高效液相色譜測定古方生脈散制劑中人參皂甙的含量

蘇麗 劉鑫

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定古方生脈散中人參皂甙Rg1的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）為流動相，檢測波長為203nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。人參皂甙Rg1在5～50μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。人參皂甙Rg1平均回收率分別為99.6%。結論：本法簡便、準確，可用于古方生脈散中人參皂甙Rg1的含量測定。

關鍵詞：古方生脈散；含量；測定

生脈散是治療氣陰兩虛證的常用方。生脈散由人參、麥門冬、五味子組成，方中人參補肺氣，生津液，為君；麥門冬養陰清肺而生津，為臣；北五味子斂肺止渴、止汗，為佐。三藥合用，共成補肺益氣，養陰生津之功。《醫方集解》記載：“人參甘溫，大補肺氣為君；麥冬止汗，潤肺滋水，清心瀉熱為臣，五味酸溫，斂肺生津，收耗散之氣為佐。蓋心主脈，肺朝百脈，補肺清心，則元氣充而脈復，故曰生脈也。夏月炎暑，火旺克金，當以保肺為主，清晨服此，能益氣而祛暑也。”人參皂甙是生脈散主要成分之一。人參皂甙Rg1有擴張腦血管、神經保護、促智、抗衰老、調節免疫、改善家兔心肌梗死后心功能、調節內皮細胞功能、改善新陳代謝等作用[1-6]。本文采用高效液相法對古方生脈散中的人參皂甙Rg1的進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：優普杜伯特UP-DBT-III實驗室洗瓶機（杜伯特（北京）科技有限公司）；VWR天平防震墊（北京慧龍環科環境儀器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃實業發展有限公司）；YLC1620A高效液相色譜儀（河南鄭州南北儀器設備有限公司）；RU超純水機（上海同田生物技術有限公司）；Milli-Q Direct水純化系統（上海力晶科學儀器有限公司）；DX-208恒溫水浴槽（北京長流科學儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：人參皂甙Rg1

1.4 試劑：三乙胺（昆山諾普森實驗室用品科技有限公司）、冰醋酸（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、甲醇（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、磷酸二氫銨（北京市津同樂泰化工產品有限公司）、乙腈（北京市津同樂泰化工產品有限公司）。

1.5 試藥：古方生脈散

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：乙腈——甲醇-水（8∶10∶82）為流動相，檢測波長：203nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按人參皂甙Rg1峰計算應不得低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4小時的人參皂甙Rg1對照品適量，精密稱定，加流動相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內容物適量，精密稱定，加15毫升甲醇回流提取1.5小時，水浴蒸干，殘渣加20毫升水溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20毫升，合并正丁醇層，水浴蒸干，殘渣加5毫升甲醇溶解，濾過，濾液置10ml量瓶中，用少量甲醇溶液分次洗滌容器和殘渣，洗液濾人同一量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗

精密稱取人參皂甙Rg1對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.59%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量人參皂甙Rg1對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，人參皂甙Rg1在5～50μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6 重現性試驗

稱取同一批的人參皂甙Rg1樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.81%，結果表明此方法的重現性良好。

2.7 準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入人參皂甙Rg1對照品，按項下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.6%，RSD為0.67%。

2.8 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定古方生脈散三批樣品。

3 討論

分別考察乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉（50∶50），乙腈-甲醇-0.1mol/L醋酸溶液（25∶15∶60），乙腈-0.1%甲酸水（20∶80），乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）不同比例的流動相，結果以乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-水（8∶10∶82）為流動相為流動相。本實驗采用高效液相法效果好、方法簡便、快捷、準確、專屬性好，可用于古方生脈散中人參皂甙Rg1的含量測定。

參考文獻

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[2]李勇.人參皂甙生物活性的研究進展[A]；第五屆食品毒理學專業委員會學術會議及國際生命科學學會中國辦事處生物活性物質學術研討會論文集[C]，2004年.

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[6]許小琴，金文杰，李金貴，秦愛建，陳鴻軍.轉化型人參皂苷抗MDV及誘導腫瘤細胞凋亡的作用初探[J].揚州大學學報（農業與生命科學版），2004年03期.