海南黑毛和牛發情周期中生殖激素分泌規律研究

謝有志 ，華蕊 ，劉仙喜 ，楊慧 ，吳科榜

（1.海南省畜牧技術推廣總站，海南 海口 570203；2.海南大學，海南 海口 570228）

海南黑毛和牛發情周期中生殖激素分泌規律研究

謝有志1，華蕊2，劉仙喜1，楊慧2，吳科榜2

（1.海南省畜牧技術推廣總站，海南 海口 570203；2.海南大學，海南 海口 570228）

本試驗以發情期、妊娠期、休情期的海南黑毛和牛母牛為試驗動物，采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA 法）測定其血清中促卵泡素（FSH）、促黃體素（LH）、雌二醇（E2）、催乳素（PRL）和孕酮（P4）的含量，對這些生殖激素的分泌規律進行研究。結果表明：FSH與LH分泌趨勢基本一致，從發情期到妊娠期再到休情期呈現逐漸下降趨勢；E2在進入妊娠期后分泌量顯著減少，休情期時變化不大；PRL在妊娠期的分泌水平顯著高于非妊娠期（P＜0.05）；P4的分泌水平從發情期到妊娠期顯著上升（P＜0.05），進入休情期逐漸下降。

海南黑毛和牛；生殖激素；分泌規律

海南和牛又稱海南黑毛和牛，是海南省引進日本純種和牛胚胎以海南本地黃牛（雷瓊牛）為母體進行胚胎移植得到的和牛品種，是優良的地方肉牛品種[1]。生殖激素對海南黑毛和牛的繁殖育種起著重要作用。促卵泡素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）、催乳素（PRL）、孕酮（P4）等激素之間互相協調，影響著生殖細胞的發生、發育、釋放和發情的周期性變化[2]。本試驗以發情期、妊娠期、休情期的海南黑毛和牛母牛為試驗對象，采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA法）對其血清中的生殖激素水平進行測定與分析，研究整個發情周期中5種生殖激素的分泌規律。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 FSH、LH、PRL、E2、P4 5種激素的ELISA檢測試劑盒，購自蘇州卡爾文生物科技有限公司。

1.1.2 主要儀器 離心機，恒溫培養箱，酶標儀。

1.1.3 試驗母牛 由海南畜牧技術推廣總站海南肉牛品種改良示范基地提供，選取體態健康、發育良好的海南黑毛和牛30頭，其中處于發情期、妊娠期、休情期的各10頭。

1.2 方法

1.2.1 血清制備 對試驗母牛進行頸靜脈采血，將全血樣品靜置2h，期間防止劇烈震動以防溶血。待全血凝固并析出血清后，用離心機5000r/min離心10min，取上清液，標記并分裝，置于-20℃冰箱保存待用。

1.2.2 血清中FSH、LH、PRL、E2、P4的測定 采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）進行測定，具體操作詳見試劑盒說明書。根據酶標儀得到休情期、發情期、妊娠期的 PRL、FSH、LH、E2、P4 所對應的OD450值，繪制標準曲線，并按曲線方程計算各樣本濃度值。

1.3 數據分析 采用SPSS 16.0軟件ANOVA法對試驗數據進行統計分析，試驗數據以“平均值±標準誤（SEM）”表示，組間差異顯著性檢驗用Duncan法進行多重比較。

2 結果與分析

海南黑毛和牛發情周期中5種不同生殖激素的分泌水平列于表1。

2.1 血清中FSH分泌水平的變化 根據圖1可知，試驗母牛血清中FSH分泌水平在發情期最高，達到5.19IU/L；配種成功后進入妊娠期，FSH的分泌水平逐漸下降至4.12IU/L，休情期血清中FSH的含量為3.74IU/L。發情期母牛血清中的FSH分泌水平顯著高于休情期（P＜0.05），妊娠期母牛血清中的FSH含量與休情期、發情期比較無顯著差異（P＞0.05）。

表1 海南黑毛和牛血清中不同生殖激素分泌水平

圖1 血清中FSH分泌水平的變化

2.2 血清中LH分泌水平的變化 由圖2可知，試驗母牛整個發情周期中LH的分泌水平呈下降趨勢，發情期血清中的LH分泌水平最高，為4.71mIU/mL；妊娠期和休情期血清中的LH含量分別為4.53、4.17mIU/mL；三個時期兩兩比較，LH分泌水平無顯著差異（P＞0.05）。

圖2 血清中LH分泌水平的變化

圖3 血清中E2分泌水平的變化

2.3 血清中E2分泌水平的變化 如圖3所示，發情期血清中E2的分泌水平顯著高于休情期和妊娠期（P＜0.05），達到 50.21 pg/mL；進入妊娠期后 E2含量顯著下降至 41.99 pg/mL（P＜0.05）；休情期母牛血清中E2的含量變化不大，為41.29pg/mL。

圖4 血清中PRL分泌水平的變化

2.4 血清中PRL分泌水平的變化 由圖4可以看出，試驗母牛發情期血清中的PRL含量為415.70ng/mL；配種成功進入妊娠期后，血清中的PRL分泌水平急劇上升至538.30ng/mL，顯著高于休情期和發情期（P＜0.05）；休情期 PRL含量下降至459.70ng/mL。

2.5 血清中P4分泌水平的變化 根據圖5可知，發情期母牛血清中的P4含量最低，進入妊娠期后母牛血清中的P4含量從0.28ng/mL顯著升高至9.49ng/mL（P＜0.05）；休情期P4分泌水平下降為5.51ng/mL。

圖5 血清中P4分泌水平的變化

3 討論

3.1 發情周期中血清FSH和LH分泌水平的變化 促卵泡素（FSH）又叫卵泡刺激素，促黃體素（LH）又叫黃體生成素，二者都是由垂體的嗜堿性細胞合成并分泌的糖蛋白激素。FSH主要促進卵巢發育、提升卵巢質量，促使卵泡顆粒細胞的增加和卵泡液的產生。LH的主要作用是誘導排卵，促進黃體生成。由表1可以看出，母牛血清中的FSH含量從發情期到妊娠期下降，進入休情期后持續下降。這一趨勢與李成嬌等[3]的研究結果一致。但本試驗中發情期母牛血清中的LH含量與休情期、妊娠期的差異不顯著，可能是因為飼養水平和營養狀況影響了激素的分泌水平，還有可能是由于卵巢分泌E2和P4對FSH和LH進行負反饋調節造成的。

3.2 發情周期中血清E2分泌水平的變化 雌激素主要成分為雌二醇，由卵巢的卵泡細胞分泌。主要功能是促進雌性動物附性器官成熟及第二性征出現，維持發情周期的變化和生殖活動[4]。本研究中，試驗母牛從發情期到妊娠期血清中的E2含量顯著下降，進入休情期后E2含量變化不大。進入妊娠期后，卵巢生理活動減少引起雌二醇分泌水平下降。

3.3 發情周期中血清PRL分泌水平的變化 催乳素是由垂體前葉的催乳細胞合成分泌的蛋白質激素，除此之外，胎盤、淋巴細胞、皮膚也可分泌少量[5]。主要作用是促進乳腺發育生長，刺激并維持泌乳，還有刺激卵泡LH受體生成等作用。由表1可看出，海南黑毛和牛妊娠期的PRL濃度顯著高于非妊娠期，與文獻報道的相符[6]。

3.4 發情周期中血清P4分泌水平的變化 孕酮主要由黃體、胎盤及腎上腺皮質合成并分泌。它有利于受精卵著床還可以協同催乳素作用于乳腺導管系統，刺激乳腺發育。本試驗中，發情期母牛血清中的P4含量最低，進入妊娠期后母牛血清中的P4含量顯著升高，休情期的P4分泌水平又下降。

4 小結

本試驗探明了海南黑毛和牛發情周期中生殖激素的分泌規律：FSH與LH分泌趨勢基本一致，從發情期到妊娠期再到休情期呈現持續下降趨勢；E2在妊娠期的分泌量顯著減少，休情期時變化不大；PRL在妊娠期的分泌水平顯著高于非妊娠期；P4的分泌水平從發情期到妊娠期顯著上升，進入休情期逐漸下降。

[1] 劉圈煒，孫瑞萍，魏立民，等.維生素A對海南和牛抗氧化指標及血液生化指標的影響[J].中國畜牧獸醫，2012，39（9）：110-113.

[2] 宋先忱，張興會，趙艷嬌.生殖激素在絨山羊繁殖方面的應用[J].黑龍江動物繁殖，2011，19（4）：37-39.

[3] 李成嬌，王宏娟，朱曉玲.吉林地方特色肉牛發情周期內生殖激素變化規律研究[J].安徽農業科學，2010（17）：9018-9020.

[4] 謝炳坤.廣西黃牛和水牛發情周期血清生殖激素變化規律的研究[D].南寧：廣西大學，2005.

[5] 徐文軍.河西絨山羊血清中PRL和T3濃度季節變化與絨生長的相關分析[D].蘭州：甘肅農業大學，2008.

[6] 唐金鳳，朱鋐達，郁忠勤，等.妊娠期雌二醇和催乳素與瘦素的關系[J].上海第二醫科大學學報，2001，21（1）：44-46.

Study the Secretion Law of Reproductive Hormones on Hainan Black Wagyu

Xie Youzhi1，Hua Rui2，liu Xianxi2，et al.
（1.Livestock Technology Extension Station of Hainan Province Hainan Haikou 570203；2.Hainan University，Hainan Haikou 570228，China）

In this study，Hainan black wagyu were used as experimental animals which during the estrus，pregnancy and leisure period，and the secretions of follicle-stimulating hormone（FSH），luteinizing hormone（LH），estradiol（E2），prolactin（PRL） and progesterone（P4） were measured by enzyme linked im munosorbent assay（ELISA）.The results showed that the secretions of FSH and LH from estrus to pregnancy and then to the leisure period had a gradual downward trend，their secretion trends were the same basically.E2 decreased significantly after entering the pregnancy period and had a little change during the leisure period（P＜0.05）.The secretion level of PRL during pregnancy was significantly higher than that of nonpregnancy（P＜0.05）.The secretion level of P4 increased significantly from estrus to pregnancy，and gradually decreased during the leisure period（P＜0.05）.

Hainan black wagyu；Reproductive hormones；Secretion law

S814.1

B

1001-8964（2017）12-0032-03

2017-08-10

謝有志（1968-），男，碩士，高級畜牧師，主要研究海南黑毛和牛的生長與繁殖。