谷胱甘肽肌膚凝膠劑對大鼠皮膚淺Ⅱ度燙傷創面愈合的實驗研究

王清+陶繼善+朱萱萱+張迪+楊晨+符蕊

[摘要] 目的 觀察谷胱甘肽肌膚凝膠劑對大鼠皮膚淺Ⅱ度燙傷創面愈合的作用。 方法 選取60只雄性SD大鼠，分為正常組、模型組、生長因子組、康復新組、谷胱甘肽肌膚凝膠劑低劑量組和高劑量組，每組各10只。采用75℃熱水浸燙脫毛區（3 cm×3 cm）25 s，成功建立大鼠淺Ⅱ度燙傷模型。應用谷胱甘肽肌膚凝膠劑涂抹燙傷創面，并以生長因子組和康復新組為對照，給藥量為1 mL/只，每天涂藥2次，連續給藥16 d，涂藥后創面不加覆蓋，逐日觀察創面感染愈合情況及動物全身情況（體征表現和創面結痂、愈合情況），連續觀察20 d。 結果 谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組對淺Ⅱ度燙傷模型大鼠可縮短創面脫痂時間和愈合時間，縮小愈合面積，與模型組比較差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01）。病理組織學檢查結果表明：模型組可見創面結痂，痂皮內為較多的炎性滲出物，痂皮下肉芽組織已經再生修復，創緣周圍開始有少量上皮再生，并逐漸開始覆蓋創面；與模型組相比，各組均有促進創面愈合的作用，炎性滲出物減少，肉芽組織更加成熟，上皮再生較為明顯，谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量作用與重組人堿性成纖維細胞生長因子相當。 結論 谷胱甘肽肌膚凝膠劑對淺Ⅱ度燙傷具有較好地促進創面愈合的作用。

[關鍵詞] 谷胱甘肽肌膚凝膠劑；淺Ⅱ度燙傷模型；病理組織學；創面結痂；愈合情況

[中圖分類號] R644 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）11（a）-0009-06

Experiment study of healing effects of glutathione skin gel on superficial second-degree burn wounds in rats

WANG Qing1 TAO Jishan2 ZHU Xuanxuan1 ZHANG Di1 YANG Chen1 FU Rui1

1.Pharmacological Room， Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210029， China； 2.Chengdu Zhuoyang Biotechnology Co.， Ltd.， Sichuan Province， Chengdu 611500， China

[Abstract] Objective To observe the effects of glutathione skin gel on wound healing of superficial second-degree burn in rats. Methods 60 SPF male SD rats were divided into normal group， model group， growth factor group， Kangfuxin group， low-dose and high-dose glutathione skin gel groups， each group had 10 rats. The superficial second-degree burn model was successfully established by scalding the hair-removed area （3 cm × 3 cm） of rats with 75℃ water bath for 25 s. The rats were subjected to application of glutathione skin gel on wound without coverage （1 mL， bid） for 16 days， and recombinant human basic fibroblast growth factor and Kangfuxin were used as control. The wound healing process and whole body conditions of animals （physical signs and scabs formation） were observed daily for 20 days. Results Compared with the model group， treatment of high-dose glutathione skin gel shortened the time of wound healing and getting rid of scabs， reduced healing area in superficial second-degree burn model of rats （P < 0.05 and P < 0.01）. Histopathological examination results showed that the wound scab was visible in model group， but with excessive inflammatory exudate. Granulation tissue had been repaired and regenerated under the scabs， and small quantities of epithelia had been regenerated around the wound edge， covering the wound gradually. Compared with the model group， all other groups promoted wound healing and decreased inflammatory exudates. And regeneration of the granulation tissue and epithelia were more obvious and significant in these groups. High-dose glutathione skin gel group and growth factor group had comparable effects on the wound healing. Conclusion Glutathione skin gel significantly promotes wound healing of superficial second-degree burn in rats.endprint

[Key words] Glutathione skin gel； Superficial second-degree burn model； Pathological histology； Wound scab； Wound healing

谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸構成的三肽，在體內起重要作用的是還原型谷胱甘肽。還原型谷胱甘肽是細胞內主要的非蛋白質巰基化合物，在許多生命活動中起著直接或間接的作用，包括基因表達調控、酶活性和代謝調節、對細胞的保護、氨基酸轉運、免疫功能調節等。還原型谷胱甘肽在多學科、多病種中作為一種重要的治療或輔助治療藥物[1-2]。近年來發現，谷胱甘肽除具有以上作用外還具有祛斑、護膚和促進皮膚創面愈合的作用[3-4]。為了驗證谷胱甘肽促進皮膚創面愈合作用，本研究建立了動物淺Ⅱ度燙傷模型，應用谷胱甘肽肌膚凝膠劑涂抹燙傷創面，以觀察其促進皮膚創面愈合作用，現報道如下；

1 材料與方法

1.1 實驗材料

動物：SD大鼠60只，雄性，體重180～200 g，由南通大學實驗動物中心提供，合格證號：scxk（蘇）2014-0001。

儀器：恒溫水浴鍋HH-2，國華電器有限公司；剃毛器，松下電工萬寶電器（廣州）有限公司；秒表，上海秒表廠。

藥物：谷胱甘肽肌膚凝膠劑，美國中央配方制藥公司，批號：20AEGBE，由水、谷胱甘肽、維生素C、葡萄糖和苯扎氯銨組成。空白基質，美國中央配方制藥公司，批號：20AEAABB，由水、維生素C、葡萄糖和苯扎氯銨組成。重組人堿性成纖維細胞生長因子，南海朗肽制藥有限公司，批號：1503004。康復新，四川好醫生攀西藥業有限公司，批號：160181。水合氯醛，上海五連化工廠，批號：20150315。

1.2 方法

1.2.1 淺Ⅱ度燙傷模型建立[1-2] 實驗前每只大鼠背部用剃毛器剃毛，面積為3 cm×3 cm，腹腔注射10%水合氯醛3 mL/kg。麻醉后，背部放置一小木板（中間開洞），暴露脫毛區。取50只大鼠，用一薄小塑料袋裝75℃熱水，放在大鼠脫毛區上，用熱水浸燙脫毛區25 s，造成淺Ⅱ度燙傷。另10只大鼠為正常組，不做燙傷處理。

1.2.2 試驗分組 將淺Ⅱ度燙傷大鼠分成5組，每組各10只，分別為模型組、重組人堿性成纖維細胞生長因子組（生長因子組）、康復新組、谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組、谷胱甘肽肌膚凝膠劑低劑量組，給予相應藥物1 mL/只，每天涂藥2次，模型組大鼠給予生理鹽水溶液1 mL/只。連續給藥16 d，涂藥后創面不加覆蓋，逐日觀察創面感染愈合情況及動物全身情況（體征表現和創面結痂、愈合情況），連續觀察（創面感染愈合情況及動物全身情況）20 d后，全部脫頸椎處死，取燙傷部位，用10%甲醛溶液固定，觀察大鼠燙傷部位病理組織學變化情況。

1.2.3 大鼠燙傷部位病理組織學變化評價 根據炎性滲出物、肉芽組織再生及上皮再生情況進行評分，由東南大學病理教研室完成。評分標準[5-6]如下：①炎性滲出物，1～3分：少許壞死組織+少量纖維素滲出+少許炎癥細胞浸潤；4～6分：較多壞死組織+較多纖維素滲出+較多炎癥細胞浸潤；7～9分：大量壞死組織+大量纖維素滲出+大量炎癥細胞浸潤。②肉芽組織再生，1～3分：僅少許細胞浸潤，無肉芽組織形成；4～6分：薄、不成熟肉芽組織，以少量新生毛細血管、纖維母細胞及炎細胞浸潤為主；7～9分：中等程度再生的肉芽組織，更多的新生毛細血管形成，較多的纖維母細胞出現伴有炎癥細胞浸潤，有膠原纖維沉積；10～12分：厚、血管化的肉芽組織，纖維細胞增多，膠原纖維沉積明顯，向瘢痕組織轉化。③上皮再生修復，1分：少許上皮再生覆蓋創面；2分：較多上皮再生覆蓋創面；3分：創面全部被上皮再生覆蓋。

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠淺Ⅱ度燙傷造模后觀察

淺Ⅱ度燙傷大鼠造模后，局部皮膚發白，水腫不明顯。見圖1。

2.2 給藥后大鼠體征表現

2.2.1 進食量 造模后淺Ⅱ度燙傷大鼠食欲不振，進食量減少，給藥物干預后各組進食量與模型組比較差異無統計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2.2 體重 造模后淺Ⅱ度燙傷大鼠體重減輕，給予藥物干預后各組大鼠體重略有增加，與模型組比較差異無統計學意義（P > 0.05）。自給藥第2周起模型組與正常組大鼠體重差異有高度統計學意義（P < 0.01）。見表2。

2.2.3 飲水量 造模后，淺Ⅱ度燙傷大鼠飲水量明顯減少；給予藥物干預后各組大鼠飲水量略有增加，與模型組比較差異無統計學意義（P > 0.05）。見表3。

2.3 造模后各組動物情況

2.3.1 模型組 淺Ⅱ度燙傷大鼠造模后，創面有感染，5～6 d后創面輕微結痂，18 d時仍有部分大鼠無愈合傾向。見圖2。

2.3.2 生長因子組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創面無感染、無膿苔現象；用藥5 d后，創面結痂；12 d后脫痂部分愈合，或留有小條狀瘢痕；16 d部分創面基本愈合，組織高度與正常皮膚一致。見圖3。

2.3.3 康復新組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創面無感染、無膿苔現象；用藥6 d后，創面結痂，13 d后創面脫痂，17 d后部分創面基本愈合，或留有小條狀瘢痕，愈合創面有鼠毛長出，組織高度與正常皮膚一致。見圖4。

2.3.4 谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創面無感染、無膿苔現象；用藥6 d后，創面結痂；13 d后創面脫痂；17 d后創面基本愈合，或留有小條狀瘢痕，愈合創面有鼠毛長出，組織高度與正常皮膚一致。見圖5。endprint

2.3.5 谷胱甘肽肌膚凝膠劑低劑量組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創面無感染、無膿苔現象；用藥6 d后，創面結痂，15 d后創面脫痂；18 d后創面基本愈合，組織高度與正常皮膚一致。見圖6。

2.4 谷胱甘肽肌膚凝膠劑對淺Ⅱ度燙傷大鼠創面脫痂時間和愈合時間的影響

與模型組比較，谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組可縮短淺Ⅱ度燙傷模型大鼠創面脫痂時間和愈合時間，縮小愈合面積，差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01）；生長因子組可縮短淺Ⅱ度燙傷模型大鼠創面脫痂時間和愈合時間，縮小愈合面積，差異有高度統計學意義（P < 0.01）。康復新組可縮短淺Ⅱ度燙傷模型大鼠創面脫痂時間和愈合時間，縮小愈合面積（P < 0.05或P < 0.01）。見表4。

2.5 病理組織學檢查結果

正常組大鼠皮膚結構清晰，被覆表皮完整，鱗狀上皮較薄，真皮內無充血炎癥細胞浸潤，附屬結構完整。模型組可見創面結痂，痂皮內為較多的炎性滲出物，痂皮下肉芽組織已經再生修復，創緣周圍開始有少量上皮再生，并逐漸開始覆蓋創面。與模型組相比，各治療組均有促進創面愈合的作用，炎性滲出物減少，肉芽組織更加成熟，上皮再生較為明顯，以谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組、康復新組和生長因子組較明顯。見圖7。

2.6 各組大鼠病理學檢查評分比較

與模型組相比，谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組和康復新組大鼠病理學檢查評分明顯降低，差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表5。

3 討論

皮膚是人體最大器官，每個人皮膚約有2 m2，每平方厘米皮膚有10～70個毛囊、200～250個汗腺。皮膚組成主要有表皮、真皮、皮下組織3層。表皮的最外層為角質層，是阻止外源性物質進入體內的屏障。角質層是由角質化細胞和分布其中的油脂構成。角質細胞內充滿一束束干燥僅含20%水份的脂蛋白。真皮層含豐富的結締組織和血管汗腺、毛發淋巴管、皮脂腺及神經等組織。最內層的皮膚便是皮下組織。皮膚創面愈合過程有4個主要步驟，凝血期、炎癥期、增生期、成熟期，愈合過程十分復雜，影響創面愈合的因素也很多[7]。

本研究采用75℃熱水浸燙動物脫毛區25 s，成功建立大鼠淺Ⅱ度燙傷模型。動物皮膚呈現局部紅腫，有水皰形成，內含黃色血漿樣液體，可見潮紅的創面，動物疼痛，體重減輕，進食量減少。應用谷胱甘肽肌膚凝膠劑對淺Ⅱ度燙傷模型大鼠的創面進行連續16 d治療后，對皮膚創面愈合過程的凝血期、炎癥期、增生期和成熟期都有較好的作用。研究顯示，谷胱甘肽肌膚凝膠劑可清除在皮膚炎癥期創面產生過量的活性氧[8]。在治療的過程中GSH涂于創面的作用為創面靶向補充，GSH可還原過氧化物及自由基后被氧化為谷胱甘肽二硫鍵GSSG。GSSG經由體內的谷胱甘肽還原酶（GR）及輔酶（NADPH）還原成GSH，循環使用[9]。GSH還可以協助被氧化而失去功能的維生素A、C及E，還原并循環使用。靶向補充GSH，通過活化T細胞、巨噬細胞，提升創面機體免疫力，縮短皮膚炎癥期并減少感染及水腫[10-20]。本研究結果也表明谷胱甘肽肌膚凝膠劑可縮短創面脫痂時間和愈合時間，縮小愈合面積，愈合后的皮膚與正常皮膚高度一致，未見瘢痕增生。病理檢查也提示谷胱甘肽肌膚凝膠劑具有促進創面愈合的作用，創面炎性滲出物減少，肉芽組織更加成熟。

本研究表明谷胱甘肽肌膚凝膠劑具有極強抗氧化能力，能靶向作用于燙傷皮膚部位。該產品采用特殊的包裹及透皮技術，保護了GSH的抗氧化活性，同時使皮膚能靶向高效吸收，在淺Ⅱ度動物燙傷模型上應用后取得了良好療效。另外，實驗中動物體癥未見異常，說明了谷胱甘肽肌膚凝膠劑安全，為臨床使用提供了實驗依據。

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（收稿日期：2017-04-24 本文編輯：程 銘）endprint