中藥補腎方聯合恩替卡韋對乙肝患者肝纖維化、炎癥反應及免疫功能的影響

黃宗文，袁 勇，盧 茜

（1.海南醫學院第一附屬醫院 海南 海口 570000；2.海南省干部療養院 海南 海口 571100）

中藥補腎方聯合恩替卡韋對乙肝患者肝纖維化、炎癥反應及免疫功能的影響

黃宗文1，袁 勇1，盧 茜2

（1.海南醫學院第一附屬醫院 海南 海口 570000；2.海南省干部療養院 海南 海口 571100）

目的探討中藥補腎方聯合恩替卡韋治療對乙肝患者肝纖維化、炎癥反應及免疫功能的臨床觀察。方法將60例乙肝患者隨機分為聯合組和單藥組，每組各30例，單藥組給予恩替卡韋片口服治療（0.5 mg/次，1次/日，連續治療6個月），聯合組在此基礎上給予中藥補腎方口服治療（1劑/日，早晚各服1次，連續治療6個月）。對比兩組患者治療3、6個月時的中醫臨床證候積分、血清中肝纖維化指標、外周血中免疫細胞含量及血清中細胞因子含量情況。結果治療3、6個月后，兩組患者中醫臨床證候積分均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組患者HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組患者外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均升高，聯合組升高程度高于單藥組，CD8+均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組患者血清IL-15、IL-16、TGF-β均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論中藥補腎方聯合恩替卡韋治療能有效改善乙肝患者的臨床證候，能夠調節免疫應答、炎癥反應，以及能延緩肝纖維化，值得臨床作進一步推廣。

中藥補腎方；恩替卡韋；乙肝；肝纖維化；炎癥反應；免疫功能

乙肝的發病率逐年增加，乙肝病毒感染會引起機體免疫應答和炎癥反應紊亂、細胞因子分泌異常，逐漸導致肝纖維化[1-2]。肝纖維化是肝硬化病理發展過程中的必經階段，國內外研究認為肝纖維化是可逆的，但逐漸形成肝硬化結節后便很難再逆轉[3]。因此，如何在早期乙肝患者進行調節免疫應答、炎癥反應，逆轉肝纖維化，延緩肝硬化病理進程顯得尤為重要。臨床上主要采用抗病毒藥物治療乙肝，能夠抑制病毒復制及延緩肝纖維化進一步發展，但無法完全阻斷肝纖維化的發生和發展，因此，需要使用抗纖維化藥物來逆轉肝纖維化進程，延緩肝硬化的發展。近年來，中醫藥在臨床乙肝治療的優勢逐步得到廣泛的認可。中藥補腎方是近年來被用于病毒性肝炎治療的方法，根據中醫辨證施治的原則擬定了補腎陰為主的補腎方，能起到改善肝組織損傷、抗肝纖維化的作用[4]。本研究分析了中藥補腎方聯合恩替卡韋對乙肝患者血清免疫、炎癥指標、肝纖維化指標的影響，旨在評價該治療方式的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月-2016年12月于筆者醫院就診乙肝患者60例設為研究對象，按照隨機數字表法分為聯合組和單藥組，各30例。聯合組：男19例，女性 11 例，年齡 23～61 歲，平均（41.52±10.52）歲，慢性乙肝病程 3～12 年，平均病程（8.96±6.77）年；單藥組：男21例，女性9例，年齡20～59歲，平均（40.84±9.86）歲，慢性乙肝病程 4～14 年，平均病程（8.02±7.41）年。兩組患者年齡、病程、性別等一般資料比較，均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 診斷標準

中醫診斷標準[5]：癥狀為乏力、面色灰暗、舌質暗紅或有瘀斑、脅肋疼痛、肝區不適、脈細數。

西醫診斷標準[6]：有乙型肝炎或HbsAg陽性史6個月以上者，臨床表現無特異性，HBV DNA陽性。

1.3 納入及排除標準

納入標準：（1）治療前尿常規、腎功能、心電圖均正常，白細胞＞4×109/L，血紅蛋白＞100 g/L，血小板＞80×109/L， 年齡均＞18 歲；（2）60 U/L＜谷丙轉氨酶＜400 U/L，血清總膽紅素正常或偏高，但低于50 μmol/L；（3）均在知情下簽署同意書，并經醫院倫理委員會批準者；

排除標準：（1）血清 HAV、HCV、HDV、HEV、HIV陽性者，或接受免疫抑制劑治療者；（2）失代償肝病、骨髓抑制、重要器官嚴重功能障礙者；（3）合并肺、腎、肝、等功能嚴重異常者，哺乳期或妊娠期婦女，或過敏體質者。

1.4 治療方法

單藥組：給予異甘草酸鎂、門冬氨酸鳥氨酸等藥物進行常規護肝治療，同時進行對癥治療，在此基礎上，加用恩替卡韋（中美上海施貴寶制藥有限公司，國藥準字H20052237）0.5 mg口服治療，每天1次，空腹口服，連續治療6個月。

聯合組：在單藥組基礎上加服用中藥補腎方（鱉甲 30 g，黃芪 15 g，淫羊藿 15 g，菟絲子 12 g，丹參 15 g，白芍 15 g，甜蓯蓉 12 g，青皮 6 g）[7]，每天1劑，水煎2次，混勻，分早晚各服1次，每周連續5 d，暫停2 d，繼續下一周，持續治療6個月。

1.5 指標觀察

（1）中醫臨床癥狀積分：采用積分法觀察記錄患者肋痛、納差、腹脹、倦怠少氣、口淡乏味、舌苔、脈象、便溏等癥狀，治療前、治療3、6個月各觀察記錄1 次，按無、輕、中、重分別記錄為 0、1、2、3 分，分項記錄。（2）外周血指標及血清指標檢測方法：治療前、治療3、6個月時，分別采集兩組患者空腹靜脈外周血標本5 mL于兩支無菌試管內，一支以3 000 r/min速度離心10 min后取血清，采用酶聯免疫吸附法測定透明質酸（HA）、層黏連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）、白細胞介素-15（IL-15）、白細胞介素-16（IL-16）、轉化生長因子-β1（TGF-β1）的水平，試劑盒購自 Santa Cruz公司；另一支采用流式細胞儀免疫熒光法檢測CD3+、CD4+、CD8+淋巴細胞亞群水平（T淋巴細胞亞群檢測盒及相關標記抗體購自研域（上海）化學試劑有限公司）。

1.6 統計學分析

采用SPSS 20.0統計軟件處理數據，對計數資料比較采用χ2檢驗，對計量資料采用t檢驗，在P＜0.05時，差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后中醫臨床證候積分比較

治療前兩組患者的中醫臨床證候積分無統計學差異(P＞0.05)。治療3、6個月后，兩組患者中醫臨床證候積分均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 兩組患者治療前后中醫臨床證候積分比較 (±s，分)

表1 兩組患者治療前后中醫臨床證候積分比較 (±s，分)

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與同期單藥組比較，#P＜0.05。

組別聯合組單藥組治療6個月6.52±2.34*#8.67±2.65*例數30 30治療前12.58±3.47 13.16±3.69治療3個月8.40±3.26*#10.98±2.90*

2.2 兩組患者治療前后血清中肝纖維化指標比較

治療前兩組患者的HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C無統計學差異（P＞0.05）。 治療3、6個月后，兩組患者HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者治療前后血清中肝纖維化指標比較 (±s)

表2 兩組患者治療前后血清中肝纖維化指標比較 (±s)

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與單藥組比較，#P＜0.05。

組別聯合組單藥組例數30 30時間治療前治療3個月治療6個月治療前治療3個月治療6個月HA/ng·mL-1 150.22±20.14 80.95±7.58*#56.47±6.75*#154.85±19.74 98.65±11.59*79.88±8.96*LN/ng·mL-1 50.14±6.54 26.85±3.74*#19.75±3.02*#48.96±8.02 34.26±4.86*25.69±4.03*PC-Ⅲ/μg·mL-1 48.96±8.03 27.55±3.85*#18.75±3.12*#49.85±7.54 33.46±6.14*26.75±4.21*Ⅳ-C/μg·mL-1 52.42±7.95 30.15±4.86*#19.44±2.78*#54.96±7.95 35.85±5.65*26.95±4.25*

2.3 兩組治療前后外周血中免疫細胞含量比較

治療前兩組患者的外周血中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+無統計學差異(P＞0.05)。治療 3、6 個月后，兩組患者外周血中 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均升高，聯合組升高程度高于單藥組，CD8+均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 兩組治療前后血清中細胞因子含量比較

治療前兩組患者血清IL-15、IL-16、TGF-β無統計學意義(P＞0.05)。治療3、6個月后，兩組患者血清IL-15、IL-16、TGF-β均降低，聯合組降低程度高于單藥組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

3 討論

慢性乙型肝炎是造成肝硬化的重要病因，乙型肝炎病毒復制所引起的免疫應答和炎癥反應紊亂、細胞因子分泌異常是造成肝纖維化的重要病理環節[7-8]。臨床多采取抗病毒聯合抗纖維化的治療方案治療慢性乙型肝炎患者，核苷類藥物是抗病毒治療的首選，其中恩替卡韋的效果明顯、耐藥及毒副反應發生率低，適合長期服藥抗乙肝病毒治療。在抗纖維化治療方面有延緩病理進程，但無法徹底逆轉肝纖維化的進程，并增加肝硬化后肝癌的發生風險[9-10]。與之相反，中藥在治療患者的肝纖維化方面有較好效果[11-12]。

表3 兩組治療前后外周血中免疫細胞含量比較 (±s)

表3 兩組治療前后外周血中免疫細胞含量比較 (±s)

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與單藥組比較，#P＜0.05。

組別聯合組單藥組例數30 30時間治療前治療3個月治療6個月治療前治療3個月治療6個月CD3+/%55.86±6.75 60.85±4.69*#66.68±7.40*#56.22±6.84 58.65±3.48*61.41±6.28*CD4+/%32.15±3.10 38.59±3.26*#43.59±4.15*#31.85±3.45 33.42±3.30*37.45±3.80*CD8+/%34.56±3.40 31.69±3.24*#26.85±2.60*#35.75±3.30 34.26±3.26*31.62±2.90*CD4+/CD8+1.02±0.12 1.26±0.17*#1.46±0.19*#1.06±0.15 1.15±0.16*1.20±0.19*

表4 兩組治療前后血清中細胞因子含量比較(±s，ng/mL)

表4 兩組治療前后血清中細胞因子含量比較(±s，ng/mL)

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與單藥組比較，#P＜0.05。

組別聯合組單藥組時間治療前治療3個月治療6個月治療前治療3個月治療6個月IL-15 226.35±32.56 140.63±16.58*#112.74±12.62*#231.58±35.69 190.33±24.12*169.47±16.44*IL-16 103.22±15.41 65.85±8.14*#36.58±4.68*#106.74±16.98 86.45±9.20*62.45±7.68*TGF-β 486.33±60.25 268.59±32.65*#210.25±26.54*#491.26±63.54 385.69±43.75*296.86±38.59*

腎主骨生髓，藏精，其“先天之精”為臟腑陰陽之本，腎中氣充盈，臟腑功能生化不息，氣血旺盛，才能補骨養髓，因此慢性乙肝患者當從補腎填精著手。本研究擬定了補腎陰為主的補腎方，主要由鱉甲、淫羊藿、黃芪等組成，能填補腎精，陰陽并用。其中鱉甲、丹參能使陰得陽之氣而化生不絕，淫羊藿為溫補腎陽之良藥，黃芪補氣健脾而補后天生化之源，均為滋補之品有滋膩礙胃之嫌。研究顯示，補腎方中鱉甲、淫羊藿、黃芪、丹參能提高小鼠的淋巴細胞轉化增殖，提高機體免疫功能[13-14]。為明確中藥補腎方用于慢性乙型肝炎治療效果，本文根據慢性乙型肝炎證候分級量化評分標準，分別根據患者肋痛、倦怠乏力、腹脹納差等臨床不適癥狀進行評分，經治后聯合組比單藥組臨床不適癥狀明顯改善，提示中藥補腎方聯合恩替卡韋在改善臨床證候優于單用恩替卡韋。對兩組治療前后肝纖維化情況進行分析，結果顯示：兩組患者治療后血清肝纖維化指標均低于治療前，而聯合組降低的程度高于單藥組，這結果與相關研究一致，能夠說明中藥補腎方用于慢性乙型肝炎的治療對肝纖維化的進程具有延緩作用。筆者推測中藥補腎方可能通過調節免疫應答及炎癥反應來影響肝纖維化的進程。

大量文獻報道在慢性乙肝患者中發現有CD3+、CD4+減少和CD4+/CD8+比值下降，當肝炎恢復時或HbsAg轉陰時，CD4+/CD8+比值增加，并逐漸恢復正常[15-16]。本研究結果顯示，聯合組外周血中免疫細胞含量改善程度優于單藥組，提示中藥補腎方促進慢性乙肝患者外周血淋巴細胞亞群增殖。中藥補腎方能上調CD4+水平，增強細胞免疫的作用，利于體內CD4+/CD8+相對平衡，使體內的病毒得到清除或抑制，使異常的細胞免疫功能得到調整，起到改善肝組織損傷、抗纖維化的作用。宿主抗病毒免疫應答異常不僅會影響病毒的清除，還會造成非特異性免疫細胞異常分泌多種細胞因子，導致肝細胞外基質合成和降解紊亂，使肝纖維化進一步惡化。肝臟局部IL-15、IL-16、TGF-β均來自非特異性免疫細胞，能夠激活局部組織中炎癥反應的級聯激活，導致多種蛋白質合成和降解紊亂，促進肝纖維化的發展。有研究證實，乙肝病情的發展及肝纖維化的進程與IL-15、IL-16、TGF-β異常分泌密切相關[17-18]。本研究中發現兩組治療后血清中IL-15、IL-16、TGF-β含量均低于治療前，聯合組降低程度高于單藥組，這說明中藥補腎方用于慢性乙肝治療，能調節炎癥相關細胞因子分泌，延緩肝纖維化的進程。

綜上所述，中藥補腎方聯合恩替卡韋治療能有效改善乙肝患者的臨床證候，能夠調節免疫應答、炎癥反應，以及能延緩肝纖維化，值得臨床作進一步推廣。

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Effect of Zhongyao Bushen Decoction Combined with Entecavir on Liver Fibrosis,Inflammation and Immune Function in Hepatitis B Patients

HUANG Zongwen1， YUAN Yong1， LU Qian2
(1.The First Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou,Hainan 570000,China；2.Hainan Cadre Sanatorium,Haihou,Hainan 571100,China)

ObjectiveTo investigate Bushen Huoxue decoction combined with entecavir in treatment of liver fibrosis,inflammation and immune function of patients with hepatitis B.Methods60 hepatitis B patients were randomly divided into the combined group and the single group,30 cases in each group.The single group was given entecavir tablets (0.5 mg/time,1 times/day,treatment for 6 months),the combined group was given Bushen Huoxue decoction (1 dose/day,once in the morning and in the evening,treatment for 6 months).on the basis of the single group.The clinical syndromes of TCM,the serum liver fibrosis index,the contents of immune cells in peripheral blood,and the content of cytokine in serum in the three or six months after treatment.ResultsAfter treatment for 3 and 6 months,the clinical symptoms of TCM decreased in both groups,and the reduction degree of the combined group was higher than the control group,the difference was statistically significant (P＜0.05).HA,LN,PC-Ⅲ,Ⅳ-C decreased in both groups,and the reduction degree of the combined group was higher than the single group,the difference was statistically significant (P＜0.05).The CD3+,CD4+,CD4+/CD8+increased in both groups,the increaseing degree ofthe combined group washigherthan the single group,CD8+decreased in both groups,and the reduction degree of the combined group was higher than the single group,the difference was statistically significant(P＜0.05).IL-15,IL-16,TGF-β decreased in both groups,and the reduction degree of the combined group was higher than the single group,the difference was statistically significant (P＜0.05).ConclusionZhongyao Bushen decoction combined with entecavir could effectively improve the clinical symptoms of hepatitis B patients,could regulate immune response,inflammatory response,and delay liver fibrosis.It is worthy of further clinical promotion.

Zhongyao Bushen decoction;entecavir;hepatitis B;liver fibrosis;inflammation;immune function

R256.4

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.12.022

本文引用：黃宗文，袁 勇，盧 茜.中藥補腎方聯合恩替卡韋治療對乙肝患者肝纖維化、炎癥反應及免疫功能的影響[J].湖南中醫藥大學學報，2017，37（12）：1391-1395.

2017-09-05

2014年海南省自然科學基金(0104777039)。

黃宗文，男，碩士，主治醫師，研究方向：中醫消化，E-mail：qingdao4431@sohu.com。

（本文編輯 蘇 維）