本年齡、性別等無明顯差異,具有可比性。

1.2 方法兩組患者體內(nèi)的膽紅素及血氨測定均采用全自動(dòng)生化分析儀完成,所選試劑為儀器的配套試劑。對照組與觀察組分別給予干化學(xué)法及濕化學(xué)法進(jìn)行檢測,分別對比兩組行不同檢測方法下的血氨濃度。根據(jù)前期倍比稀釋標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,標(biāo)本的膽紅素濃度選擇相應(yīng)的稀釋倍數(shù),使稀釋后膽紅素濃度降至19 μmol/L以下,再分別給予干化學(xué)法及濕化學(xué)法進(jìn)行檢測,對比觀察組去除高膽紅素前后行不同檢測方法下的血氨濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所得數(shù)據(jù)通過SPSS18.0軟件進(jìn)行分析,以±s的形式對數(shù)據(jù)進(jìn)行表示,計(jì)量資料采取t-檢驗(yàn),P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組干、濕化學(xué)法檢測的血氨濃度比較行濕化學(xué)檢測的患者血氨濃度為(38.69±7.06)mmol/L,行干化學(xué)法檢測的患者血氨濃度為(85.15±9.06)mmol/L,組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝4.042,P＜0.05)。

2.2 觀察組稀釋法去除高膽紅素前后的血氨濃度比較濕化學(xué)法檢測去除高膽紅素后血氨濃度為(85.63±8.02)mmol/L,與未去除高膽紅素前(38.69±7.06)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝4.474,P＜0.05)。干化學(xué)法檢測去除高膽紅素后血氨濃度為(88.00±8.73)mmol/L,與未去除高膽紅素前(85.15±9.06)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝0.227,P＞0.05,圖1)。

2.3 對照組干、濕化學(xué)法檢測的血氨濃度比較行濕化學(xué)法檢測的患者共40例,血氨濃度為(46.55±8.87)mmol/L,行干化學(xué)法檢測的患者共40例,血氨濃度為(49.76±8.89)mmol/L,組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝0.256,P＞0.05),這與之前的文獻(xiàn)報(bào)道［7］相一致。

3 討論

目前臨床血氨檢測過程中的影響因素較多,比如溶血、脂血、高膽紅素、標(biāo)本運(yùn)輸時(shí)間及保存等,導(dǎo)致檢測結(jié)果的差異大、準(zhǔn)確性差,從而嚴(yán)重影響臨床的診療工作［8－10］。 血氨測定方法中,以濕化學(xué)法(谷氨酸脫氫酶法)和干化學(xué)法最為常見。濕化學(xué)法具有特異性高、標(biāo)本用量少及快速的優(yōu)點(diǎn)［11］,其主要的原理是R1試劑含有少量乳酸脫氫酶,在預(yù)反應(yīng)中除去血漿中干擾氨測定的丙酮酸,氨在谷氨酸脫氫酶作用下與α-酮戊二酸、NAD(P)H反應(yīng),在340 nm吸光度的下降與血氨濃度成正比,通過與標(biāo)準(zhǔn)液比較,即可計(jì)算出標(biāo)本中氨的含量。干化學(xué)法檢測血氨具有避免交叉污染、操作簡便、反應(yīng)快速的優(yōu)點(diǎn),是臨床血氨檢測的常用方法。標(biāo)本加樣后所有的反應(yīng)均在一張干片中進(jìn)行,并可通過分布層去除大分子物質(zhì)的干擾,血漿中氨通過半透膜到達(dá)指示層與氨指示劑發(fā)生反應(yīng),呈深藍(lán)色,顏色的深淺與標(biāo)本中氨含量成正比［12］。

濕化學(xué)法測定血氨時(shí),標(biāo)本中高濃度的膽紅素會(huì)吸收一定的光波,膽紅素經(jīng)血紅素加氧酶作用后生成膽綠素,再經(jīng)還原酶作用生成間接膽紅素的過程中可提供2個(gè)H+,起到抗氧化的作用［13］,其大量存在時(shí)影響谷氨酸脫氫酶法中的氧化反應(yīng),對血氨檢測造成干擾。而干化學(xué)法具有較高的特異性和準(zhǔn)確性,血漿中的氨通過半透膜到達(dá)指示層與氨試劑反應(yīng),可消除標(biāo)本本身高膽紅素的影響,對血氨檢測結(jié)果影響較小。本研究測定結(jié)果顯示應(yīng)用濕化學(xué)法及干化學(xué)法對高膽紅素血癥患者的血氨檢測,干化學(xué)法結(jié)果明顯高于濕化學(xué)法,其檢測結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。濕化學(xué)法測定高膽紅素血癥患者血氨水平時(shí),稀釋法去除高膽紅素可以有效提高血氨水平,稀釋前后的檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而干化學(xué)稀釋前后的血氨水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),這與之前的報(bào)道干化學(xué)法在分析性能上優(yōu)于濕化學(xué)法也是一致的［14］。

多數(shù)肝病患者的血清標(biāo)本高膽紅素水平較高,而高膽紅素在血氨的測定過程中具有負(fù)干擾作用,濕化學(xué)法難于準(zhǔn)確檢出患者的血氨水平,甚至出現(xiàn)負(fù)值這種明顯偏離臨床的現(xiàn)象。而干化學(xué)法相較于濕化學(xué)法則能提供相對準(zhǔn)確的血氨檢測結(jié)果,協(xié)助臨床準(zhǔn)確判斷患者血氨水平,及時(shí)給予有效的治療措施。同時(shí),由于干、濕化學(xué)法測定血氨濃度的差異性,建議復(fù)查時(shí)選擇同一方法去檢測,真實(shí)地反映血氨濃度的變化情況［15］。

4 結(jié)語

對于一般標(biāo)本,濕化學(xué)法與干化學(xué)法血氨濃度檢測水平基本一致,可以采用低成本濕化學(xué)法檢測血氨水平,而對于高膽紅素血癥患者的標(biāo)本,由于檢測結(jié)果受檢測方法及膽紅素濃度的影響,則應(yīng)采用稀釋的方法或采用準(zhǔn)確性、特異性較高的干化學(xué)法來檢測,從而獲得準(zhǔn)確的血氨檢測結(jié)果。