表皮葡萄球菌總RNA小量提取方法比較

許甘霏， 官 妍

(1. 安徽大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 合肥 230601； 2. 安徽中醫(yī)藥大學(xué) 中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院， 合肥 230038)

表皮葡萄球菌總RNA小量提取方法比較

許甘霏1， 官 妍2

(1. 安徽大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 合肥 230601； 2. 安徽中醫(yī)藥大學(xué) 中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院， 合肥 230038)

表皮葡萄球菌屬于革蘭氏陽性細(xì)菌，因細(xì)胞壁較厚、難破裂等特點(diǎn)致使其總RNA提取的難度增大，而總RNA提取效率和提取質(zhì)量等對(duì)分子生物學(xué)相關(guān)研究起著關(guān)鍵的作用。因此，以表皮葡萄球菌ATCC35984為實(shí)驗(yàn)菌株，分別使用Trizol裂解聯(lián)用研磨珠破碎法、單酶酶解法、雙酶酶解法、液氮研磨法等4種細(xì)胞壁破碎方法，對(duì)其總RNA進(jìn)行提取，對(duì)比提取效果，旨在尋找一種高效穩(wěn)定的總RNA提取方法。結(jié)果顯示，雙酶裂解法和液氮研磨法提取的表皮葡萄球菌總RNA完整性好、純度高、重復(fù)性好，可有效提高表皮葡萄球菌總RNA提取質(zhì)量。

表皮葡萄球菌；總RNA；提取方法

近年來，隨著人工瓣膜、關(guān)節(jié)置換、插管等醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用的增多，留置在患者體內(nèi)的生物材料感染逐漸成為這些技術(shù)引起的并發(fā)癥之一[1]。其中，由表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)引起的感染是臨床上最常見感染之一。表皮葡萄球菌是人體皮膚和黏膜的主要共生菌，是一種常見的條件致病菌，同時(shí)也是醫(yī)院交叉感染的重要來源[2]；其可在體內(nèi)黏附材料表面形成生物被膜，致使其對(duì)抗菌藥物不敏感，并最終導(dǎo)致表皮葡萄球菌在患者體內(nèi)難以清除[3]。因此，有關(guān)表皮葡萄球菌的基礎(chǔ)研究已引起科研工作者的足夠重視，而提取高質(zhì)量的表皮葡萄球菌總RNA，是進(jìn)行一系列后續(xù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)如實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析、cDNA文庫的合成、微陣列基因差異表達(dá)分析等的先決條件[4]。……