淺談沙門(mén)氏菌盲樣考核的方法與步驟

【摘 要】 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局為考核檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的檢驗(yàn)?zāi)芰ΓM織了沙門(mén)氏菌的盲樣考核。本文記錄并分析了檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌的方法與步驟。

【關(guān)鍵詞】 沙門(mén)氏菌 盲樣考核 方法

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2017.08.003

1 沙門(mén)氏菌簡(jiǎn)介

沙門(mén)氏菌，腸桿菌科腸道桿菌，革蘭氏陰性，種類(lèi)近千種，按其抗原特異性分為甲、乙、丙、丁、戊等。可導(dǎo)致人體患病的沙門(mén)氏菌主要有甲組、乙組的副傷寒菌，丙組的副傷寒豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌及腸炎桿菌等。傷寒桿菌、副傷寒甲、乙桿菌主要引起人類(lèi)患病，而副傷寒豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等屬于人獸共患病原菌，對(duì)人類(lèi)主要引起急性胃腸炎，出現(xiàn)食物中毒癥狀。

沙門(mén)氏菌在水中可生存2-3周，糞便中可存活1-2個(gè)月，冰箱4℃放置3-4個(gè)月仍有活力，在自然界可在冰凍土壤中過(guò)冬。沙門(mén)氏菌在20℃以上即可繁殖，37℃繁殖旺盛。

1.1 生物學(xué)性狀 （形態(tài)、染色及生化反應(yīng)）

革蘭氏陰性菌，大小（0.6～1.0）×（2～4）微米，有菌毛，除雞沙門(mén)氏菌和雛沙門(mén)菌外均有鞭毛，無(wú)芽胞，一般無(wú)莢膜。營(yíng)養(yǎng)要求低，分離培養(yǎng)常用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基，形成無(wú)色菌落。生化反應(yīng)結(jié)果有重要鑒別意義，如能發(fā)酵葡萄糖、甘露糖、麥芽糖，不發(fā)酵乳糖和蔗糖，不能分解尿素，不能液化明膠，不產(chǎn)生吲哚，可產(chǎn)酸產(chǎn)氣，也有少數(shù)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；硫化氫陽(yáng)性或陰性，有賴(lài)氨酸脫羧酶；動(dòng)力陽(yáng)性；對(duì)熱敏感，60℃保持20分鐘可殺死該菌；在5%的石炭酸中5分鐘即失去活力。

1.2 抗原構(gòu)造及分類(lèi)

沙門(mén)氏菌抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，一般含有菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）三種抗原。

1.3 致病因子及所致疾病

沙門(mén)氏菌經(jīng)口進(jìn)入人體，當(dāng)具有一定數(shù)量，經(jīng)胃酸、正常菌群及腸道免疫作用后仍有存留，定位于小腸便可引起疾病。沙門(mén)氏菌致病因子主要包括直接侵襲、內(nèi)毒素和腸毒素。沙門(mén)氏菌可以直接入侵小腸壁上皮細(xì)胞，也可穿過(guò)上皮細(xì)胞進(jìn)一步入侵固有層。小腸派氏淋巴結(jié)M細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)沙門(mén)氏菌后，可導(dǎo)致巨噬細(xì)胞吞噬，但巨噬細(xì)胞殺傷系統(tǒng)對(duì)沙門(mén)氏菌無(wú)效，相反導(dǎo)致進(jìn)一步增殖。沙門(mén)菌屬的內(nèi)毒素導(dǎo)致人體體溫升高、白細(xì)胞數(shù)值下降，也可激活補(bǔ)提，大量?jī)?nèi)毒素甚至可以導(dǎo)致中毒癥狀和休克。有些沙門(mén)氏菌可產(chǎn)生腸毒素，如鼠傷寒沙門(mén)菌。

人類(lèi)沙門(mén)氏菌導(dǎo)致疾病主要包括腸傷寒、急性胃腸炎及沙門(mén)氏菌菌血癥。

2 沙門(mén)氏菌盲樣考核的步驟

2016年7月初接到國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局組織的沙門(mén)氏菌盲樣考核樣品。

2.1 樣品接收

樣品正常：10個(gè)西林瓶和10個(gè)奶粉樣品保存完整，編號(hào)清晰。編號(hào)分別為CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10。確認(rèn)簽收后按照GB 4789.4-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》開(kāi)始樣品的檢測(cè)。

2.2 檢驗(yàn)過(guò)程

2.2.1 第一天：前增菌

在生物安全柜內(nèi)將沙門(mén)氏菌樣品的西林瓶打開(kāi)，取225mL滅菌BPW增菌液加入到無(wú)菌均質(zhì)袋中，并加入西林瓶?jī)?nèi)白色小球，混勻溶解。再將與西林瓶編碼相同的奶粉樣品分別加入到上述BPW增菌液中，充分混勻。將沙門(mén)氏菌樣品與相同編號(hào)的奶粉樣品混合，分別編號(hào)CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10。編號(hào)后置于36℃培養(yǎng)18h。

2.2.2 第二天：增菌

按照標(biāo)準(zhǔn)每個(gè)樣品移取1mL接種于10mLTTB內(nèi)，于42℃培養(yǎng)24h。同時(shí)，每個(gè)樣品另取1mL接種于10mLSC內(nèi)，36℃培養(yǎng)24h。

2.2.3 第三、四天：分離

各取增菌培養(yǎng)物1環(huán)，分別劃線(xiàn)接種于一個(gè)BS瓊脂平板（36℃培養(yǎng)48h）和一個(gè)沙門(mén)氏菌顯示培養(yǎng)基平板（36℃培養(yǎng)24h），同時(shí)將沙門(mén)氏菌陽(yáng)性菌株和陰性對(duì)照菌株大腸埃希氏菌接種顯色培養(yǎng)基；36℃培養(yǎng)24h。見(jiàn)第91頁(yè)表3。

根據(jù)沙門(mén)氏菌在選擇性培養(yǎng)基上的菌落特征，初步判定CODE3、CODE5、CODE6、CODE9中存在沙門(mén)氏菌。

2.2.4 第五天：純化

挑取CODE3、CODE5、CODE6、CODE9在顯色培養(yǎng)基的淡紫色菌落在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行純化培養(yǎng)。36℃培養(yǎng)24h。

2.2.5 第六天：生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定

（1）從CODE3、CODE5、CODE6、CODE9純化板上挑取2個(gè)以上可疑菌落，進(jìn)行生化試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)室使用的是北京陸橋生產(chǎn)的沙門(mén)氏菌干制生化鑒定試劑盒。

（2）血清學(xué)鑒定

CODE3、CODE5、CODE6、CODE9均判定為沙門(mén)氏菌。

2.2.6 檢測(cè)結(jié)果

綜合形態(tài)學(xué)鑒定和生化鑒定，得出本次樣品檢測(cè)結(jié)果：

CODE3、CODE5、CODE6、CODE9檢出沙門(mén)氏菌；

CODE1、CODE2、CODE4、CODE7、CODE8、CODE10未檢出沙門(mén)氏菌。

作者簡(jiǎn)介

高元，研究生，中級(jí)職稱(chēng)，現(xiàn)任錦州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所微生物室主任。

劉暢，本科，中級(jí)職稱(chēng)，現(xiàn)任錦州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所中心檢驗(yàn)部副部長(zhǎng)。

馮琳琳，研究生在讀，助理工程師，現(xiàn)任錦州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所微生物室檢驗(yàn)員。