瘦素及血管內皮生長因子在復發性翼狀胬肉中的表達與意義

曹端榮，龔靜青，金 玲，王乙婷

（深圳市寶安區人民醫院，廣東 深圳 518101）

瘦素及血管內皮生長因子在復發性翼狀胬肉中的表達與意義

曹端榮，龔靜青，金 玲，王乙婷

（深圳市寶安區人民醫院，廣東 深圳 518101）

目的 研究瘦素（Lp）及血管內皮生長因子（VEGF）在復發性翼狀胬肉中的表達及意義。方法 選取2016年1月至2017年1月在深圳市寶安區人民醫院經組織病理學確診為翼狀胬肉的患者62例作為研究對象，其中原發性翼狀胬肉患者39例，復發性翼狀胬肉患者23例。收集手術切除的翼狀胬肉進行石蠟切片，行HE染色和VEGF、Lp、瘦素受體（LpR）染色，觀察原發性與復發性翼狀胬肉HE染色的不同及VEGF、Lp和LpR的表達情況。結果 與原發性翼狀胬肉相比，復發性翼狀胬肉的組織切片上皮細胞數目增多，且成熟度增加，排列更加雜亂；上皮組織出現更嚴重的成纖維細胞增殖；基底細胞邊界更加模糊，且間質中新生血管數目顯著增加。與原發性翼狀胬肉相比，復發性翼狀胬肉患者的上皮層和基質層Lp、VEGF的表達顯著增加（P＜0.05），但LpR的表達無顯著性差異（P＞0.05）。結論 復發性翼狀胬肉組織中Lp和VEGF含量顯著增加，但LpR的表達無顯著變化，表明Lp和VEGF與翼狀胬肉復發存在一定關系。

瘦素；血管內皮生長因子；翼狀胬肉

翼狀胬肉是眼科常見的眼表疾病之一，表現為局部球結膜纖維血管組織呈三角形增生，向角膜中央生長，可引起角膜散光而致視力下降，嚴重者會影響眼球運動。翼狀胬肉的治療方式以手術為主，但復發率較高，單純翼狀胬肉切除后復發率高達30%～50%[1]。目前，對于翼狀胬肉的復發機制尚無系統的理論研究，主要觀點認為由于手術創傷、術后反應等使殘留的翼狀胬肉組織中成纖維細胞和血管細胞活化，細胞外基質蛋白沉積，導致纖維血管組織形成。角膜表面及結膜下翼狀胬肉組織殘留是翼狀胬肉術后復發的基礎，而鞏膜表面的新生血管進入角膜創面是翼狀胬肉術后復發的根本原因[2]。瘦素（leptin，LP）是一種脂源性內分泌多肽類激素，有報道稱瘦素可以通過內源性血管增生刺激因子間接促進血管生成，起中間作用的內源性因子有血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）等，血管通透性增高能使血漿蛋白滲出到細胞外基質，有利于成纖維細胞和內皮細胞等在其中生長[3]。血管內皮生長因子（VEGF）具有很強的促進血管內皮細胞分裂增生的能力。兩種物質均能夠促進術后鞏膜表面血管新生，促使翼狀胬肉復發[4]。本研究旨在分析原發性翼狀胬肉和復發性翼狀胬肉組織中的VEGF和Lp及其受體（LpR）的表達情況，并探討原發性和復發性翼狀胬肉臨床病理特征的差異，從而為預防翼狀胬肉復發提供新思路，為臨床預防和治療復發性翼狀胬肉提供依據。

1 對象與方法

1.1 對象

選取2016年1月至2017年1月在深圳市寶安區人民醫院經組織病理學確診為翼狀胬肉的患者62例作為研究對象，其中原發性翼狀胬肉患者39例，男18例，女21例，年齡38～80歲，平均（63.84±7.29）歲；復發性翼狀胬肉患者23例，男10例，女13例，年齡40～79歲，平均（68.41±6.81）歲。所有患者翼狀胬肉發生部位均位于鼻側球結膜區，并入侵角膜內2 mm以上。比較兩組患者性別、年齡及翼狀胬肉發生部位，無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。本研究經我院倫理委員會同意，患者均簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

納入標準：（1）患者的翼狀胬肉均長于鼻側球結膜區，生長方向指向角膜，并入侵角膜達2 mm以上；（2）未合并其他眼科疾病，無眼部外傷；（3）未使用其他藥物治療。

排除標準：（1）長期使用滴眼液的患者；（2）進行過其他眼部手術的患者；（3）精神疾病患者。

1.3 實驗方法

所有患者行翼狀胬肉切除術，收集手術中切除的翼狀胬肉。（1）取一部分于中性福爾馬林液中固定，進行石蠟切片，制作的切片一部分用于HE染色，并在倒置熒光顯微鏡下進行組織形態的觀察。（2）一部分石蠟切片用于VEGF、Lp和LpR染色。具體步驟：進行烤片、脫蠟、水化、洗滌、封閉及抗原修復等，其中，洗滌用PBS，封閉用雙氧水，抗原修復用枸櫞酸緩沖液。完成上述步驟后用山羊血清封閉20 min，并孵育VEGF的一抗于4℃過夜，然后進行二抗孵育，三抗孵育DAB顯色，于倒置熒光顯微鏡下觀察VEGF、Lp和LpR的表達情況。

1.4 閱片方法

由同一位病理科醫生在未告知其臨床資料的前提下使用光學顯微鏡閱片。免疫組化染色后，在10×40高倍鏡視野下，Lp及其受體和VEGF表達于細胞胞漿中，呈彌漫性分布。陽性細胞染色從淺黃色至棕褐色。對組織上皮細胞和基質層的蛋白表達水平進行評估。上皮細胞的蛋白表達判定標準：（1）著色強度：0分為陰性，1分為弱陽性，2分為中等陽性，3分為強陽性；（2）陽性細胞率：0分為0%，1分為1%～25%，2分為26%～50%，3分為＞50%。以兩組數值的和評估上皮細胞Lp、LpR蛋白表達水平，而對組織基質層和內皮細胞的評估，則采用半定量的方法：0代表無表達，（+）代表局部表達，（++）代表彌散表達。

1.5 數據處理

采用SPSS 17.0統計分析軟件對本研究所有數據進行處理，計量資料采用（s）表示，運用 t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，運用卡方（χ2）檢驗，P＜0.05時，差異具有顯著性。

2 結果

2.1 復發性翼狀胬肉與原發性翼狀胬肉的病理檢查結果比較

通過觀察HE染色結果發現，與原發性翼狀胬肉相比，復發性翼狀胬肉的組織切片上皮細胞數目增多，且成熟度增加，排列更加雜亂；上皮組織出現更嚴重的成纖維細胞增殖；基底細胞邊界更加模糊，且間質中新生血管數目顯著增加。

2.2 兩組患者上皮層Lp、LpR及VEGF表達情況比較

與原發性翼狀胬肉患者相比，復發性翼狀胬肉患者的上皮層Lp和VEGF表達增加，兩組間差異存在顯著性（P＜0.05），但LpR的表達無顯著性差異（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者上皮層Lp、LpR及VEGF表達情況比較（s，分）

表1 兩組患者上皮層Lp、LpR及VEGF表達情況比較（s，分）

組別 Lp 4.09±1.08 4.67±1.13 2.008 0.049原發組（n=39）復發組（n=23）t值P值LpR 4.81±1.07 5.03±1.24 0.737 0.464 VEGF 3.98±1.03 4.52±0.97 2.037 0.046

2.3 兩組患者基質層Lp、LpR及VEGF表達情況比較

與原發性翼狀胬肉患者相比，復發性翼狀胬肉患者的基質層Lp和VEGF表達顯著增強（P＜0.05），但LpR的表達無顯著性差異（P＞0.05），見表 2。

表2 兩組患者基質層Lp、LpR及VEGF表達情況比較[n（%）]

3 討論

翼狀胬肉是眼科常見病和多發病，其發病機制還無統一定論，一般認為是由于外界刺激導致局部球結膜纖維血管組織發生炎性病變所致，呈三角形生長，翼狀胬肉組織生長加速，血管顯著擴張，侵犯角膜，嚴重影響視力。手術切除是治療翼狀胬肉的主要方法，但存在易復發的弊端，因此探究其發病機制及相關因素所起的作用至關重要[5]。本研究著重探究Lp及其受體和VEGF在翼狀胬肉復發中的作用。

瘦素是一種脂源性內分泌多肽類激素，由肥胖基因編碼，主要由白色脂肪組織分泌，也可以由骨骼肌、胃黏膜、骨和軟骨等組織分泌。Lp在血液中呈游離狀態，與瘦素結合蛋白結合后，到達中樞和外周，與特異性瘦素受體（LpR）結合而發揮生物學效應，也可在組織局部以自分泌和旁分泌的形式發揮作用。Sierra等發現Lp可誘導角膜新生血管生成，且在角膜感染模型中，呈較高的表達狀態[6]。也有報道稱瘦素受體也存在于血管內皮細胞上，瘦素可直接作用于血管內皮細胞上的瘦素受體使其磷酸化而激活信號轉錄因子STAT3，促進血管內皮細胞增殖，促使血管生成[7]。本研究結果發現，復發性翼狀胬肉的上皮層和基質層中Lp表達顯著增加，而LpR表達與原發性翼狀胬肉不存在顯著性差異，表明Lp的表達與翼狀胬肉復發存在一定聯系。

VEGF是一種具有高度生物活性功能的糖蛋白，有很強的促進血管內皮細胞分裂增生，增強毛細血管通透性的能力。有研究表明，在翼狀胬肉的上皮細胞和纖維血管組織中均檢測到VEGF免疫強熒光，而正常結膜上皮VEGF免疫熒光弱表達[8]。更重要的是，Lp可以促進VEGF表達，并與VEGF發揮協同誘導新生血管生成的作用，提示我們在翼狀胬肉的發生、發展及復發過程中，Lp和VEGF可能具有協同作用。本研究結果顯示，復發性翼狀胬肉的上皮層和基質層中VEGF表達顯著增強，但對VEGF與Lp之間的相互作用，本研究并未進行深入探討，希望在今后的研究中有新的發現。

綜上所述，復發性翼狀胬肉組織中Lp和VEGF含量顯著增加，但LpR的表達無顯著變化，表明Lp和VEGF與翼狀胬肉復發存在一定關系。

[1]彭立，謝青．翼狀胬肉發病機制的研究進展[J]．國際眼科雜志，2013，13（10）：2007-2010．

[2]陳祎祎，楊桂芳．翼狀胬肉復發與病理組織變化的關系[J]．中國醫學創新，2012，9（11）：130-131．

[3]Cao R，Brakenhielm E，Wahlestedt C，et al．Leptin induces vascular permeability and synergistically stimulates angiogenesis with FGF-2 and VEGF[J]．Proc Natl Acad Sci USA，2001，98（11）：6390-6395．

[4]王麗波，李海，巫宇舟，等．VEGF、CD34、Ki-67 和 p21 在翼狀胬肉中的表達及意義[J]．國際眼科雜志，2014，14（7）：1197-1202．

[5]曹京源，石金艷，孫艷紅，等．翼狀胬肉手術復發因素分析[J]．中國中醫眼科雜志，2016，26（5）：317-320．

[6]Sierra Honigmann M R，Nath A K，Murakami C，et al．Biological action of leptin as an angiogenic factor[J]．Science，1998，281（5383）：1683-1686．

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[8]張月，陳一兵，劉丹，等．VEGF、Ki-67在復發性翼狀胬肉中的表達及其意義[J]．中醫眼耳鼻喉雜志，2016，6（1）：18-20．

R777．33

B

1671-1246（2018）01-0151-02

深圳市寶安區科技計劃社會公益項目（醫療衛生類）“Lp及VEGF在復發性翼狀胬肉中的表達及意義”（2015005）