強力升白片中沒食子酸的含量測定方法研究

謝奇+樊鑫梅

【摘要】目的：構建強力升白片中沒食子酸的含量測定方法，以更好控制此產品質量。方法：運用反相高效液相色譜法，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相，ALLTIMA C18為色譜柱，檢測波長為265nm。結果：當食子酸的進樣量處于0.040～0.240μg區間內時，其與峰面積值之間線性關系較好（r=0.9999）。相對標準差（RSD）1.96%，平均加樣回收率100.41%。結論：高效液相色譜法準確、可靠，且簡便、易操作，可以用作此產品的質量控制。

【關鍵詞】強力升白片；高效液相色譜法；沒食子酸；質量

【中圖分類號】R927.2 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）12-0-02

強力升白片由多種中藥組成，如丹參、黃芪、地榆等，具有活血、益氣等功效，多用于治療由化療、放療等所造成的白細胞減少，總體效果佳[1]。此產品原為地方品種，當將其更改為部頒品種之后，開始以藥方君藥地榆中的沒食子酸作為主要指標成分，構建了專門用于測定沒食子酸含量的高效液相色譜（HPLC）法，為更好控制此產品質量，提供了準確、客觀、高效的定量評價方法。

1 儀器與試藥

（1）儀器。選用由美國Waters公司生產的高效液相色譜儀（515型）與紫外檢測器（2487型）；日本島津生產的紫外可見分光光度計（UV-2200）；德國Sartorius公司產的萬分之一電子天平。（2）試藥。選用由中國藥品生物制品檢定提供的沒食子酸，當完成色譜條件的選定及分離后，依據歸一化法進行計算，得出沒食子酸含量為99.27%，用P2O5干燥器進行減壓干燥處理，使其至恒重。所選用乙腈、甲醇，均為色譜純，而諸如磷酸等試劑，則均為分析純，所用水為重蒸餾水。

2 方法與結果

（1）色譜條件。色譜柱為ALLTIMA C18，250mm×4.6mm，5μm，柱溫為30℃。流動相為0.1%磷酸溶液-乙腈-甲醇，比例為89：6：5；靈敏度為0.01AUFS，流速為1.0ml/min，檢測波長265nm。（2）確定檢測波長。精取適量沒食子酸對照品，流動相稀釋，即2.0μg/ml，設定流動相為空白，于200～600nm波長區間內，掃描操作。最終結果得知，波長為270nm處，Cur吸收最大。（3）制備標準曲線。取適量對照品（沒食子酸），甲醇溶解、稀釋，制成儲備液（20.0μg/ml），然后分別精取2.0μl、4.0μl、6.0μl、8.0μl、10.0μl與12.0μl，進樣，繪制色譜圖，完成其峰面積測定工作；然后以峰面積值（A），回歸分析進樣量（C），最終可得到回歸線方程，即A= 1.095×103+2.687×106C，r=0.9999。由此可知，沒食子酸進樣量處于0.040～0.240μg區間內，其與峰值面積值之間，線性關系較好。（4）制備供試品溶液。取1g重量差異項下內容物，置入燒瓶，加入25ml濃度為50%的甲醇，稱重，沸水浴中，回流，提取1h，然后置于室溫環境，再次稱重，用濃度為50%的甲醇，將減失重量補充，濾過處理后，便得。將色譜條件選定之后，對于沒食子酸中以及其它樣品中的其它組分色譜峰，可以進行基線分離，分離度>1.5；依據沒食子酸峰來進行細致計算，拖尾因子（T）1.01，理論板數（N）>3000，此外，精取陰性供試品，將其放置在沒食子酸色譜峰處，未出現色譜峰。（5）精密度試驗。精取10μl試品溶液，連續進行5次進樣，測出沒食子酸峰面積相對標準差（RSD），即0.73%。由實驗得知，整體精密度較好。（6）穩定性試驗。精取供試液，分別在0h、2 h、4 h、6 h與8 h時，進樣10μl，得出沒食子酸峰面積值RSD為0.45%。表明，供試液在8h內，有著較好的穩定性。（7）重復性試驗。依據上述制定好的含量測定法，分別取5份同一批次的樣品，依次制備對應的樣品供試液，經檢測得知，沒食子酸含量RSD為0.70%。（8）回收率實驗。分別取已經知道含量的樣品（含量為0.2302mg/g），均為0.5g，然后分別將其加入至沒食子酸對照品溶液中，沒食子酸對照品溶液劑量分別為100μl、200μl、300μl，添加完畢后，進行樣品供試液的精確制備，測定沒食子酸的含量，最終完成回收率的計算。（9）測定樣品。分別對三批中試樣品（020207、020208、020209）中進行沒食子酸含量與相對標準差的測定，最終結果得知，020207的沒食子酸含量為0.0230mg/片，相對標準差為0.59%；020208的沒食子酸含量為0.0311mg/片，相對標準差為0.80%；020209的沒食子酸含量為0.0325mg/片，相對標準差為0.55%。

3 討論

有研究[2]分別利用HPLC法、薄層色譜法，對沒食子酸含量進行了測定。本次研究曾依據文獻，用甲醇-水-N、甲醇-水，將冰醋酸溶液-二甲基甲酰胺- N作為流動相，但最終仍難以較好的對本品中沒食子酸含量進行有效分離與準確測定。沒食子當中主要為可水解的鞣質，通過加熱處理，能夠從中提取沒食子酸，所以，本次試驗選用反相高效液相色譜法，來測定強力升白片中沒食子酸的含量。由本次試驗得知，將一定量乙腈-濃度為0.1%磷酸溶液-甲醇作為流動相，并對流動相比例、柱溫、流速等色譜條件進行適當性優化，能夠較好的從本品中將沒食子酸峰分離出來，另外，經實驗還得知，所構建的高效液相色譜測定方法，在測定地榆藥材中沒食子酸含量中，同樣適用。用不同提取時間（0.5h、1 h、1.5 h與2 h）、不同提取方法（超聲或回流）、不同溶劑（50%甲醇、75%甲醇、乙醇、甲醇），提取本品中的沒食子酸。最終結果得知，1.0g本品，用25ml濃度為50%的甲醇，回流提取1h，有著良好的提取效果。究其原因，因為地榆中的可水解鞣質，具有較差的穩定性，若放置較長時間，或加熱煮沸，便能分解成沒食子酸，因此，最終選回流提取。由本次實驗整體結果可知，本方法重現性好，而且準確、靈活，可用作此產品、地榆藥材中沒食子酸含量的測定，便于其質量控制。

綜上所述，高效液相色譜法準確、可靠，且簡便、易操作，可以用作此產品的質量控制。

參考文獻：

胡佳， 王澤宇， 廣兵，等. HPLC同時測定地榆升白片中沒食子酸和（+）-兒茶素的含量[J]. 中藥與臨床， 2016， 7（2）：49-51.

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