多肉植物玉露的組培快繁技術(shù)研究

[摘 要] 為了提高多肉植物玉露的繁殖效率，滿足多肉植物玉露產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的需求，以多肉植物草玉露葉片為試驗(yàn)材料進(jìn)行組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究。結(jié)果表明：玉露不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽分化率最高（達(dá)到95%）；不定芽增殖培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽增殖分化率最高（達(dá)到380%）；生根誘導(dǎo)效果最佳的培養(yǎng)基是1/2MS+IBA 2 mg/L，生根率最高，達(dá)到95%以上。

[關(guān)鍵詞] 玉露；組織培養(yǎng)；快速繁殖

[中圖分類(lèi)號(hào)] S682.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-7909（2017）24-56-2

植物組織培養(yǎng)也稱離體培養(yǎng)，是指將植物體各部分組織，如葉肉組織、胚乳、薄壁組織等進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得再生植株；也指在培養(yǎng)過(guò)程中從各組織上得到愈傷組織，愈傷組織經(jīng)過(guò)再分化形成再生的完整植株。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

草玉露作為原材料，以草玉露幼嫩的葉片為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)分化不定芽試驗(yàn)，以2 cm左右的組培苗進(jìn)行生根試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的取得和滅菌處理。用剪刀剪取草玉露幼嫩的葉片作為外植體，放入燒杯中，再將其放在水龍頭下流水沖洗30 min，然后在洗衣粉水中浸泡7～10 min，最后用自來(lái)水沖洗干凈。在無(wú)菌室內(nèi)的超凈工作臺(tái)上，外植體先用75%酒精進(jìn)行表面消毒2～5 s，再用無(wú)菌水沖洗一兩次，然后放入2%次氯酸鈉溶液中消毒5～10 min，再用無(wú)菌水漂洗兩三次，用無(wú)菌濾紙吸干表面水分。將滅菌后的葉片切成0.5 cm切段，分別接種于預(yù)先滅菌的培養(yǎng)基上。為了減少出現(xiàn)雜菌，要在火焰旁進(jìn)行接種。

1.2.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。以MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，外加蔗糖30 g/L、瓊脂6 g/L，再根據(jù)試驗(yàn)要求加入不同量的植物激素制成試驗(yàn)所需的培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值到5.8。

培養(yǎng)溫度為（25±2） ℃，恒溫，培養(yǎng)光照為2 000 Lx，每天光照時(shí)間不少于10 h。叢生芽的快速增殖和生根培養(yǎng)條件與此相同。

1.2.3 誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的篩選。本試驗(yàn)以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方根據(jù)兩個(gè)因素兩個(gè)水平正交試驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)：其中，A因子為6-BA，設(shè)1.5、3.0、4.5 mg/L 3個(gè)水平，B因子為NAA，設(shè)0.0、0.1、0.2 mg/L 3個(gè)水平。將切好的玉露外植體接種到培養(yǎng)基中，每瓶接種4個(gè)外植體，每個(gè)處理接種10瓶。接種后按照上述培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，30 d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。根據(jù)葉片外植體上再生出的不定芽數(shù)量及生長(zhǎng)狀況，經(jīng)過(guò)比對(duì)，得出最適分化培養(yǎng)基配方。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素濃度配比對(duì)芽誘導(dǎo)分化的影響

本試驗(yàn)探討了6-BA與NAA的不同濃度配比對(duì)玉露不定芽分化的影響。結(jié)果表明（見(jiàn)表1）：當(dāng)6-BA的濃度不變時(shí)，隨著NAA濃度的增加，不定芽增殖率大體趨勢(shì)是增加的；當(dāng)NAA的濃度不變時(shí)，隨著6-BA濃度的增加，不定芽增殖率大體趨勢(shì)是增加的，但也有一定的濃度范圍。部分培養(yǎng)基出現(xiàn)了污染的情況，外植體在該培養(yǎng)基上萌芽較快，不定芽分化率最高（達(dá)到95%），每個(gè)外植體誘導(dǎo)出的單芽數(shù)最多為12.2，單芽形態(tài)粗壯且正常。經(jīng)過(guò)10 d左右的培養(yǎng)，玉露葉片外植體明顯增厚變大，部分切口還出現(xiàn)了綠色的愈傷組織，但也有部分外植體愈傷組織不明顯，30 d左右會(huì)從外植體邊緣分化，形成不定芽。不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L，pH=5.8。

2.2 不同激素濃度配比對(duì)芽增殖的影響

不定芽增殖不同處理的培養(yǎng)結(jié)果如表2所示。結(jié)果表明：當(dāng)6-BA的濃度不變時(shí)，隨著NAA濃度的增加，不定芽增殖率大體趨勢(shì)是增加的；當(dāng)NAA的濃度不變時(shí)，隨著6-BA濃度的增加，不定芽增殖率大體趨勢(shì)是增加的，但也有一定的濃度范圍。培養(yǎng)30 d后，在不定芽的基部可繼續(xù)分化并形成8～10個(gè)單芽，這樣每個(gè)外植體的不定芽都得到了大量增殖，不定芽增殖培養(yǎng)的最優(yōu)培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L，pH=5.8，不定芽在該培養(yǎng)基上增殖分化率最高（達(dá)到380%），每個(gè)外植體誘導(dǎo)增殖出的不定芽平均數(shù)達(dá)到11.5個(gè)，不定芽的平均長(zhǎng)度達(dá)到1.1 cm，單芽生長(zhǎng)狀況最好，不定芽粗壯，部分芽也可長(zhǎng)成小苗。

2.3 不同IBA濃度對(duì)芽生根的影響

本試驗(yàn)將長(zhǎng)至2 cm以上的無(wú)根試管苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中。以不加激素的1/2MS培養(yǎng)基為參照，對(duì)比添加不同濃度的IBA后，統(tǒng)計(jì)不定芽的生根率，得出最優(yōu)配比。由表3可以得出，在未加激素的1/2MS培養(yǎng)基中，不定芽也會(huì)分化出根，但生根率較低，僅為23.3%，每個(gè)芽上誘導(dǎo)出的根數(shù)很少，平均只有1條，根長(zhǎng)平均1.81 cm。加入一定濃度的IBA可以促進(jìn)于玉露不定芽分化形成根，以1/2MS+IBA 2 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L（pH=5.8）的生根培養(yǎng)基效果最佳，此條件下玉露每個(gè)芽上誘導(dǎo)出的平均根數(shù)為4條，根長(zhǎng)平均3.64 cm，試管苗的生根率高，達(dá)到95%以上。

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明：草玉露不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽分化率最高，達(dá)到95%；不定芽增殖培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L，不定芽增殖分化率最高，達(dá)到380%；試管苗的生根培養(yǎng)試驗(yàn)，生根效果最佳的培養(yǎng)基是1/2MS+2 mg/L IBA，生根率最高，達(dá)到95%以上。