HPLC法考察馬蹄甲中阿維菌素的殘留

劉麗+李正剛

【中圖分類號】R657 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）12--02

馬蹄甲（Equus caballus orientalis Noack）為馬科動物馬Equus caballus（L.）的蹄甲入藥，屬于奇蹄目馬科馬屬。其來源馬在夏天多雨的季節，都會感染皮膚病。螨蟲病時有發生，，發病馬匹多在眼瞼周圍、額部、鼻部、嘴唇、頸下部、肘部和四肢遠端出現脫毛、禿斑，治療通常采取肌肉注射或者口服阿維菌素，驅除體內、外寄生蟲，療效好，給藥方便。

近年來，隨著人們對動物源產品由需求型向質量型的轉變，動物藥中的獸藥殘留已逐漸成為全世界關注的一個焦點。食品添加劑和污染物聯合專家委員會從20世紀60年代起開始評價有關獸藥殘留的毒性，為人們認識獸藥殘留的危害及其控制提供了科學依據。因此，本文對動物藥馬蹄甲來源馬常用藥阿維菌素進行藥物殘留檢測，為馬蹄甲的進一步開發使用提供安全保障。

1 試劑和材料

1.1 試劑 ：丙酮（C3H6O）：色譜純；甲醇（CH4O）：色譜純。

1.4 阿維菌素標準品：CA10001000，Lot：114223，含量96.4%，來源：Dr.Ehrenstorfer GmbH。

1.3 標準溶液配制

1.3.1 阿維菌素標準儲備液：稱取0.1 g（準確至0.0002 g） 阿維菌素標準品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度配制成濃度為1.0 mg/mL的標準儲備液。

1.3.2 阿維菌素標準工作液：根據需要移取適量的阿維菌素標準儲備液，用甲醇稀釋成適當濃度的標準。標準工作液需每周配制一次。

2 儀器和設備

高效液相色譜儀型號：Agilent1260，配有二極管陣列檢測器； BP211D型分析天平；組織搗碎機；HY-2型調速多用振蕩器；EV311型旋轉蒸發器； 固相萃取柱：SPE C18。

3 高效液相色譜參考條件

色譜柱：WondaCract ODS- 2.5μm，4.6×250mm，C/N 8520-3993；流動相：甲醇：水=（90+10，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：245 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL。

4 分析步驟

4.1 提取

稱取試樣約20 g（精確至0.1 g）于100 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL丙酮，于振蕩器上振蕩0.5 h用布氏漏斗抽濾，用20 mL×2丙酮洗滌錐形瓶及殘渣。合并丙酮提取液，于40 ℃水浴旋轉蒸發至約2 mL。

4.2 凈化。將上述的濃縮提取液完全轉入SPE C18柱，再用5 mL水淋洗，去掉淋洗液。最后用5 mL甲醇洗脫，收集洗脫液，用氮氣吹至近干。準確加入1.0 mL甲醇溶解殘渣，用0.45 μm濾膜過濾，濾液供液相色譜測定。外標法定量。

5 系統適應性考察

5.1 空白試驗。取空白試料采用完全相同的測定步驟進行平行操作，無干擾峰出現。見圖1。

5.2 線性：準確量取適量阿維菌素標準貯備液，用水配制成阿維菌素濃度為0.2μg/mL，0.4μg/mL，1.0μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL的標準系列工作液，依次進行測定，以峰面積為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線，通過回歸計算，得到回歸方程：Y=3.40X+0.148，r=0.999，結果表明線性關系良好。見圖2。

5.3 精密度試驗。稱取試樣6份，每份20.0g ，分別加入9.734μg/mL的阿維菌素標準溶液100μl，按照4.1、4.2操作進行提取和凈化，對照品采用線性對照品（濃度：0.973g/mL），按液相色譜法測定，RSD為1.0%，結果表明精密度良好。

5.4 回收率試驗

稱取試樣9份，每份20.0g，每三份分別加入阿維菌素標準工作溶液（0.195μg/mL、0.973μg/mL、9.734μg/mL）各1.0ml，按樣品同法制備，對照品采用線性對照品（濃度：0.973g/mL），按液相色譜條件進樣測定，計算回收率，平均回收率分別為90.5%，91.4%，96.1%。

5.5 樣品測定

取樣品3批，按4.1、4.2操作進行提取和凈化，按液相色譜條件進樣測定，計算含量，3批樣品阿維菌素均未檢出。見圖3。

5 結論

本實驗建立了馬蹄甲中阿維菌素藥物殘留的高效液相色譜法，其前處理簡單，靈敏度高，準確度高，精密度和各項技術符合殘留檢測的相關要求，可用于馬蹄甲中阿維菌素藥物殘留的檢測。

參考文獻：

王修軍，李鳳玲，倪景麗，等.呼吸機輔助呼吸加血液灌流治療阿維菌素中毒[J].內科急危重癥雜質，2007，01（13） ：44-46.

鄭衛東，胡江濤，陰文婭，等. 高效液相色譜-串聯質譜測定豬肝中阿維菌素、伊維菌素殘留[J].分析檢測，2011，04（32）：185-188.

中華人民共和國農業部第235號.動物性食品中獸藥殘留最高殘留限量[S]。2002.

張啟迪，鄒明，劉文華，等.阿維菌素殘留檢測中不同SPE柱凈化效果的比較研究[J].中國動物檢疫，2007，24（12）：29-30.

田潔蓮，田子卿. 液相色譜法檢測韭菜中阿維菌素殘留方法的改進.[J].食品安全質量檢測學報，2015，01（6）：289-292.endprint