淺談阪崎腸桿菌盲樣考核的方法與步驟

【摘 要】 國家食品藥品監督管理局為了考核檢驗機構的檢驗能力，組織了阪崎腸桿菌的盲樣考核。本文記錄了檢驗阪崎腸桿菌的方法與步驟。

【關鍵詞】 阪崎腸桿菌 盲樣考核 方法

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2017.09.007

1 阪崎腸桿菌的生物學性狀

1.1 培養特征

阪崎腸桿菌為兼性厭氧菌，能在血平板培養基、瓊脂培養基、脫氧膽酸瓊脂、麥康凱瓊脂培養基等多種培養基上生長繁殖，所需營養條件較低。

1.2 生化反應

阪崎腸桿菌和其它試驗腸桿菌差異：阪崎腸桿菌缺少磷酰胺酶，-葡萄糖苷酶活性為陽性，其它試驗菌如產氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、成團腸桿菌為陰性。

鑒定阪崎腸桿菌指標：氧化酶陰性、吐溫80脂酶陽性、D-山梨醇陰性、細胞外DNase陽性的黃色菌落。

1.3 抵抗力

阪崎腸桿菌不耐熱，標準巴斯德消毒法即可殺死該菌，但其胞內含海藻糖酶較高，因此對滲透壓和干燥的耐受力強于大腸埃希菌、沙門菌等其他腸道菌。

1.4 增殖能力

阪崎腸桿菌在6℃，21℃，37℃倍增時間分別是13.7h，1.7h，19min～21min。危險性評估：25℃培養6h比對照（本底樣品）危險性增加30倍；10h增加30000倍。嬰兒配方奶粉中即使極微量的阪崎腸桿菌污染也有可能在食用前儲藏期、甚至沖調期大量繁殖。因此嚴格管理嬰兒配方奶粉的加工制作及儲存過程是杜絕其危害的重要環節。

1.5 毒力

阪崎腸桿菌不同菌株的毒力不同，分為致病菌及非致病菌。某些菌株不能在胃酸環境中存活。現階段，針對阪崎腸桿菌的毒力因子及致病性的相關研究并不透徹，還需廣泛大量研究。

2 阪崎腸桿菌的生態分布

2.1 嬰兒配方奶粉的污染

阪崎腸桿菌的來源現不十分明確，多數科學家認為嬰兒配方奶粉的污染是其主要來源。

2.2 污染環節

嬰兒配方奶粉經標準巴斯德消毒可有效殺死阪崎腸桿菌。因此，嬰兒配方奶粉中的阪崎腸桿菌的污染應該是來自配方粉巴斯德消毒后存放、后期添加熱敏感微量元素的過程中。

有報道，在奶粉、巧克力、谷類、馬鈴薯粉、面食加工廠都曾經檢測出阪崎腸桿菌，說明該菌分布較為廣泛，因此，如何加強對以上食品制作、加工及存儲環境的監管還需要相關律法的支持及監管部門的有效執行。

3 阪崎腸桿菌盲樣考核的方法與步驟

2016年7月初接到國家食品藥品監督管理局組織的阪崎腸桿菌盲樣考核樣品。包括10個西林瓶和10個奶粉樣品。

3.1 樣品接收

樣品正常：10個西林瓶和10個奶粉樣品保存完整，編號清晰。編號分別為CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10。確認簽收后按照GB 4789.40-2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗》開始樣品的檢驗。

3.2 檢驗步驟

3.2.1 第一天：前增菌

在生物安全柜內將阪崎腸桿菌樣品的西林瓶打開，取44℃的900mL滅菌BPW增菌液到無菌均質袋中，并加入西林瓶內白色小球，溶解充分。然后在上述BPW增菌液中加入與西林瓶編碼相同的奶粉樣品，充分混勻。將阪崎腸桿菌樣品與相同編號的奶粉樣品混合，分別編號CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、 CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10。編號后置于36℃的電熱恒溫培養箱內培養18h。

3.3.2 第二天：增菌

按照標準每個樣品移取1mL接種于10mL（mLST-Vm）肉湯，44℃培養24h。

3.3.3 第三天：分離

取混勻增菌培養物1環，分別劃線接種于兩個培養基平板，同時將阪崎腸桿菌陽性菌株和陰性對照菌株大腸埃希菌接種顯色培養基。放入36℃的電熱恒溫培養箱內培養24h。

阪崎腸桿菌顯色培養基上可疑樣品菌落特征：CODE2、CODE6、CODE8：菌落呈藍綠色和無色兩種。陽性對照中菌落狀態：菌落呈藍綠色。根據阪崎腸桿菌在阪崎腸桿菌顯色培養基上的菌落特征，初步判定CODE2、CODE6、CODE8中存在阪崎腸桿菌。

3.3.4 第四、五天：繼續分離

從CODE2、CODE6、CODE8板上挑取5個可疑菌落，劃線接種于TSA平板。放入25℃的電熱恒溫培養箱內培養48h。

3.3.5 第六天：鑒定

自TSA平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。本實驗室選用的是北京陸橋的阪崎腸桿菌干制生化鑒定試劑盒。批號：150113，貨號：DBI-02。放入36℃的電熱恒溫培養箱內培養24h。CODE2、CODE6、CODE8生化鑒定結果與陽性對照一致。

3.3.6 檢測結果

綜合形態學鑒定和生化鑒定，得出本次樣品檢測結果：CODE2、CODE6、CODE8檢出阪崎腸桿菌，CODE1、CODE3、CODE4、CODE5、CODE7、CODE9、CODE10未檢出阪崎腸桿菌。

作者簡介

高元，研究生，中級職稱，現任錦州市產品質量監督檢驗所微生物室主任。

劉暢，本科，中級職稱，現任錦州市產品質量監督檢驗所中心檢驗部副部長。

柏楊楊，本科，現任錦州市產品質量監督檢驗所微生物室檢驗員。