淺析新版《中國藥典》中無菌檢查法

黃齊惠

摘 要： 筆者對2015年版《中國藥典》無菌檢查法與2010年版《中國藥典》無菌檢查法進行了比較。從分析中可知2015年版《中國藥典》將無菌檢查法完善成為更加科學并與國際接軌的檢查方法。

關鍵詞： 中國藥典；2015版；無菌分析法

0 引言

無菌檢查法是針對無菌或滅菌藥品、敷料及器械等的無菌可靠性而建立的檢查法， 即藥品、敷料和器械等的無菌可靠性可通過無菌檢查來確認， 而無菌檢查的可信度與抽樣量、檢驗用的培養基質量、材料、操作環境和無菌技術等有關。隨著科學技術的不斷發展， 各國藥典的無菌檢查法在每一新版中都有不同程度的改進和提高。無菌檢查法自20 世紀60 年代載入《中國藥典》， 在以后的1977年版、1985年版、1990年版、1995年版、2000年版、2005年版、2010版、2015版藥典中，對培養基種類及質量要求、樣品的分類及檢驗量、檢驗方法等均進行了不斷改進。

1 之前幾版藥典改動分析

1985年版將1977年版中的好氧菌、厭氧菌培養基合二為一，有利于細菌的檢出，也減少了工作量。培養基質量檢查用菌種增加了藤黃微球菌， 其是自然環境中常見的非致病菌， 它對營養要求較嚴格，生長較慢，較金黃色葡萄球菌等代表菌株有更多優點；1985年版還刪除了1977年版中處理抗生素供試品的離子交換樹脂法，保留了青霉素酶法。1990年版將薄膜過濾法的沖洗量修訂為每次100 mL。1995年版在對制備好的培養基的要求中加入了好氧菌、厭氧菌培養基“在無菌檢查接種前，培養基指示劑氧化層的顏色不得超過培養基深度約1/5。否則，需經水浴煮沸加熱，只限加熱1次”；1995年版在對供試品進行無菌檢查時要求“取1支好氧菌、厭氧菌培養基作陰性對照”，盡管這樣的陰性對照無法考察操作過程的污染，但較前幾版藥典仍是一個可喜的突破。2000年版規定“凡無菌檢查中，均應取相應溶劑和稀釋劑同法操作，作陰性對照”，這樣的陰性對照從根本上避免了因培養基、溶劑和相關器具滅菌不徹底和操作人員操作失誤造成的誤判現象。2005年版較前幾版藥典在無菌檢查的方法上有了質的飛躍，規定了當進行藥品的無菌檢查時應進行方法驗證，通過方法驗證（即抑細菌和抑真菌試驗），確定供試品的檢驗條件和方法，保證了無菌檢查方法的科學性和檢驗結果的準確性；進一步細化了樣品的處理，增加了油膏和軟膏類供試品、氣（噴）霧劑類供試品、裝有藥物的注射器供試品、具有導管的醫療器械供試品的無菌檢查方法；對無菌檢查中使用的所有陽性對照菌的傳代次數均要求控制在5代以內。

2010年版《中國藥典》及之前版本收錄的無菌檢查法與國際通用的標準在檢查理念、培養體系、方法要求等諸多方面有顯著差異。在國家藥品安全規劃與標準提高的目標下，2015 年版《中國藥典》借鑒國外藥典先進技術經驗，以新的控制理念為指導，結合我國國情對無菌檢查法的檢測范圍及環境要求、培養體系、方法適用性、檢查方法、偏差調查與過程控制等方面都做了較大修訂，進一步完善了無菌檢查法，修訂后的無菌檢查法正逐步與國際通用標準一致。筆者對比了2010年版《中國藥典》，解讀2015年版《中國藥典》無菌檢查法增修訂概況，以推動新版藥典的貫徹實施。

2 檢測范圍和環境要求的變化

2.1 檢測范圍

2010 年版《中國藥典》無菌檢查法的相關內容統一為新的標準方法，解決了長期以來各部之間相同方法要求不一致的問題，其檢查范圍增大，要求更明確、嚴格。除了規定藥典要求無菌的藥品、原料、輔料、生物制品及其他品種外，還將無菌醫療器具明確納入檢查范圍。無菌醫療器具與無菌藥品的使用密切相關，影響著無菌藥品的安全使用。醫療器具在提高救治質量的同時，也可能成為環境病原菌的傳播工具，造成醫院感染的發生，新的要求必將嚴格無菌醫療器具的監管，降低安全風險。

2.2 環境要求

新版藥典無菌控制理念要求檢測環境應與檢測需求相適應，體現科學、合理的原則。目前，國際上對無菌檢測環境無明確要求，但原則上無菌檢查的試驗環境應不低于無菌藥品的生產關鍵區域環境。相比2010年版《中國藥典》規定的無菌檢查應在環境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100級單向流空氣區域內進行的要求，2015年版《中國藥典》中規定“無菌檢查應在無菌條件下進行，實驗環境必須達到無菌檢查的要求”。無菌檢查條件和無菌檢查具體要求應是什么呢？2015年版《中國藥典（ 四部） 》通則9203 藥品微生物實驗室質量管理指導原則中給出了具體指導意見，無菌檢查應在B級背景下的A 級單向流潔凈區域或隔離系統中進行。新版藥典這一要求比之前的環境要求更嚴格，在無菌操作、預防措施、潔凈度確認、隔離系統驗證和環境監控等方面要求一致。新版藥典在通則9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則和9205 藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則對試驗環境和環境監控有更詳細、具體的指導，增強了方法的可操作性、實用性、可靠性和規范性。

3 方法適用性試驗的變化

3.1 名稱的修訂

2015 年版《中國藥典》無菌檢查法將方法驗證試驗修訂為方法適用性試驗。驗證與適用性均是為保證方法的合理、有效而對方法進行的測評，然而其側重點不同。方法學驗證是通過實驗證明方法的運行符合分析應用要求的過程，側重于方法本身的科學性。適用性把儀器確認、電子系統、分析方法、操作、樣品等因素作為一個整體的系統來評價，控制分析條件諸因素的影響，使檢測活動能達到預期目標。方法適用性試驗包含方法驗證試驗，范圍更廣，層次更高，更為全面的質量控制策略。分析方法驗證、轉移和確認的概念不同，適用范圍不同。方法確認的目的是證明藥典分析方法或法定分析方法適用于被測樣品，被測樣品的質量可控，方法可行，同時還證明方法使用人員有能力成功地操作藥典分析方法或法定分析方法。新版藥典將原來的“驗證、證明”的表述修訂為“確認”，更準確。

3.2 菌種及菌液制備

增加了pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液作為菌液制備中的稀釋劑和洗脫劑，pH7.0無菌氯化鈉- 蛋白胨緩沖液除了能提供適宜的滲透壓、良好的細胞修復環境外，還消除了微生物培養過程中積累的代謝產物引起的酸堿度變化而帶來的不利影響。方法適用性試驗使用的菌種與培養基靈敏度使用的菌種略有不同，方法適用性試驗以大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。銅綠假單胞菌為假單胞菌屬菌種，對很多抗生素都天然耐藥，藥物敏感度不高，不適合做方法適用性。但假單胞菌屬的細菌對培養體系的營養要求高，所以適合做培養基適用性檢查。

3.3 薄膜過濾法

薄膜過濾法是歷版《中國藥典》收載的無菌檢查法的首選方法，其具有操作簡便、結果準確等優點，尤其是全封閉式薄膜過濾器具有不易污染的優勢而在薄膜過濾法中得到廣泛應用，新版藥典刪除了“取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培養基或改良馬丁培養基中”，淘汰了開放式薄膜過濾的操作方式。另外，在培養時間上要求不得超過5d，對方法適用性試驗進程提出了比較靈活的要求。

3.4 直接接種法

當樣品的性狀不允許，且經多種方法前處理后仍無法采用薄膜過濾法的供試品，可采用直接接種法，由于培養體系的不同，方法適用性試驗所使用的培養基的接種管數也與2010 年版《中國藥典》規定的接種管數有差異。2010年版規定為硫乙醇酸鹽流體培養基8管，改良馬丁培養基4 管；2015年版為硫乙醇酸鹽流體培養基與胰酪大豆胨液體培養基各6管。

參考文獻

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[2] 范一靈，馮震，鐘瑋，等.無菌藥品生產企業核心區微生物污染調查與分析[J].中國藥事，2014，28（ 6）：586-590.