高效液相色譜法定性鑒別人參口服液中人參皂苷Rg1、Re的方法研究

杜進+王雪

摘 要：為了確保人參口服液產品原料用藥的真實，本文通過查閱大量文獻，不斷進行實驗摸索以及分析方法學驗證工作，建立了人參口服液定性鑒別的測定方法。方法：采用高效液相色譜法對人參皂苷Rg1、Re進行定性鑒別。結果：本方法專屬性、耐用性良好，能準確進行定性鑒別。結論：建立的新方法準確可靠，適用于人參口服液鑒別分析。

關鍵詞：人參皂苷；專屬性；耐用性；高效液相色譜法

人參口服液大補元氣，生津止渴。用于氣虛所致的身倦乏力，食欲不振，心悸氣短，失眠健忘等。人參口服液主要成分為人參。人參作為滋補佳品，其成分極其復雜，而人參皂苷被視為人參中的核心成分。例如人參皂苷Rg1可快速緩解疲勞、改善學習記憶、延緩衰老，具有興奮中樞神經、抑制血小板作用；Rg2具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治療和預防冠心病；Rb1具有增強膽堿系統的功能，增加乙酰膽堿的合成和釋放以及改善記憶力作用；人參皂苷Re具有抑制中樞神經，促進DNA，RNA合成，升高血漿皮質酮，擴張血管的作用。人參加工產品大多以總皂苷形式定量，而因種植及提取方法不同各單組分皂苷含量差異較大，為使同類產品更具使用針對性及防范合成式假冒投產本文采用高效液相色譜法建立了人參口服液定性鑒別人參皂苷Rg1、Re的測定方法，嚴格控制產品質量，確保藥品真實可靠。

1 材料

1.1 供試品

人參口服液（市售樣品，規格10ml/支）

1.2 對照品

（1）人參皂苷Rg1（中國藥品生物制品檢定所 批號：110703-201128 含量93.4%）。貯存條件：冷藏。使用條件：使用前無需干燥，可直接使用。（2）人參皂苷Re（中國藥品生物制品檢定所 批號：110754-201324 含量92.7%）。貯存條件：冷藏。使用條件：使用前無需干燥，可直接使用。

1.3 陰性空白樣品

技術部門提供陰性空白樣品為按人參口服液工藝生產，但不含人參功效成分的空白混合物。

1.4 儀器與試藥

1.4.1 儀器。高效液相色譜儀（ 美國Waters e2695）、分析天平等。

1.4.2 試藥。甲醇、乙腈為無末端吸收色譜純級試劑，其他試劑為分析純，均購自合格的供應商。

2 測定方法

2.1 色譜條件

儀器：美國Waters e2695高效液相色譜儀紫外檢測器。流動相：乙腈-水為流動相，進行梯度洗脫（見表1）。檢測波長：203nm。柱溫：30℃。流速：1.0ml/min。進樣量：20μl。色譜柱：Agilent C18（250×4.6mm，5μm）

2.2 對照品和供試品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備。取人參皂苷Rg1、Re對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備。精密量取人參口服液20ml置分液漏斗中，以水飽和正丁醇提取3次，每次20ml，合并提取液，至水浴鍋上蒸干，殘渣加甲醇溶解至5ml量瓶中，定容至刻度，搖勻，過濾，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備。取陰性空白混合液20ml置分液漏斗中，與供試品溶液同法制成陰性對照溶液。

3 試驗研究

3.1 鑒別方法的專屬性考察

用供試品溶液，對照品溶液以及陰性空白對照溶液驗證本方法的專屬性。（圖1）

實驗結果如上重疊色譜圖，陰性空白對照溶液在對照品溶液峰處無干擾。

3.2 鑒別方法的耐用性考察

通過改變色譜的條件，用對照品溶液驗證耐用性。

3.2.1 柱溫。分別在柱溫25℃、30℃、35℃下進行測定，記錄色譜圖，觀察分離度、保留時間、理論塔板數的變化。

結果表明：溫度在25℃-35℃區間內理論塔板數按人參皂苷Re峰計≥30000時，Rg1、Re分離度均符合要求。

3.2.2 流速。調節流速0.9ml/min，1.0ml/min， 1.1ml/min，記錄色譜圖，觀察分離度、保留時間、理論塔板數的變化。

結果表明：流速在0.9-1.1ml/min區間內理論塔板數按人參皂苷Re峰計≥30000時，Rg1、Re分離度均符合要求。

3.2.3 不同品牌色譜柱。選擇以下牌號的C18色譜柱：Diamonsil C18色譜柱，Inertsil ODS-3 C18色譜柱，Agilent C18色譜柱，記錄色譜圖，觀察分離度、保留時間、理論塔板數的變化。

結果表明：不同品牌C18色譜柱均可完成鑒別分離。

3.3 檢出限考察

精密量取對照品溶液用甲醇逐步稀釋成一定濃度的溶液，按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖，信噪比為3時，最小檢測限為5ug/mL。

4 結論

經過以上分析方法學驗證表明，本方法適用于人參口服液中人參皂苷Rg1、Re成分的定性鑒別。

5 討論

本方法在樣品提取過程中，嘗試過三氯甲烷提取，正丁醇提取、乙醚提取等萃取方式，并嘗試提取液是否需要洗滌過程。試驗結果表明，水飽和正丁醇提取效果較好，并且不需要洗滌過程既可得到Rg1、Re較好的分離峰型圖。水飽和正丁醇提取次數考察結果說明2～3次提取基本已經將皂苷提盡。流動相選擇乙腈-水梯度洗脫，嘗試更換流動相比例，洗脫時間等因素，試驗結果表明，現比例分離效果最好，峰型尖銳，陰性無干擾。

參考文獻

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