基于生理生化指標的馬錢子毒性作用研究

董輝+南洋+李先娜

【摘要】本研究通過對大鼠口服給予馬錢子后，在不同給藥時間點對大鼠血清中ALT、AST、ALP、UREA和心肌勻漿中Na K-ATP、cK、LDH、SOD進行測定，從生理生化指標的角度觀察長期給予馬錢子對正常大鼠的毒性作用。

【關鍵詞】馬錢子；生理生化指標；毒性作用

馬錢子為馬錢科植物馬錢Strychnosnux-vomica L的干燥成熟種子，具有通絡止痛，散結消腫之功效，中醫臨床常用于治療骨折腫痛，風濕頑痹，麻木癱瘓，癰疽瘡毒，咽喉腫痛等癥。但馬錢子有大毒，使用不當容易引起全身肌肉強直性痙攣，刺激腸道而導致腹痛、腹瀉，而且對腎臟也具有一定毒性，可損害腎小管，造成腎功能衰竭等。因此，本實驗通過對給予馬錢子后1～3個月大鼠血液中的8個與心臟、肝臟和腎臟相關的生理生化指標進行測定，進一步對長期使用馬錢子的毒性進行探討。

1實驗材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物及分組

清潔級雄性Wistar大鼠60只，體重200g土20g，在溫度24±2℃、濕度65%一75%、12h晝夜交替的環境下飼養。將大鼠隨機分為2組，即空白對照組和馬錢子給藥組，適應一周后開始給藥。

1.1.2給藥樣品的制備

取馬錢子藥材200g，用10倍量蒸餾水浸泡1h，煎煮60min，紗布過濾，濾渣再用8倍量蒸餾水煎煮30min，過濾后合并兩次濾液，冷凍干燥。將凍干粉按人正常給藥量折算成大鼠給藥量（5.4mg/100g/d），用蒸餾水配置成溶液；空白對照組大鼠給予相應體積的蒸餾水。

1.1.3生物樣品的采集與制備

1.1.3.1血液樣品的采集

在第1、2、3個月給藥周期結束后，大鼠禁食12小時，稱重，用3%戊巴比妥鈉溶液麻醉。采用一次性真空采血管采集血液樣本，室溫靜置30min后，在4℃條件下6000 rpm離心20min，分離上層血清，供UREA、ALP、AST、ALT測定。

1.1.3.2心肌勻漿樣品的制備

大鼠取血后立即摘取心臟，在左心室位置取約200mg心肌樣品，精確稱重，加入9倍量生理鹽水，冰浴下以13500rpm勻漿1min，所得勻漿樣品在4℃下3000rpm離心10min，取上清液700uL供Na-K-ATP酶活性測定，余下組織勻漿在4℃下6000rpm離心20min，取上清液2℃下保存，供CK、LDH、SOD測定。

1.2測定方法

將獲得的血清及心肌勻漿樣本，采用SECOMAN BASIC半自動生化分析儀，按照ALP、AST、ALT、SOD、UREA、Na—K-ATP、CK、LDH生化試劑盒使用說明進行檢測。

1.3數據統計與分析

將獲得數據導入SPSS17.0軟件包分析，各組間比較采用完全隨機設計的單因素方差分析（one-way ANOVA），當P<0.05時，認為差異有統計學意義，所得結果見表1～表6。

3結果

通過對1—3個月馬錢子給藥組大鼠血清樣品中ALT、AST、ALP、UREA及心肌勻漿樣品中Na-K-ATP、CK、LDH、SOD的測定發現，除CK和LDH變化不明顯外，其它指標均在給藥過程中的不同時間點發生顯著性改變，這說明在長期給予馬錢子的過程中，對大鼠的心臟、肝臟和腎臟都產生了不同程度的影響，而且以給藥第3個月時最為嚴重。

4討論

4.1Na-K-ATP酶活性變化

馬錢子組給藥1-2個月時，大鼠心肌勻漿樣品中Na-K-ATP酶活性與空白組無明顯差異。給藥3個月時，馬錢子組大鼠心肌勻漿樣品中Na-K-ATP酶活性明顯低于空白組。Na-K-ATP酶是一種細胞膜蛋白，存在于真核細胞膜上，它利用一分子ATP水解產生的能量逆電荷梯度及化學梯度泵出三個鈉離子到細胞外，同時泵入兩個鉀離子到細胞內，從而維持細胞內外的電化學梯度的平衡，以維持細胞的基本功能。有研究報道，過度訓練大鼠心肌線粒體膜自由基生成增多，抗氧化酶活性下降，導致線粒體膜發生脂質過氧化，Na+-K+-ATP酶活性下降。本實驗結果說明，在給藥第3個月時，馬錢子使Na-K-ATP酶的活性降低，引起心肌細胞能量代謝紊亂，造成了心肌細胞功能障礙。

4.2CK活性變化

馬錢子給藥1-2個月時，大鼠心肌勻漿樣品中CK酶活性與空白組無明顯差異；給藥3個月時鼠心肌勻漿樣品中CK酶活性較空白組高，但無顯著性差異。CK存在于細胞質的胞漿中，是肌肉收縮過程中提供能量的重要磷酸轉移酶。有報道稱，CK的表達與心肌耗氧異常有關，因此判斷長期給予大鼠馬錢子后，大鼠心臟可能長期處于高耗能狀態，進而加重心臟負擔，造成對心臟的毒性作用；同時也可能與馬錢子可造成全身性肌肉痙攣有關。

4.3LDH活性變化

馬錢子組給藥第1個月時，大鼠心肌勻漿樣品中LDH酶活性與空白組無明顯差異。給藥2-3個月時，馬錢子組大鼠心肌勻漿中LDH活性升高，但無顯著性差異；LDH是糖原無氧酵解代謝途徑的關鍵酶，在耗氧的心肌組織中，乳酸在LDH作用下氧化成丙酮酸并經線粒體進入三羧酸（TCA）循環。有研究表明，組織細胞損傷可引起其LDH的活性增加，可間接反映心肌損傷的程度，因此判斷長期給予馬錢子會對心肌造成了損傷。

4.4AST與ALT活性變化

馬錢子給藥第1-2個月時，大鼠血清樣品中AST與空白組無明顯差異。在給藥3個月時，馬錢子給藥組大鼠血清中AST活性明顯高于空白對照組。馬錢子給藥1個月時，大鼠血清樣品中ALT酶活性與空白組無明顯差異；給藥2、3個月時，馬錢子給藥組血清樣品中ALT活性明顯高于空白對照組。當肝臟發生實質性損傷時，AST和ALT活性會顯著升高，因此AST和ALT是反映肝細胞損傷的關鍵指標。實驗結果說明長期給與馬錢子對大鼠肝臟造成了毒性影響。

4.5ALP活性變化

馬錢子組給藥1-2個月時，大鼠血清樣品中ALP酶活性與空白組無明顯差異；在給藥3個月時，馬錢子組血清中ALP明顯升高。ALP的變化主要與膽管系統損害和膽汁淤積有關，說明長期給予馬錢子可能對大鼠膽管造成了影響。

4.6 UREA活性變化

尿素氮UREA是評價腎功能的主要指標，有研究表明慢性腎臟疾病可引起血中尿素氮的含量發生異常變化。馬錢子給藥1個月時，血清樣品中UREA活性與空白組比較均無顯著性差異；給藥第2、3個月時，血清樣品中UREA活性明顯升高，此結果表明馬錢子對大鼠腎臟有影響。

4.7SOD活性變化

馬錢子組在給藥1個月時，大鼠心肌勻漿樣品中SOD活性與空白組無明顯差異；在給藥2、3個月時，馬錢子組大鼠心肌勻漿樣品中SOD活性顯著降低，與空白對照組顯示出明顯差異。機體在缺血、缺氧或產生炎癥的狀態下，體內氧自由基增多，而SOD是機體內清除氧自由基的特異酶，能夠降低氧化應激損傷。此結果說明馬錢子能夠使心肌細胞中SOD活性降低，對大鼠心肌細胞具有一定的毒性影響。