高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定雞尾酒中7種合成色素

□ 周欣蕊 金昱言 趙 洋 王 婷 吉林省食品檢驗(yàn)所；吉林省安信食品技術(shù)服務(wù)有限責(zé)任公司

人工合成色素用于食品著色，可以使食品色彩鮮艷、著色能力強(qiáng)，要比天然色素穩(wěn)定，但人工合成色素的安全問(wèn)題備受關(guān)注[1]。目前，檢測(cè)合成色素的方法有氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、離子色譜法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法、離子選擇電極法、光度法、極譜法、伏安法等。多組分混合色素的分析，薄層色譜操作比較繁瑣[2]；色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法靈敏度和分辨率都很高，但是儀器昂貴；極譜法易受到干擾，很難定性；光度法需要化學(xué)計(jì)量學(xué)的方法，數(shù)據(jù)處理較繁瑣；毛細(xì)管電泳法的重現(xiàn)性很差[3]。所以本次實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法進(jìn)行混合色素的測(cè)定。

如今市場(chǎng)上新興一類雞尾酒，就是利用五彩斑斕的顏色吸引了廣大消費(fèi)者的眼球，這種顏色的產(chǎn)生正是因?yàn)樘砑恿巳斯ず铣缮豙4]。為了保障食品的安全，我國(guó)現(xiàn)行有效標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014《食品安全果酒標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》，規(guī)范著食品添加劑的使用。其中在雞尾酒中對(duì)于檸檬黃、日落黃、胭脂紅、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、莧菜紅的使用提出了限值[5]。本次實(shí)驗(yàn)利用高效液相色譜技術(shù)根據(jù)GB 5009.35-2016《食品安全果酒標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》測(cè)定雞尾酒中的檸檬黃、日落黃、胭脂紅、亮藍(lán)、赤蘚紅，根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 1743-2006《食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測(cè)高效液相色譜法》測(cè)定雞尾酒中的誘惑紅。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

甲 醇，MS 1922-001； 乙 酸 銨，分析純，國(guó)藥集化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，10001218； 檸 檬 黃，0.5 mg/mL，GBW(E)100001a；莧菜紅，0.5 mg/mL，GBW(E)100002a；胭脂紅，0.5 mg/mL，GBW(E)100004a；赤蘚紅，100 μg/mL，GBW(E)100191； 亮 藍(lán)，0.5 mg/mL，GBW(E)100005a；日落黃，0.5 mg/mL，GBW(E)100003a，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院出產(chǎn)；誘惑紅，1.0 mg/mL，GBW(E)100164為北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司出產(chǎn)；超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀，SHIMADZU，LC-20AT；電子天平，AB204-N；超純水制備系統(tǒng)，Milli-Q，德國(guó)默克密理博公司；色譜柱ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm×5 μm）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍(lán)、誘惑紅、赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液按照一定的比例，用超純水稀釋混合得到質(zhì)量濃度分別為1.0、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，置于4 ℃冰箱保存。

1.4 樣品制備

選用的樣品均為市售的雞尾酒：1#朗姆預(yù)調(diào)酒-荔枝味；2#威士忌預(yù)調(diào)酒-藍(lán)玫瑰味；3#伏特加預(yù)調(diào)酒-藍(lán)莓味；4#威士忌預(yù)調(diào)酒-芒果味；5#白蘭地預(yù)調(diào)酒-水蜜桃味；6#白蘭地預(yù)調(diào)酒-草莓味。

制備方法：稱取15.00 g樣品置于50.0 mL比色管中，直接定容至50 mL渦旋混勻，過(guò)0.45 μm水膜，備用，上機(jī)。和很多前處理方法相比較，省去了很多繁瑣的過(guò)程，但是仍保留了實(shí)驗(yàn)的精準(zhǔn)性。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 液相色譜條件選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)

利用二極管陣列檢測(cè)器采集檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅7種合成色素在190～800 nm的光譜圖，將其最大吸收波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)：檸檬黃424 nm、胭脂紅508 nm、莧菜紅530 nm、日落黃484 nm、誘惑紅510 nm、亮藍(lán)610 nm、赤蘚紅530 nm。

2.1.2 梯度洗脫條件

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為10 μL，0.02 mol/L乙酸銨溶液加入5%甲醇+甲醇作為流動(dòng)相，根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)7種色素的分離情況，最終確定了梯度洗脫的方式。梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫條件

在最佳色譜條件下，對(duì)0.01 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行分析，其色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 實(shí)驗(yàn)線性關(guān)系及檢出限

在實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)7種色素的標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液進(jìn)行檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍：1～50 μg/mL，得到對(duì)應(yīng)的線性回歸方程，按3倍的信噪比計(jì)算出7種色素的檢出限，各色素的保留時(shí)間、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)R2以及檢出限見(jiàn)表2。

2.3 實(shí)驗(yàn)回收率及精密度測(cè)定

選用樣品1#進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定，稱取3份，添加7種色素，添加濃度分別是1、3、5 mg/kg，按照樣品制備方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3中可以看出，樣品加標(biāo)后的回收率為96.7%～103.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值為0.61%～1.65%。加標(biāo)濃度為5 mg/kg的1#荔枝味雞尾酒樣品色譜圖如圖2所示。

表3 7種合成色素的加標(biāo)回收率和精密度

2.4 實(shí)際樣品的測(cè)定

對(duì)市售的不同品牌、不同味道的6份雞尾酒樣品進(jìn)行了測(cè)定，根據(jù)各色素峰保留時(shí)間以及光譜圖進(jìn)行定性，外標(biāo)法峰面積定量分析。其中有5份雞尾酒有不同的色素檢出，日落黃和赤蘚紅沒(méi)有檢出。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[6]配制酒中合成色素限量值：檸檬黃≤0.1 g/kg、莧菜紅≤0.05 g/kg、胭脂紅≤0.05 g/kg、日落黃≤0.1 g/kg、誘惑紅≤0.05 g/kg、亮藍(lán)≤0.025 g/kg、赤蘚紅≤0.05 g/kg。該6種不同品牌的雞尾酒均符合國(guó)家規(guī)定，屬于合格產(chǎn)品。具體檢出值見(jiàn)表4。

3 結(jié)論

本文建立了雞尾酒中檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅7種合成色素的高效液相色譜測(cè)定方法。該方法樣品前處理簡(jiǎn)單，在28 min內(nèi)可以同時(shí)分析出7種色素，且檢出限為0.05～0.1 μg/mL，在1.0～50 μg/mL 范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999 88，回收率為96.7%～103.3%，RSD為0.61%～1.65%。從上述結(jié)果可知，該方法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)高效、有良好的重現(xiàn)性，由此可用于測(cè)定雞尾酒中合成的色素。

圖1 7種色素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

表2 7種色素保留時(shí)間、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

圖2 加標(biāo)后1#荔枝味雞尾酒樣品色譜圖

表4 雞尾酒樣品中色素含量（g/kg）

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì). GB/T 5009.29-2016食品中梨酸、苯甲酸的測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

[2]沈堅(jiān),傅曉,潘旭,等.高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物性食品中合成色素[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè),2011(2)：139-143.

[3]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.28-2016 食品中糖精鈉的測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

[5]趙麗.偏最小二乘法-分光光度法同時(shí)檢測(cè)6種合成色素的研究[J].福建分析測(cè)試,2015(5)：13-17.

[6]張玉萍.食品中合成色素的應(yīng)用及其檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全,2013(5)：44-47.