豬附紅細胞體病的研究進展

尹洪哲+樸香麗+董亮

摘 要：豬附紅細胞體（Mycoplasma suis）是一類能夠引起貧血的病原體。該病能引起急性溶血性貧血；慢性貧血；家畜不健壯，增長率差，繁殖性能低易引起繼發感染；嚴重影響養豬業的發展并造成了巨大的經濟損失。本文就附紅細胞體的病原學特點、流行病學及危害、臨床癥狀和病理變化、檢測方法、免疫學研究等方面作一綜述。

關鍵詞：豬附紅細胞體；病原學特點；流行病學及危害；檢測方法；免疫學研究

豬附紅細胞體（Mycoplasma suis）是一種粘附于大多數脊椎動物血液紅細胞上的嗜血性支原體，主要引起急性溶血性貧血和慢性貧血，影響家畜增長率差，和降低繁殖性能并且容易引起繼發感染。該病原體具有血液源性的特性，國外的文獻證明它是很難進行培養的病原體，只能寄生于動物體內進行生長繁殖。由于其培養困難的特性使我們的診斷受到了限制[1]。

1 病原學研究

多種動物的紅細胞能夠被附紅細胞體寄生，該病原體的分類在學者之間一直存在著很大的爭議。該病原體結構簡單通常以球狀，環狀或者桿狀形式感染動物機體。該病原體一般只附著在紅細胞的表面，偶爾也會大量或者少數的自由漂浮于血漿中[2]。該病原體存在較大的直徑變化，一般在 0.3-0.8？滋L范圍內，最大可達到2.5？滋L。通過吉姆薩染色可以發現該病原體具有較強的折光性并于紅細胞上呈現藍紫色。它的大小和形態以及致病性都隨著宿主不同而表現出不同的變化。該病原體的致病性很強，一般情況下很少單獨感染動物，經常和其他的病原體共同感染。K. Groebel等科學家經過給豬手術摘脾后進行感染、采液，利用各種不同的顯微鏡觀察了該病原體在紅細胞內的生命周期，使該病原體可以感染紅細胞得到了證實。附紅細胞體曾被認為是原蟲，后來被確定屬于附紅細胞體屬。該病原體最初被確定為立克次氏體附紅細胞體屬，但是由于其與支原體關系很為密切，尤其是肺炎支原體，因此該病原體被劃分到柔膜體綱支原體屬內，并將E. suis更名為M. suis。但仍有許多學者對此提出反對的觀念，因為該病原體屬的基因序列和有些支原體的同源性并不高，并且該病原體感染的對象為動物的紅細胞，而支原體感染的對象為上皮細胞。同時在傳播方式上，該病原體可以垂直傳播，也可以通過節肢動物傳播，而支原體不需要任何傳播媒介。雖然對于該病原體的名稱學者們仍有一些爭議，但是在國際主要的各影響因子較大的期刊上可以發現幾乎所有的文章對于該病原體的描述時都用M. Suis來闡述，這說明該名稱已經被人們所接受。

2 流行病學及危害

附紅細胞體的宿主種類較多，可以感染包括人、家畜、寵物等許多哺乳動物。該病原體的傳播途徑也比較廣泛，如蚊蟲叮咬，接觸性傳播，垂直傳播等。目前學者們認為，蚊蟲等節肢動物傳播途徑是該病的主要傳播方式。由于該病在夏季和秋季的發病率高于春季和冬季，而蚊蟲等節肢動物在此時也是最活躍，數量最大的時候。于1977年劉興發等在人類的胎盤中檢測到了該病原體，同時有學者發現豬通過垂直傳播導致新生仔豬患病的案例，因此確定該病原體是可以垂直傳播的。一般該病原體可以在-20℃環境下可以存活835 d，感染動物后發病快，生長周期為14-16h。

附紅細胞體于1928年被Schilling和Dinger在嚙齒動物體內首次發現，1932年，在印度Doyle等報道了該病原體。但是對于其流行病感染狀況還不是很了解。隨后，世界各地的學者們相繼在許多動物體內甚至人體內發現了該病原體并于1950年被 Splitter正式命名。在國內，該病原體的感染率較高，同時因其具有繼發感染和混合感染的特性使我國養豬業豬受到了較嚴重的侵害，已經給養豬業造成了巨大的經濟損失。該病原體于我國大多數省份的主要發病時間為夏季和秋季，因為在這段時間內的溫度較高并且由于多雨而導致空氣潮濕，這正是節肢動物生長繁殖的最佳時期。同時在我國南方等熱帶地區由于氣候全年適合節肢動物的生長繁殖則可以全年發生該病。該病原體多為隱性感染，在豬受到較強的應急激感染其他病原微生物時就會引起該病的繼發感染。該病原體單獨發病的幾率較小，主要以混合感染的形式存在，如與豬瘟，豬呼吸道疾病等的混合感染，近期報道的寄生蟲類（弓形蟲、蛔蟲等）也成為了其混合感染的對象，加大了該病診斷和治療的難度。研究者發現，它不僅可以附著在紅細胞表面，也可以侵入到內部，目前尚無有效控制該病的疫苗[3]。

3 臨床癥狀和病理變化

感染附紅細胞體的動物根據程度的不同不僅可以引起慢性貧血，也可以引起典型的癥狀。主要癥狀為免疫抑制、不孕、發育不良等。由于抗生素的使用和有些動物對該病原體的易感性不強使感染動物通常處于慢性感染的狀態，并且使被感染的動物隱性感染能夠存在數月或永遠不表現臨床癥狀。于實驗室內將病原體給豬靜脈注射后3-7d，于豬的血液內可以檢測到病原體。而感染手術摘脾豬時，其發育周期會縮短，2d就可以檢測到病原體，且一般不會超過10d。

臨床上低劑量慢性感染時感染動物只出現不明顯的臨床癥狀如新生小豬慢性貧血；輕微黃疸；生長停滯；母豬繁殖能力下降等。同時伴隨有食欲不振和皮膚蒼白這給養豬業帶來了非常巨大的困難和損失[4]。

急性感染該病原體時，感染動物會出現菌血癥，多表現為血糖下降嚴重甚至死亡。偶爾病豬會出現耳朵壞疽性壞死、呼吸困難、腸炎、發紺、等臨床癥狀。這種癥狀在仔豬和育肥豬以及妊娠母豬上頻繁發生。仔豬通常出現黃疸、可視粘膜蒼白高熱等。被感染的母豬會出現流產、厭食、外陰紅腫，體溫增高等。小母豬在感染該病原體時也會出現此類癥狀并且很難受孕[5]。剖檢該病原體感染的動物可以觀察到皮下水腫，血凝不良，心臟和肝臟有出血點，體積增大，全身脂肪黃染等癥狀。感染該病原體的豬淋巴結腫大，肺有較大面積的淤血。脾臟顏色發黑，邊緣壞死。腎皮質有散在的針尖大出血點，腎髓質嚴重出血[6]。

4 檢測方法

附紅細胞體在通過臨床初步檢查診斷后可以通過染色，分子實驗，血清學實驗等進行進一步確診。通常用的染色方法有很多，如吉姆薩，瑞氏等染色等方法。薛書江等[7]通過對吖啶橙和吉姆薩染色這兩種方法進行染色后結果的比較，發現第一種染色方法對該病原體的檢測更為敏感。第二種方法更加簡單易行，操作步驟也更為簡單。但是由于這兩種方法對病原體的數量需求都較大，因此對該病原體隱形感染的檢測效果都不是很好。endprint

PCR擴增檢測：通常實驗室采用IHA實驗對此病原體做進一步診斷。Gwaltney等通過比較PCR和IHA對M. suis的靈敏性檢測，確定了PCR方法檢測M. suis的靈敏性更強。Hoelzle建立了MSG1的PCR檢測方法，該方法為附紅細胞體病的預防提供了新的手段。

ELISA檢測：該方法是以該病原體陽性血液做為抗原進行檢測的方法。由于血液中抗原的成份不是單一的，可能出現假陽性，并且在進行實驗前需要對該病原體進行提純，這導致實驗程序無法標準化，因此該方法有待進一步完善。

5 免疫學研究

迄今為止，還沒有該病原體免疫學方面充分的研究結果；血清學方面的研究也僅限于診斷的方法。由于缺乏有效的敏感和特異的抗體試驗（試驗需要純化的病原），所以想要分析該病原體在豬體內的兔疫反應具有一定的困難。目前，只能從豬的血液中提取成份復雜的抗原?，F如今對于試驗細節發展的要求越來越嚴格，需要詳細的分析免疫反應的機制，對于抗原也需要了解它的蛋白的組成成份。Heolzle等用陽性血清釆用Western方法識別了附紅細胞體的抗原成分。但感染血清的條帶反應是不穩定的。并且在急性感染時，過度的自體反應的抗體能夠與對照抗原相結合，使豬附紅細胞體特異性抗體的檢測被掩飾。因此，要檢測到該病原體的特異性抗體具有一定的難度，甚至在急性感染情況下用該方法根本檢測不到抗原。

目前，對附紅細胞體保護性免疫發生以及抗原性質的了解非常有限。通過體外試驗證明兔和豬陽性血清可以顯著抑制紅細胞上的病原體，但是對臨床急性感染并不理想。我們常見的抗原都是抗糖的，紅細胞表面的抗原也具有相同的情況。附紅細胞體使動物紅細胞抗原發生改變，致使機體產生凝集素，但是目前，尚不清楚其改變的原因和作用[8]。

附紅細胞體特異性免疫反應于自體反應存在一定的聯系。隨著特異性免疫反應的減少自體反應產生的抗體水平也會隨著升高，而而菌血癥是否嚴重與自體反應直接相關[9]。因此，應該在患病豬感染的初期觀察和揭示該病原體的免疫活性對細胞的影響以及免疫機制。支原體有多種類似細胞分裂素的不同結構，這些結構能夠引起細胞增殖也能引起多克隆激活。但是該病原體誘發自體反應的原理，以及目標結構在發病機理中的作用尚沒有明確的闡述，需要進一步進行研究，也是當前研究的重點。

參考文獻

[1]Oehlerking， J.， Kube， M.， Felder， K. M.， Matter， D.， Wittenbrink， M. M.， & Schwarzenbach， S.， et al. （2011）. Complete genome sequence of the hemotrophic mycoplasma suis strain ki3806. Journal of Bacteriology， 193（9），2369-70.

[2]Guimaraes， A. M.， Biondo， A. W.， Lara， A. C.， & Messick， J. B. （2007）. Exploratory study of mycoplasma suis （eperythrozoon suis） on four commercial pig farms in southern brazil. Veterinary Record，160（2），50-3.

[3]李清艷，翟向和，李新民，等.附紅細胞體病紅細胞免疫功能的研究[J].動物醫學進展，2004，25（3）：100-101.

[4]尤立娜，巴彩鳳，馮會權，等.人工感染豬附紅細胞體病的病理組織學研究[J].中國畜牧[36]獸醫，2008，35（6）：78-80.

[5]Potkonjak A， Lako B， Toholj B， et al. Findings of antibodies to Mycoplasma suis on swine farms in Serbia.[J]. Acta Scientiae Veterinari，2013，41（1）：1-5.

[6] Hoelzle K， Engels M， Kramer M M， et al. Occurrence of Mycoplasma suis in wild boars （Sus scrofa L.）.[J]. Veterinary Microbiology， 2010， 143（2-4）：405.

[7]薛書江.豬附紅細胞體吉林株單克隆抗體的制備應用和免疫蛋白組學研究[D].延邊大學，2014.

[8]Hoelzle L E. [Significance of haemotrophic mycoplasmas in veterinary medicine with particular regard to the Mycoplasma suis infection in swine].[J]. Berliner Und Münchener Tier？rztliche Wochenschrift， 2007，120（1-2）：34-41.

[9]Meng K， Sun W， Zhao P， et al. Development of colloidal gold-based immunochromatographic assay for rapid detection of Mycoplasma suis in porcine plasma[J]. Biosensors & Bioelectronics， 2014，55：396-9.endprint