15—LOX—1 對LPS作用下肺動脈內皮細胞增殖和炎性因子的影響

劉曄+邢文婧+李思佳

[摘要] 目的 探討下調15-脂氧酶-1（15-LOX-1）對脂多糖（LPS）作用下肺動脈內皮細胞（PAECs）和炎性因子分泌的影響。 方法 體外培養PAECs，并隨機分為4組：對照組、LPS組、15-LOX-1 siRNA對照組（scramble組）和15-LOX-1 siRNA組。采用Real-time PCR檢測15-LOX-1表達，MTT法檢測PAECs增殖變化，ELISA法檢測產物13-HODE以及炎性因子白細胞介素1α（IL-1α）和白細胞介素6（IL-6）的變化。 結果 與LPS組比較，15-LOX-1 siRNA組15-LOX-1 mRNA表達降低，PAECs增殖增多，13-HODE、IL-1α和IL-6分泌減少，差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 下調15-LOX-1可抑制炎性因子分泌，促進PAEC增殖，改善LPS對內皮的損傷。

[關鍵詞] 肺動脈內皮細胞；15-脂氧酶-1；脂多糖；炎性因子

[中圖分類號] R563.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）11（a）-0024-03

The effect of 15-LOX-1 on proliferation of pulmonary arterial endothelial cells and inflammatory cytokines by LPS

LIU Ye XING Wenjing LI Sijia

Department of Immunology， Harbin Medical University， Heilongjiang Province， Harbin 150081， China

[Abstract] Objective To explore the effect of 15-LOX-1 on proliferation of pulmonary arterial endothelial cells （PAECs） and inflammatory cytokines by LPS. Methods PAECs were cultured in vitro， and divided into 4 groups， including control group， LPS group， 15-LOX-1 siRNA scramble group （scramble group） and 15-LOX-1 siRNA group. The expression of 15-LOX-1 mRNA was detected by Real-time PCR. The proliferation of PAECs was examined by MTT. The expressions of 13-HODE， IL-1α and IL-6 were detected by ELISA. Results In the 15-LOX-1 siRNA group， the expression of 15-LOX-1 mRNA was reduced， the proliferation of PAECs was increased， and the secretions of 13-HODE， IL-1α and IL-6 were reduced compared with the LPS group with statistically significant difference （P < 0.05）Conclusion Down-regulation of 15-LOX-1 can inhibit inflammatory cytokines， regulate PAECs proliferation， and improve endothelial injury induced by LPS.

[Key words] Pulmonary arterial endothelial cells； 15-lipoxygenase-1； Lipopolysaccheride； Inflammatory cytokines

肺炎是臨床上常見病、多發病，如不能及時治療，可導致呼吸衰竭、肺心病等，甚至死亡[1-2]。細菌脂多糖（Lipopolysaccheride，LPS）是細菌內毒素的主要成分，可參與誘導細胞損傷，加重炎癥[3-4]。研究表明15-脂氧酶-1（15-LOX-1）可參與調控炎性反應[5-6]。本研究通過體外實驗探討下調15-LOX-1對LPS作用下肺動脈內皮細胞（PAECs）和炎性因子分泌的影響，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取10只健康雄性Wistar大鼠，月齡2個月，SPF級，體重（250±20）g，購于哈爾濱醫科大學附屬二院實驗動物中心（合格證號：20150921）。

1.2 材料和儀器

白細胞介素1α（IL-1α）、白細胞介素6（IL-6）和13-HODE ELISA試劑盒分別購自美國R&D公司和Enzolife公司。RNA提取試劑盒、反轉錄試劑盒購自美國invitrogen公司。細胞培養試劑購自美國Hyclone公司。siRNA引物由美國QIAGEN公司合成。siRNA沉默構建試劑盒購自美國Amaxa Biosystems technology公司。

1.3 方法

1.3.1 PAECs培養和分組 0.25%胰蛋白酶消化Wistar大鼠肺動脈內皮細胞層，收集PAECs體外培養并隨機分為4組：正常對照組、LPS組、15-LOX-1 siRNA對照組（scramble組）、15-LOX-1 siRNA組。其中，LPS組加入10 μmol/L LPS刺激培養48 h；scramble組在LPS組基礎上，轉染siRNA陰性對照于細胞中作用48 h；15-LOX-1 siRNA組在LPS組基礎上，轉染15-LOX-1 siRNA于細胞中作用48 h。endprint