HPLC法測定鉤藤提取物中鉤藤堿含量

張建奇 金海燕

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定鉤藤提取物中鉤藤堿的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調pH=9.8（20：30：50）為流動相，檢測波長為240nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。鉤藤堿在5～50μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。鉤藤堿平均回收率分別為99.5%。結論：本法簡便、準確，可用于鉤藤提取物中鉤藤堿的含量測定。

關鍵詞：鉤藤提取物；含量；測定

鉤藤始載于《別錄》，原名釣藤。鉤藤別名為吊藤（陶弘景）、釣鉤藤（《滇南本草》）、金鉤藤（《貴州民間方藥集》）、掛鉤藤（《藥材學》）、鉤耳（《湖南藥物志》）等。鉤藤具有清熱平肝，熄風止痙的功效。《本草新編》記載：“鉤藤，去風甚速，有風癥者必宜用之。但風火之生，多因于腎水不足，以致木燥火炎，于補陰藥中，少用鉤藤，則風火易散，倘全不補陰，純用鉤藤以祛風散火，則風不能息，而火且愈熾矣。”鉤藤具有抗炎、鎮痛、抗腫瘤等多種藥理作用[1-4]。本文采用高效液相法對鉤藤提取物中的鉤藤堿的進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：VWR天平防震墊（北京慧龍環科環境儀器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃實業發展有限公司）；天星進樣瓶清洗機TX-500型（北京天星科儀科技有限公司）；LC1620A高效液相色譜儀（河南鄭州南北儀器設備有限公司）；長城獅鼎SHB-III型臺式循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；Milli-Q Direct水純化系統（上海力晶科學儀器有限公司）；新芝scientz-T超聲波提取機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：鉤藤堿。

1.4試劑：醋酸鈉（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、乙酸銨（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、氨水（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、冰醋酸（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、甲醇（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、三乙胺（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、乙腈（北京市津同樂泰化工產品有限公司）。

1.5 試藥：鉤藤提取物。

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[5-6]。流動相：乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調pH=9.8（20：30：50）為流動相，檢測波長：240nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按鉤藤堿峰計算應不得低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4 小時的鉤藤堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取提取物適量，精密稱定，加15毫升甲醇溶液超聲處理0.5小時，放冷，濾過，濾液置25ml量瓶中，用少量甲醇溶液分次洗滌容器和殘渣，洗液濾人同一量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗

精密稱取鉤藤堿對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.78%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量鉤藤堿對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，鉤藤堿在5～50μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6 重現性試驗

稱取同一批的鉤藤堿樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.69%，結果表明此方法的重現性良好。

2.7 準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入鉤藤堿對照品，按項下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.5%，RSD為0.98%。

2.8 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定鉤藤提取物三批樣品。

3 討論

分別考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），甲醇-0.01mmol·L-1三乙胺水溶液（80∶20），甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.5），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調pH=9.8（30：30：40），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調pH=9.8（20：30：50）不同比例的流動相，結果以乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調pH=9.8（20：30：50）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸銨水溶液用氨水調pH=9.8（20：30：50）為流動相為流動相。本實驗采用高效液相法效果好、方法簡便、快捷、準確、專屬性好，可用于鉤藤提取物中鉤藤堿的含量測定。

參考文獻

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