八珍益母丸中芍藥苷的HPLC法測定結果的不確定度評價

馬曉靜，崔業波，高楠楠

(四平市食品藥品檢驗所，吉林 四平 136000)

·中藥工業·

八珍益母丸中芍藥苷的HPLC法測定結果的不確定度評價

馬曉靜*，崔業波，高楠楠

(四平市食品藥品檢驗所，吉林 四平 136000)

目的對八珍益母丸中芍藥苷的HPLC法測定結果的不確定度進行分析，找出影響不確定度的因素。方法參照《中華人民共和國藥典》2015版一部八珍益母丸含量測定方法，對測定過程和步驟進行量化分析，計算合成不確定度，并確定測量結果在95%置信區間下的擴展不確定度。結果采用HPLC法測定八珍益母丸中芍藥苷含量的擴展不確定度為每丸0.20 mg。結論對照品的稱量是本次實驗不確定度的主要來源，對稱量過程的嚴格控制有利于提高檢測結果的可靠性、準確性。

八珍益母丸；芍藥苷；含量測定；不確定度；高效液相色譜法

測量不確定度是表征合理地賦予被測量之值的分散性，是與測量結果相聯系的參數。在實驗室引入不確定度評價對評估檢驗結果的可靠性和檢驗報告質量合格具有重大意義，通過不確定度的評定，可以得到被測量值合理的分布區間，有效地提高檢驗結果的準確性[1-2]。而中成藥由于成分復雜，其質量控制的不確定度來源要大于化學藥品，近些年來中成藥的不確定度評定也越來越得到重視[4-6]。為此，本研究依據2015年版《中華人民共和國藥典》一部八珍益母丸含量測定項下的方法，參照《化學分析中不確定度的評估指南》(CNAS-GL06)和《測量不確定度評定與表示》(JJF 1059.1-2012)，對八珍益母丸中芍藥苷的含量測定不確定度的來源進行分析，并對實驗過程中產生的不確定度分量進行評價，為該實驗過程的控制和檢驗報告的評估提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AgiLent1260高效液相色譜儀；BP211D型電子天平(賽多利斯)；KQ-300DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2

芍藥苷(中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201438，含量：94.9%)；乙腈為色譜純；水為高純水。

八珍益母丸(大蜜丸)均為市售(藥都制藥集團股份有限公司，批號：150202)；吉林市鹿王制藥股份有限公司，批號分別為：140901、141102)。

2 方法

2.1 色譜條件

以InertsiL ODS-3(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱；以乙腈-0.1%磷酸(13∶87)為流動相；檢測波長為230 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品14.38 mg，置于100 mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液。精密量取上述對照品儲備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，即得濃度為14.38 μg·mL-1的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取10丸八珍益母丸，精密稱定，剪碎，混勻，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理40 min，放冷，再精密稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，即得[7]。

2.4 重復性試驗

取八珍益母丸樣品(批號：150202)，按供試品溶液制備的方法平行處理6份供試品溶液，按照2.1項下色譜條件進行測定，八珍益母丸中芍藥苷的含量為7.05 mg/丸，RSD為1.84%。

2.5 加樣回收率

取八珍益母丸樣品(批號：150202)約1 g，精密稱定，共6份，分別精密加入對照品儲備液1 mL，按供試品溶液制備方法同法處理，按2.1項下色譜條件進行測定，計算得芍藥苷的回收率為101.57%，RSD為1.94%。

2.6 樣品測定

取3批八珍益母丸各適量，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，再按2.1色譜條件進行測定，按外標法計算含量，結果見表3。

3 檢驗結果的不確定度分析

3.1 建立數學模型

八珍益母丸中芍藥苷含量測定的數學模型：

期中X：每丸中芍藥苷的含量(mg/丸)，A樣：樣品的峰面積，A對：對照品峰面積，W對：對照品的稱取量，W樣：樣品的稱取量，W平均：供試品的平均丸重，P：對照品純度，V樣：樣品稀釋倍數，V對：對照品稀釋倍數。

3.2 不確定度來源分析

八珍益母丸中芍藥苷含量測定的不確定度來源主要有以下幾個方面：對照品、供試品的稱量(W對、W樣、W平均)引入的不確定度、對照品和供試品溶液制備過程中稀釋體積(V樣、V對)引入的不確定度、對照品和樣品峰面積(A樣、A對)的重復性和準確性引入的不確定度。測定中由重復性所引起的不確定由方法學驗證中的重復性數據表達，由準確性及其他諸多因素帶來的不確定度由回收率測定的不確定度表達。

3.3 不確定度分量的量化

3.3.1 對照品純度引入的相對標準不確定度 芍藥苷對照品由中國食品藥品檢定研究院提供，僅給出純度為94.9%，并未給定其不確定度信息，故在此不對其進行評定。

表1 對照品稀釋過程玻璃量具校準和溫度變化引入的標準不確定度

表2 重復性及回收率試驗結果(n=6)

3.3.9 合成標準不確定度 將以上不確定度分量合成，得到八珍益母丸每丸含芍藥苷的相對標準不確定度：

試驗中測得樣品中每丸芍藥苷的含量為7.09 mg(批號：150202)，得到合成標準不確定度u(X)=1.43×10-2×7.09=0.10 mg。

3.3.10 計算擴展不確定度 U=Κ·u(X)，K取2，P=95%，則八珍益母丸每丸中芍藥苷的擴展不確定度為0.20 mg。

3.3.11 測定結果的表示 根據不確定度評定結果，八珍益母丸每丸中芍藥苷含量的測定結果可表示為X=(7.09±0.20)mg，其他批次結果及擴展不確定度見表3。

表3 樣品含量測定結果

4 討論

本研究通過檢驗檢測過程和數學模型確定不確定度的來源，并通過計算各分量的合成不確定度來確定各個分量對總不確定度的貢獻。研究結果表明，對照品的稱量是主要的不確定度來源，其次是由測量的準確度和重復性引起的不確定度，供試品稱量和稀釋體積等分量對不確定度影響較小。因此，在檢驗工作中應使用高精度天平和增大對照品的取樣量、定期對HPLC色譜儀進行校準檢定，提高檢驗人員操作技術水平來提高檢驗結果的可靠性。通過對八珍益母丸中芍藥苷測定的不確定度評價，明確了不確定來源，可以通過相應的措施減少誤差，在進行結果判定時加入不確評定，是保證結果公平公正的有效方式。

[1] 國家質量監督檢驗檢疫總局.測量不確定度評定與表示：JJF1059.1-2012[S].北京：中國計量出版社，2013.

[2] 中國合格評定國家認可委員會.化學分析中不確定度的評估指南：CNAS-GL06[S].北京：中國計量出版社，2006.

[3] 栗建明，候慧嬋，顧利紅，等.HPLC法測定白靈片中芍藥苷的含量及不確定度評價[J].中國藥房.2015，26(36)：5152-5154.

[4] 王磊，姚令文，程顯隆，等.甘遂中大戟二烯醇HPLC定量方法的測量不確定度[J].中國藥事，2015，29(2)：147-152.

[5] 寇光，劉玲，陶松，等.HPLC測定桉葉止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的不確定度評價[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(17)：41-44.

[6] 趙昕，溫瑞卿，王鑫，等.不確定度評估在雙黃連口服液定量檢驗中的應用探討[J].中國藥事，2015，29(9)：951-957.

[7] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015.

UncertaintyEvaluationonPaeoniflorinContentDeterminationofBazhenYimuPillsbyHPLC

MAXiaojing*，CUIYebo，GAONannan

(SipingCityInstituteforFoodandDrugControL，JiLinSiping136000，China)

Objective：To analyze the uncertainty of determination of paeoniflorin in Bazhen Yimu Pillls by HPLC and find out the effect factors of uncertainty.MethodsThe content determination method for Bazhen Yimu Pills in Chinese Pharmacopoeia(CP)2015 was applied for the study.The determination process and procedures were analyzed，and the combined uncertainty was calculated and finally the extended uncertainty were obtained in 95% confidence intervals.ResultsThe expanded uncertainty for the HPLC determination of paeoniflorin is 0.20 mg in each pill.ConclusionThe uncertainty of the experiment is mainly caused by the weight of standard，strict control of the weighing process will help to improve reliability and accuracy of test results.

Bazhen Yimu Pills；paeoniflorin；content determination；uncertainty；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.12.020

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馬曉靜，主管藥師，研究方向：藥品檢驗；E-mail：maxiaojing1982@163.com

2017-01-25)