HPLC測定黃連上清膠囊中大黃素、大黃酚含量

錢婉霞

摘 要：本文采用高校液相測定了黃連上清膠囊中大黃酚和大黃素的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動相，檢測波長為254nm；大黃素在20～160μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系；大黃酚在50～350μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。大黃素和大黃酚的平均回收率分別為99.6%、99.7%，RSD為0.73%（n=6）、0.66%（n=6）；此方法簡便、準確、重現性好，可用于黃連上清膠囊中大黃素和大黃酚的含量測定。

關鍵詞：黃連上清膠囊；大黃素；大黃酚

黃連上清膠囊具有清熱通便，散風止痛等功效。黃連上清膠囊用于上焦風熱所致的頭暈腦脹、牙齦腫痛、暴發火眼、口舌生瘡、咽喉紅腫、大便干燥等。黃連上清膠囊由黃連、大黃、連翹、薄荷、旋覆花、黃芩、荊芥、梔子、防風、石膏、桔梗、黃柏、蔓荊子（炒）、白芷、甘草、川芎、菊花組成。本文采用高校液相測定了黃連上清膠囊中大黃酚和大黃素的含量。

1 儀器與試藥

STI-501Plus梯度高效液相色譜儀（賽智科技（杭州）有限公司）；UV-6雙光束掃描型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）；PH-660高精度實驗室酸度計（上海禾工科學儀器有限公司）；HN-6AL功率可調超聲波清洗（上海汗諾儀器有限公司）；XSYF-D實驗室廢水處理設備（北京湘順源科技有限公司）；PH-660高精度實驗室酸度計（上海禾工科學儀器有限公司）；BT賽多利斯電子天平（北京五洲東方科技發展有限公司）。大黃素和大黃酚對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。磷酸二氫銨（杭州匯普化工儀器有限公司）、乙腈（杭州匯普化工儀器有限公司）、三乙胺（天津市順隆達科技有限公司）、磷酸二氫鈉（天津市順隆達科技有限公司）、磷酸（天津市順隆達科技有限公司）、甲醇（杭州匯普化工儀器有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動相，檢測波長為254nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數按大黃酚峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取黃連上清膠囊內容物，精密加甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，置50ml圓底燒瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超聲處理5分鐘，再加氯仿10ml，加熱回流1小時，冷卻，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器，并入分液漏斗中，分取氯仿層，酸液用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液，氯仿液移至錐形瓶中，揮去氯仿，殘渣精密加甲醇25ml，稱定重量，置水浴中微熱溶解殘渣，放冷后，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取大黃酚和大黃素對照品12mg、6mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 標準曲線的制備

制備濃度為20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1、80μg·mL-1、100μg·mL-1、120μg·mL-1、140μg·mL-1、160μg·mL-1的大黃素對照品溶液，制備濃度為50μg·mL-1、100μg·mL-1、150μg·mL-1、200μg·mL-1、250μg·mL-1、300μg·mL-1、350μg·mL-1的大黃酚對照品溶液。分別按大黃素、大黃酚的測定參數繼續測定。以吸光度為橫坐標，濃度為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，大黃素在20～160μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系；大黃酚在50～350μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

依照2.3項下制備對照品溶液，分別精密吸取大黃素和大黃酚對照品溶液重復測定6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD分別為0.63%和0.73%。結果表明，本實驗精密度良好。

2.6 重現性試驗

分別稱取同批黃連上清膠囊樣品6份，分別依照2.3項下供試品制備方法制備供試品，按質量標準含量測定項下方法測定含量，并計算樣品的RSD值，RSD值為0.79%，0.81%，結果表明，此含量測定方法的重現性良好。

2.7 穩定性試驗

依照2.3項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時進樣測定，供試品大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為0.81%和0.75%。結果表明大黃素和大黃酚至少在4小時內穩定。

2.8 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的大黃素和大黃酚對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量，計算回收率。6次測定的平均回收率分別為99.6%和99.7%，RSD分別為0.73%和0.66%。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定黃連上清膠囊中大黃素和大黃酚的含量，結果結果三批樣品的大黃素和大黃酚的總含量分別為1.52mg/粒、1.59mg/粒、1.56mg/粒。

3 討論

分別考察0.067moloL-1磷酸二氫銨溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），乙腈-0.05%磷酸二氫鈉-三乙胺-磷酸（50：50：0.01：0.01），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶10∶15），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20），甲醇-乙腈-pH6.5磷酸鹽緩沖液（20∶20∶60），甲醇-0.08%磷酸溶液（25：75），0.2mol/L的乙酸-甲醇（80：20），甲醇-0.1%磷酸（70∶30），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01）為流動相，結果以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動相。

參考文獻

[1]簡暉，魏惠珍，杜艷龍，張紅紅，龔盈盈，楊世林，饒毅.RP-HPLC法測定清脂六通丸中大黃素和大黃酚的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2009（01）.

[2]喬立業，方李，曹燕麗，陸崟，蘇華，王曙東.高效液相色譜法測定新保腎片中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量[J].藥學實踐雜志，2015（05）.

[3]裴勇.HPLC法測定消炎止痛洗劑中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的含量[J].中醫研究，2011（05）.

[4]潘麗麗，李亭亭，楊頌，郝變，袁少雄，許曉嘉，徐新房，李向日.HPLC法同時測定牛黃解毒片中黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃素、大黃素的含量[J].中醫藥學報，2015（01）.

[5]郝乘儀，馮波，郭淑英，朱鶴云，張慧鋒.黃連上清片中9種成分的HPLC波長切換法測定[J].中國醫藥工業雜志，2015（09）.endprint