2016年成都市豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測與分析

李俐睿，李敏，周瀟瀟，李桂黎，肖金鵬，岳建國

（四川省成都市動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

2016年成都市豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測與分析

李俐睿，李敏，周瀟瀟，李桂黎，肖金鵬，岳建國

（四川省成都市動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

為評估成都市豬群中O型口蹄疫的免疫效果，從成都地區(qū)采集2005份豬血清樣品用ELISA方法進行O型口蹄疫病毒免疫抗體檢測。結(jié)果顯示：規(guī)模化豬場、散養(yǎng)戶和屠宰場受檢樣品的免疫抗體合格率分別為 85.25%（422/495）、81.80%（499/610）和 83.44%（751/900），免疫抗體平均合格率為 83.39%（1672/2005），其中規(guī)模化豬場的免疫抗體合格率稍高于散養(yǎng)戶。

O型口蹄疫；免疫抗體；監(jiān)測

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的動物急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要感染牛、豬等偶蹄類動物，臨床典型特征為口舌黏膜、皮膚、蹄部形成糜爛、潰瘍病灶。該病對養(yǎng)殖業(yè)的危害極大，曾被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類傳染病之首[1]，我國將其列為一類疫病，是強制免疫病種。

為有效做好該病的防疫工作，成都市于每年2月和8月給管轄的15個區(qū)（市）縣發(fā)放豬O型口蹄疫疫苗，進行春秋兩季集中免疫，為跟蹤了解免疫效果，我們分別在2016年5月和11月對所有發(fā)放該疫苗的區(qū)（市）縣的部分規(guī)模化養(yǎng)豬場、散養(yǎng)戶和屠宰場的豬只進行血清樣品采集和O型口蹄疫病毒免疫抗體水平監(jiān)測。現(xiàn)報告如下：

1 材料

1.1 檢測試劑 武漢科前生物股份有限公司豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒，批號：160403。

1.2 樣品 血清樣品采集自成都市管轄的15個區(qū)（市）縣的規(guī)模化豬場、散養(yǎng)戶和屠宰場，共計2005份。

2 方法

2.1 準(zhǔn)備

2.1.1 使用前將所有試劑平衡至室溫。

2.1.2 樣品、對照血清和洗滌液的稀釋 樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶32的體積稀釋待檢血清樣品（155μL樣品稀釋液中加入5μL待檢血清樣品）。

對照血清稀釋：在血清稀釋板中按1∶4分別稀釋陽性對照和陰性對照（180μL樣品稀釋液中加入60μL對照血清）。

洗滌液稀釋：搖勻洗滌液后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

2.2 檢測步驟

2.2.1 取抗原包被板，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置3min倒掉液體，并在吸水紙上拍干，共計洗板2次。再分別將稀釋好的待檢血清和對照血清各100 μL加入到抗原包被板孔中，待檢樣品設(shè)1孔，陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔，輕輕振勻孔中樣品，置37℃溫育30min。

2.2.2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置3min倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。

2.2.3 每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μL，置37℃溫育30min。

2.2.4 洗滌5次，方法同2.2.2。

2.2.5 每孔先加底物液 A 50 μL，再加底物液B 50μL，混勻，室溫（18～25℃）避光顯色 10min。

2.2.6 每孔加終止液50μL，10min內(nèi)測定結(jié)果。

2.3 檢測結(jié)果判定 在酶標(biāo)儀上測各孔的OD630nm值。試驗成立的條件為陽性對照平均OD630nm值與陰性對照平均OD630nm值之差小于0.5。

3 結(jié)果

2016年全年共檢測免疫豬O型口蹄疫血清2005份，其中合格1672份，平均合格率為83.39%。春季防疫檢測平均合格率為82.87%，秋季防疫檢測平均合格率為83.88%。詳見表1。

表1 2016年成都市豬O型口蹄疫免疫抗體檢測結(jié)果份

3.1 規(guī)模場檢測結(jié)果 在495份規(guī)模場豬血清中，合格422份，平均合格率為85.25%。春季防疫檢測平均合格率為84.00%，秋季防疫檢測平均合格率為86.30%。

3.2 散養(yǎng)戶檢測結(jié)果 在610份散養(yǎng)戶豬血清中，合格499份，平均合格率為81.80%。春季防疫檢測平均合格率為81.00%，秋季防疫檢測平均合格率為82.58%。

3.3 屠宰場檢測結(jié)果 在900份屠宰場豬血清中，合格751份，平均合格率為83.44%。春季防疫檢測平均合格率為83.56%，秋季防疫檢測平均合格率為83.33%。

4 分析與結(jié)論

4.1 口蹄疫O型為全世界流行最廣的一個血清型，且無有效的治療方法，接種疫苗是阻止該病發(fā)生、阻斷疫病流行和潛伏感染最有效的手段。如何進行科學(xué)免疫是目前防控該病的重點，而影響免疫效果的因素很多，疫苗運輸和存放的環(huán)境溫度是否正確，接種疫苗操作是否規(guī)范，制定的免疫程序是否合理等都會影響免疫效果。為評估成都市春防和秋防后O型口蹄疫病毒免疫的效果，對2005份不同來源的豬血清樣品進行了O型口蹄疫病毒抗體檢測，其中檢出陽性1672份，平均免疫合格率為83.39%，達到了O型口蹄疫免疫抗體平均合格率應(yīng)在70%以上的標(biāo)準(zhǔn)，符合農(nóng)業(yè)部的規(guī)定。表明成都市在春秋防疫工作中對豬O型口蹄疫的強制免疫工作基本達到了預(yù)期效果。從表1還可以看出，規(guī)模場的免疫效果明顯好于散養(yǎng)戶，這可能與規(guī)模場的規(guī)范化養(yǎng)殖，嚴(yán)格的免疫程序以及較高的免疫操作水平等有關(guān)。

4.2 對于重點防疫地區(qū)，要重視加強免疫的作用。加強免疫后抗體上升幅度大，抗體持久穩(wěn)定[2]。有研究表明，仔豬通過母乳獲得保護性抗體，但母源抗體隨日齡的增加而逐漸衰減[3]。仔豬進行口蹄疫免疫的首免時間在30日齡左右，但周瑩等[4]補充指出，散養(yǎng)戶仔豬首免可在30日齡左右，而規(guī)模化豬場的最佳首免時間在45～50日齡。家畜免疫后一般15d開始產(chǎn)生抗體，一個月后的抗體水平到最高值，但高水平抗體效價維持時間較短，很難達到半年的保護期，加強免疫能有效提高保護率，延長免疫的持續(xù)期[5]。在規(guī)模化養(yǎng)殖中，尤其要重視對種豬的免疫。種豬免疫后其后代產(chǎn)生免疫抗體較快，免疫水平也較高；未經(jīng)免疫或免疫不規(guī)范的母豬所產(chǎn)仔豬則反之[6]。

4.3 需要注意的是，本次監(jiān)測的2005份豬血清樣品中，抗體陽性率雖然都在80%以上，但是尚未出現(xiàn)達100%免疫合格率的豬群。鑒于口蹄疫病毒高度接觸性傳染的性質(zhì)和巨大危害，仍需要認真分析防疫過程中出現(xiàn)的各種問題，重視和加強口蹄疫的免疫接種工作，切實根據(jù)《2017年國家動物疫病強制免疫計劃》文件要求做好強制免疫工作，動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)還要依法對不履行強制免疫義務(wù)的養(yǎng)殖單位和個人進行處置。同時定期培訓(xùn)區(qū)（市）縣的基層防疫員，讓他們了解最新的國際和國內(nèi)動物疫病流行態(tài)勢，學(xué)習(xí)最新最科學(xué)的免疫程序，宣傳推廣口蹄疫防疫知識，最終提升免疫抗體合格水平。■

[1] OIE.Manual of standards for diagnostic tests and vaccines[Z].4th Edition，2000.

[2] 寧華杰，周瑩，柳斌，等.長沙市豬口蹄疫O型滅活疫苗免疫生豬后抗體消長規(guī)律及免疫程序的研究[J].中國動物檢疫，2009，26（10）：58-59.

[3] 謝琴，李元剛，張明林，等.寧夏某規(guī)模化豬場豬瘟、口蹄疫抗體水平監(jiān)測和免疫效果分析[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2005，185（6）：8-10.

[4] 周瑩，王輝，王蘭平，等.仔豬O型口蹄疫母源抗體消長試驗[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（7）：2770-2771.

[5] 孟國慶，王薇，張繼紅，等.口蹄疫加強免疫在實際工作中的重要性[J].疫病防治，2009，26（3）：57.

[6] 金大春，王躍川，季旭仁，等.豬口蹄疫免疫程序和抗體水平研究生產(chǎn)管理[J].畜禽業(yè)，2003，30（8）：30-31.

Monitoring and Analysis of Immune Antibodies on Foot and Mouth Disease Type O of Pigs in Chengdu in 2016

Li Lirui，Li min，Zhou Xiaoxiao，et al.

（Animal Disease Prevention and Control Center of Chengdu City，Sichuan Chengdu 610041，China）

This experiment was to evaluate the immune effect of foot and mouth disease type O of pigs by ELISA method in Chengdu.2005 samples were collected from large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses.The results showed that the immune antibody qualified rate of large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses were 85.25%（422/495），81.80%（499/610）and 83.44%（751/900），respectively，the average immune antibody qualified rate was 83.39%（1 672/2 005），and the large-scale pig farms,immune antibody qualified rate was slightly higher than that of the scatter-feed households.

Foot and mouth disease type O；Immune antibody；Monitoring

S851.313

B

1001-8964（2017）12-0027-03

2017-08-30

李俐睿（1986-）女，四川成都人，獸醫(yī)師，碩士，現(xiàn)在成都市動物疫病預(yù)防控制中心從事實驗室檢測工作。