中藥成分分析的重要需求

李歐

【摘要】中藥化學成分組成復雜，分析中存在諸多問題，超高效液相色譜、質譜技術在中藥化學成分分析中的大量應用，使在分析速度、分離度及靈敏度方面有了顯著的提高。

【關鍵詞】中藥成分分析；超高效液相色譜；質譜

1前言

中醫藥是我國勞動人民幾千年來，與疾病斗爭積累下的寶貴財富。中藥所含化學成分群是其防治疾病的物質基礎，但中藥組成十分復雜，化學成分種類多，部分成分化學結構、性質相近、有效成分不明確、含量低近痕量等復雜性存在。因此中藥成分分析存在諸多問題，如分離難度大、分析時間長、檢測限不夠靈敏等困難。這些問題在中藥成分分析中是普遍存在，對中藥成分有重要影響。這些問題是中藥成分分析要解決的關鍵問題，也是未來發展的一個方向。

2 UPLO在中藥化學成分的分析

隨著超高效液相色譜（ultraperformance liquid chromatography，UPLC）儀在2004年的出現，以及隨之而來的快速高效液相色譜分離技術的發展與成熟，有效地克服了傳統的高效液相色譜（HPLC）在分析過程中存在的劣勢，使得中藥化學成分分析迎來了高效、高通量的發展階段，在分析速度、分離度及靈敏度方面有了顯著的提高。

UPLC的分離原理與傳統的HPLC相同，色譜分離度隨色譜柱填料顆粒粒徑的降低而提高。當固定相的粒徑為亞2μm填料時，一條幾乎平行于橫軸的板高一流速（H-μ）線，可以認為流速與板高幾乎無關。UPLC正是用1.7μm填料顆粒來改善柱效，使得不損失高分離度又能優化流速、提高分析速度成為可能。與傳統高效液相色譜相比較，超高壓液相色譜亞2gm粒徑填料提供的柱效比5μm粒徑填料提高3倍。

金高娃等使用HPLC分析樣品，在40min完成分析，共35個峰，而采用UPLC分析時，樣品在20min內就完成分析，共39個峰。如果僅考慮與HPLC相同的分離效果，UPLC的分析時間還能進一步縮短，通過提高流速來實現。Nguyen等檢測4種尼泊金酯類同系物，采用UPLC（1.71ttm固定相色譜柱）其分析速度比同樣性質，而粒徑為5um的色譜柱提高了8倍，且是保持分離度不變的情況。

超高壓液相色譜增大了比表面積的方式，是使用亞2pm多孔微球填料。而峰容量隨著填料顆粒的比表面積的增大而增大，分離能力也隨之提高，能分辨出更多的色譜峰，得到的樣品信息量也更多。另外，由于亞2pm粒徑填料的色譜柱有更高的柱效，得出的色譜峰寬更窄，峰高增加，靈敏度也隨之提高。UPLC在獲得了更高的柱效與更快的分離速度時，靈敏度也提高。

金高娃等使用HPLC分析樣品，8min到10min只有9個色譜峰，而采用UPLC分析時，8min到10min共23個色譜峰。此外UPLC進樣量為3pL時，最高峰的吸收值為3.5AU，而HPLC進樣量10pL時，與UPLC中對應峰的吸收值為1.7AU，經過換算，UPLC的靈敏度是HPLC的7倍左右。UPLC的高靈敏度優勢，就HPLC檢測不到或吸收值很小的峰來說更加明顯。如Yμ等檢測大鼠血漿中所含混合藥物采用UPLC/MS/MS進行分析，發現靈敏度提高了5～10倍。

UPLC對樣品高靈敏度的檢測限，依賴于一個高靈敏度的檢測器。質譜分析能得到物質的化學成分和結構的相關信息，通過測定樣品離子的質量和強度實現的一種分析方法。具有高分離能力、高靈度、和極強的專屬性等特點。

Liu等為測定、鑒定丹參中的酚酸，建立了LC-DAD/ESI-MSn方法，采用負模式推斷了丹參樣品中的原兒茶酸、丹參素、咖啡酸、紫草酸等酚酸的碎裂機理；共鑒定出42種酚酸成分，其中包括首次報道的16種低豐度組分。李坤平等利用UPLC/ESI-TOF-MS/MS分析蛇床子提取物中香豆素類化合物進行快速分析與鑒定，最終推斷出歐前胡素、佛手苷內酯、蛇床子素、花椒毒酚和花椒毒素5種香豆素類成分。張維冰等利用超高效液相色譜一串聯質譜法測定亳菊、滁菊、貢菊和杭菊中多酚類化合物，鑒定出了10種咖啡酰基奎寧酸類化合物、22種黃酮類化合物。4種菊花中多酚類化合物的含量合格，多酚類化合物總量貢菊>杭菊>滁菊>毫菊。各種類咖啡酰基奎寧酸及黃酮化合物的組成和含量差異顯著。王菲等利用超高效液相色譜一串聯質譜（UPLC-MS/MS）同時測定甘草、西洋參、三七、人參、丹參5種中藥材中25種農藥和3種有毒代謝物殘留物，方法簡單、快速、靈敏，為快速篩查中藥材中三唑類殺菌劑和三嗪類除草劑的農藥殘留量提供了依據。

氣相色譜法檢測揮發性成分氣質聯用技術更是對揮發性成分的重要表征和鑒定的有效手段，具有速度快，靈敏度高的優勢。萬益群等利用氣相色譜一質譜法測定中藥中殘留的13種有機磷和有機氮類農藥，為同時分析中藥中多種類型農藥提供了新方法。華永麗等利用GC-MS建立當歸及其不同炮制品揮發油化學指紋圖譜，篩選出當歸及其不同炮制品的12個潛在標志物，并且鑒定出11個化合物。劉文涵等采用頂空液液萃取/氣相色譜一質譜（HS-LP-LPE/GC-MS）聯用法，鑒定出中藥白術中33個揮發性成分。

3結語

UPLC因其進樣體積小，分離速度快，靈敏度高等優點，近幾年在藥物分析領域中的快速應用和推廣，展現出其廣闊的應用前景。中藥快速定性定量分析提供了一種高效、準確的分析技術。隨著色譜質譜聯用技術的日益成熟，質譜技術會越來越多地應用到相關領域當中，實現中藥分析的高靈敏度。