超聲波強化提取紫花地丁根中黃酮類化合物的工藝研究

阮樹堂

摘要：指出了紫花地丁中含有豐富的黃酮類生物堿，大量的試驗證明其具有較好的生物活性。采用正交試驗法，得出了紫花地丁根中總黃酮的最佳提取工藝條件：物料比 1∶50、功率150 W、提取時間 50 min、溫度 70 ℃，且紫花地丁根提取物中粗品黃酮得率為1.71 %。

關鍵詞：紫花地??；提取物；超聲波

中圖分類號：S811.5

文獻標識碼：A 文章編號：16749944（2017）22013403

1 引言

紫花地丁（Viola Philippica），又稱地丁草、野堇菜、紫地丁，屬多年生草本植物，分布于我國東北、長江流域和黃河流域等地。紫花地丁可作為藥材使用，微苦、性寒，具有清熱解毒、抗菌消炎、涼血消腫等功效。黃酮類化合物廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。現代醫學研究表明，紫花地丁所含黃酮類成分具有較強的抑菌作用[1]。目前，有關紫花地丁根成分的研究較少。筆者利用超聲波提取法對其根進行化學提取，并利用分光光度法考察其黃酮類化合物成分含量，旨在為拓展紫花地丁綜合開發利用提供一定的實驗基礎和理論依據。

2 材料和方法

2.1 試驗材料

紫花地丁，采摘于贛州境內105國道旁；

蘆丁黃酮標準品，購自中國食品藥品檢定研究院；

50%乙醇，RO水。

2.2 試驗儀器

旋轉蒸發儀（鄭州長城R—100IVN）；

紫外可見分光光度計（美普達uv1800pc）；

超聲波循環提取機（CTXF—5B）；

恒溫干燥箱（DHG—9241A）；

粉碎機（FW100）。

2.3 試驗過程及方法

將新鮮的紫花地丁連根拔起，去枝葉，留根部，切片，50-60℃烘干，粉碎，加入溶劑浸提，超聲波提取，正交實驗，得出結論。試驗過程見圖1。

精確稱取紫花地丁根部樣品2.3130 g 于 100 m L 錐形瓶中， 分別加入不同溶劑 40 mL， 使樣品完全浸泡在溶劑中并浸泡36 h，后將溶劑和樣品混合物轉移至超聲提取機中提取， 取出冷卻至室溫，過濾，將濾液置于100 mL燒瓶中， 用旋轉蒸發儀減壓蒸發溶劑，得紫花地丁根部提取物，備用。

2.4 標準曲線的繪制

準確稱取蘆丁標準品 0.0350 g 于小燒杯中， 加入30 mL 50 %乙醇，攪拌溶解，后轉移至100 mL 容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，得蘆丁標準溶液，濃度為 0.35 mg/mL。

準確移取蘆丁標準品溶液 0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60 mL分別置于10 mL的比色管中，分別加入1%三氯化鋁溶液至刻度，在波長514 nm處測定各比色管中溶液的吸光度，以 A 為縱坐標，濃度 C 為橫坐標繪制標準曲線，對標準曲線進行線性擬合[2]，求得回歸方程：A=0.2335+0.8251C （mg/10 mL），相關系數r=0.9991。

2.5 提取物的濃度測定

按照2.4標準曲線的繪制方法，移取1.00 mL的提取物于10 mL的比色管中，加1% 三氯化鋁溶液至刻度，測定比色管中溶液的吸光度。

2.6 回收率的測定

按照上述測定方法測定吸光度值，結合回歸方程，算出紫花地丁根中總黃酮得率，計算公式為：

總黃酮得率/%=提取液中總黃酮質量總質量×100%。

2.7 正交試驗設計

本試驗設計主要討論了在超聲波提取過程中影響提取效果的物料比、功率、時間以及提取溫度對提取紫花地丁中黃酮類物質的影響。

3 結果討論

3.1 紫花地丁根中黃酮總量

由表1可以看出，相較與紫花地丁其他部位的黃酮含量，根中黃酮總量較少[3]。

3.2 正交試驗

本試驗主要設計了4因素4水平的正交試驗，相互關系見表2。

3.2.1 物料比對提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設定提取溫度 70 ℃、提取時間 70 min 、功率為150 W條件下，研究物料比分別為1∶30、1∶40、1∶50和1∶60時對紫花地丁總黃酮得率影響（圖2）。

試驗結果見圖2顯示，隨著物料比的增加，黃酮含量組建增加，而最佳物料比是1∶50。

3.2.2 功率對提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設定提取溫度 70 ℃、提取時間 70 min 、物料比是1∶50的條件下，研究超聲波功率分別為100、150、200和250 W時對紫花地丁總黃酮得率影響（圖3）。

結果見圖3顯示，當超聲波功率為150 W時，黃酮含量最高，為1.95%。

3.2.3 提取時間對提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設定提取溫度 70 ℃、提取功率為150 W、物料比是1∶50的條件下，研究提取時間分別為30 min、50 min、70 min和90 min時對紫花地丁總黃酮得率影響（圖4）。

結果見圖4顯示，當提取時間為70 min時，黃酮含量最高，為1.63%。

3.2.4 溫度對提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設定提取時間 70 min、提取功率為150 W、物料比是1∶50的條件下，研究提取溫度分別為30 ℃、50 ℃、70 ℃和90 ℃ 時對紫花地丁總黃酮得率影響（圖5）。

結果見圖5顯示，當提取溫度為70 ℃時，黃酮含量最高，為1.55%。

由上述試驗結果可以得出結論，超聲波提取紫花地丁根的黃酮時的最優參數為：物料比為1∶50、提取溫度 70 ℃、提取時間 70 min、功率為150 W。

4 結論

（1）本試驗采用正交試驗法，得出紫花地丁根中總黃酮的最佳提取工藝條件：物料比1∶50、功率150 W、提取時間 50 min、溫度 70 ℃，得到紫花地丁根提取物中粗品黃酮含量為 18.58 mg/g。

（2）超聲波強化提取紫花地丁的方法具有省時、高效、節能等優點。

參考文獻：

[1]陳蔚燕. 紫花地丁不同方式提取物抑菌效果研究[J] .現代農藥，2014， 5（13）：38～40.

[2]侯冬巖，回瑞華，劉曉媛. 紫花地丁中黃酮類化合物提取條件的研究[J]. 鞍山師范學院學報，2007，4（9）：19～22.

[3]付戈妍， 付 克， 王洪光，等. 超聲波提取紫花地丁總黃酮及含量測定[J].內蒙古民族大學學報（自然科學版），2008，5（23）：512～513.