治糜康栓提取工藝考察

劉浩

摘 要：目的：對處方中黃柏和苦參兩種藥材合理利用及進一步提高治糜康栓的臨床療效。方法：采用L9（34）正交試驗優(yōu)化，取最優(yōu)結(jié)果對其“提取次數(shù)”等因素再進行考察。結(jié)果：最佳工藝為加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小時，提取3次。

關鍵詞：治糜康栓；鹽酸小檗堿；正交試驗；高效液相檢測

治糜康栓是國家正式批準生產(chǎn)的純中藥制劑，收載與2015版《中華人民共和國藥典》一部，具有清熱解毒燥濕清熱的功效，主要用于濕熱下注所致的帶下病，臨床療效確切，市場好。

處方的黃柏和苦參兩味藥物抗病原微生物的有效成分均為生物堿，其中黃柏以鹽酸小檗堿為代表，苦參生物堿以苦參堿和氧化苦參堿為代表，而這些成分的脂溶性較好，在熱水中的溶解性有限，而原工藝提取方法為水提，大大限制了臨床治療病原微生物感染的有效成分生物堿的提取，脂溶性有效成分有太多的浪費。基于對黃柏和苦參兩種藥材合理利用及進一步提高治糜靈栓的臨床療效的目的，我們在不改變原工藝處方、藥物用量及原主要工藝的基礎上，進行了工藝的優(yōu)化，形成了一種簡單、易行、適應于工業(yè)化大生產(chǎn)的生產(chǎn)工藝。

由于2015版藥典將鹽酸小檗堿作為含量測定的指標性成分，在盡量不改變原工藝和質(zhì)量標準的情況下，我們以鹽酸小檗堿為指標性成分，進行了工藝的篩選：

1 鹽酸小檗堿的含量測定

1.1 儀器

儀器：安捷倫-高效液相色譜儀（LC-10ATvp泵，LC-10Avp檢測器）。

色譜柱：Kromasil C18色譜柱（3.9mm×200mm，5μm）；Kromasil C18保護柱。

流動相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（33：67）。

流速：1.0ml/分鐘。

檢測波長：424nm。

1.2 對照品

鹽酸小檗堿對照品：中國藥品生物制品檢定所，110713-200911，純度為86.8%。

1.3 標準曲線制備

取鹽酸小檗堿對照品9.378mg（按含鹽酸小檗堿為86.8%計為8.14mg），精密稱定，置5ml容量瓶用甲醇定容，取出40μl用甲醇定容到2ml。鹽酸小檗堿對照品溶液分別自動進樣4、7、10、13、16、20μl，測得鹽酸小檗堿的峰面積，以質(zhì)量X與色譜峰面積Y做標準曲線，得回歸方程為：Y=25.475X-13.195（r=0.99995），結(jié)果見表1。

表明鹽酸小檗堿在0.13～0.65μg范圍內(nèi)線性關系良好。

1.4 供試品溶液制備

取醇提物約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，稱定重量，置50℃水浴中加熱使充分溶散，取出，放冷，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置過夜，取出，取上清液迅速濾過，精密吸取濾液2ml加在堿性氧化鋁柱（100-200目，12g內(nèi)徑為1cm）上，加甲醇35ml洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45um微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。

1.5 測定法

分別精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液10μl入高效液相色譜儀，測定并計算樣品中鹽酸小檗堿的含量。

2 乙醇濃度、用量、提取時間考察

乙醇濃度、用量、提取時間及提取次數(shù)是影響回流提取的主要因素，因此對乙醇濃度、用量、提取時間進行L9（34）正交試驗優(yōu)化，取最優(yōu)結(jié)果對其“提取次數(shù)”因素再進行考察見表2。

試驗方法：黃柏、苦參各200g加水煎煮三次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并煎液，濾過，藥渣按表2加入不同濃度不同倍數(shù)的乙醇煎煮，按煎煮時間和次數(shù)進行提取，濾過，合并濾液，回收乙醇，干燥，測出膏率和干膏中鹽酸小檗堿的量，結(jié)果見表3、4。

F1-0.1（2，2）=9.00；F1-0.05（2，2）=19.00； F1-0.01（2，2）=99.00

分析：由表中結(jié)果可知，醇回流提取正交試驗中的四個因素，乙醇濃度（%）、溶媒體積（v）、提取時間（h）及提取次數(shù)中，溶媒體積對小檗堿含量影響較大，溶媒體積F值小于0.05，有差異性。對結(jié)果進行分析，四因素對小檗堿含量影響大小為B>D>A>C，其中D、A、C三因素對小檗堿含量影響不大。

因此確定最佳工藝為A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小時，提取3次。

最佳工藝驗證：

取提取物粉末約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1：100）混合溶液100ml，稱定重量，置50？C水浴中加熱使充分溶散，取出，放冷，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，密塞，置冰箱中在0-4℃下放置過夜，取出，取上清液迅速濾過，精密吸取濾液10ml加在，堿性氧化鋁柱（100-200目，12g內(nèi)徑為1cm）上，加甲醇35ml洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即為供試品溶液。

測定法：分別精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液5-10μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表5。

從實驗結(jié)果可以看出，所確定的正交實驗的結(jié)果重現(xiàn)性良好，可以最后確定最佳工藝為A3B2C1D3即加8倍量80%乙醇，回流提取1.5小時，提取3次。

3 討論

3.1 將苦參、黃柏藥渣中的有效成分充分提取后進行制劑，提高了有效成分的轉(zhuǎn)移率，充分利用藥材。

3.2 有效成分的提取率增高，抗病原微生物的藥理活性顯著增加。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：1118.endprint