自組裝納米Venetoclax紫杉醇對乳腺癌影響的研究

何曉宣 李硯超 王磊 王思琪 張存浩 豆瑞靜 陳雨 盧夢迪 孫林林

摘 要：目的：自組裝成功納米Venetoclax紫杉醇后，可為臨床上治療乳腺癌提供依據(jù)。方法：用不同濃度Venetoclax和紫杉醇單獨處理乳腺癌細胞，選取合適的Venetoclax和紫杉醇濃度聯(lián)合作用乳腺癌細胞，觀察細胞活力的變化。結(jié)果：納米Venetoclax紫杉醇能夠顯著抑制細胞活力，對乳腺癌細胞具有更強的殺傷作用。

關(guān)鍵詞：紫杉醇；Venetoclax；乳腺癌細胞

前言

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)資料統(tǒng)計，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7-10%，在婦女僅次于子宮癌，它的發(fā)病常與遺傳有關(guān)，以及40～60歲之間，絕經(jīng)期前后的婦女發(fā)病率較高，僅約1-2%的乳腺患者是男性。紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。但是不能直接殺死癌細胞，而是促進細胞凋亡的重建。 Bcl-2以及相關(guān)促生存基因的過表達會增加細胞凋亡的閾值，因此，盡管使用抗癌藥物治療，癌細胞也依然會存活。Venetoclax一個選擇性的Bcl-2抑制劑，對多種腫瘤細胞均具有抑制作用，其中包括白血病、NHL和多發(fā)性骨髓瘤等。Souers AJ 等的研究表明，Venetoclax能通過特異性地抑制 Bcl-2蛋白， 激活內(nèi)源性線粒體凋亡通路，使腫瘤細胞快速凋亡；Venetoclax 在動物模型中并不會引起嚴重的血小板減少。臨床研究顯示 Venetoclax單用或聯(lián)用其他化療藥物均對急性髓細胞白血病（AML）具有一定療效[1-2]。但是現(xiàn)在還沒有人研究Venetoclax單獨和聯(lián)合紫杉醇對乳腺癌的影響，基于此我們用Venetoclax聯(lián)合紫杉醇研究對乳腺癌的影響。

1材料與方法

1.1試劑與儀器

MEM高糖培養(yǎng)基：美國Gibco公司；胎牛血清：南美血源；紫杉醇：Sigma；Survivin抗體：碧云天生物技術(shù)研究所；96孔板：美國Corning公司；Infinite200型酶聯(lián)免疫檢測儀：瑞士Tecan公司。

1.2實驗方法

CCK-8：觀察培養(yǎng)瓶中細胞生長密度達到達80%時，接種到96孔板。每孔加入100微升，共5000個細胞。培養(yǎng)24小時后，將入不同濃度的藥物，作用24小時后，加入CCK-8，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育2-4小時，在450nm測定吸光度。

2結(jié)果

2.1不同濃度紫杉醇對人乳腺癌MCF-7細胞增殖活性的影響

細胞活性隨紫杉醇濃度的增加逐漸降低，且紫杉醇 10、 20 、40nM組細胞活性明顯低于陰性對照組 （ P< 0.01），見表1。

2.2不同濃度Venetoclax對人乳腺癌MCF-7細胞增殖活性的影響

細胞活性隨Venetoclax濃度的增加逐漸降低，且Venetoclax 在2.5、5、 10 、20nM組細胞活性明顯低于陰性對照組 （ P< 0.01），見表2。

2.3 Venetoclax和紫杉醇聯(lián)合用藥對人乳腺癌MCF-7細胞增殖活性的影響

Venetoclax和紫杉醇聯(lián)合用藥時，細胞活力顯著下降，且細胞活性明顯低于單獨用藥組 （ P< 0.01），見表3。

3 分析與討論

紫杉醇廣泛用于治療轉(zhuǎn)移的乳腺癌、卵巢癌和不適應手術(shù)的肺癌等腫瘤患者，導致有絲分裂阻滯和誘導細胞凋亡是其抗腫瘤的主要機制。Bcl-2 是凋亡抑制蛋白家族的新成員，也是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子。化療藥物處理后，在多種腫瘤組織中表達增高。因此，我們在實驗中只選擇了Bcl-2蛋白抑制劑Venetoclax。Venetoclax是一種B細胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）抑制劑，雖然不能直接殺死乳腺癌細胞，但是它能提高乳腺癌細胞對化療藥物紫杉醇的敏感性。將Venetoclax和紫杉醇結(jié)合，能夠明顯抑制細胞活力，從而對乳腺癌細胞展現(xiàn)出很好的殺傷效果，為乳腺癌治療的臨床應用打下了堅實的基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1] High efficacy of the BCL-2 inhibitor ABT199 （venetoclax） in BCL-2 high-expressing neuroblastoma cell lines and xenografts and rational for combination with MCL-1 inhibition. Oncotarget. 2016 May 10；7（19）：27946-58.

[2] Venetoclax responses of pediatric ALL xenografts reveal MLLr ALL sensitivity， but overall requirement to target both BCL2 and BCLXL. Blood. 2016. 03-707414.