喹啉銅原藥高效液相色譜分析方法研究

梁永星 ，吳燕飛 ，鄧欣毅 ，藍宏彥 ，鄧明娟 ，鄧明學

（1.柳州市惠農(nóng)化工有限公司，廣西柳州 545616；2.廣西特色作物研究院，廣西桂林 541004）

喹啉銅原藥高效液相色譜分析方法研究

梁永星1，吳燕飛1，鄧欣毅1，藍宏彥1，鄧明娟1，鄧明學2*

（1.柳州市惠農(nóng)化工有限公司，廣西柳州 545616；2.廣西特色作物研究院，廣西桂林 541004）

探索喹啉銅原藥日常檢測可用的高效液相色譜法。以甲醇、冰乙酸和0.8%氯化鈉水溶液為流動相，使用ODS-2 C18色譜柱和紫外可變波長檢測器，在250 nm波長下對喹啉銅原藥進行分離和定量分析。該分析方法的線性相關系數(shù)為0.999 9，標準偏差為0.077 8，變異系數(shù)為0.08%，平均回收率為99.84%。該方法操作簡單、快捷，準確度和精密度均能達到定性和定量分析的要求。

喹啉銅；原藥；高效液相色譜；分析

喹啉銅（oxine-copper）為螯合態(tài)有機銅殺菌劑，對真菌、細菌性病害具有優(yōu)異的防治效果。其作用方式獨特，通過在作物表面形成致密保護膜，阻斷病菌與作物接觸，阻止病原菌侵染作物。喹啉銅還可以作用于病原菌內(nèi)部，抑制病原菌主要傳導物的活動和傳導，從而殺死病原菌[1]。

目前，報道的喹啉銅檢測方法有氣相色譜法、液相色譜法[1-4]。前者采用硫酸水溶液處理喹啉銅，使其完全分解成8-羥基喹啉和硫酸銅，用EDTA溶液絡合Cu2+，測定銅離子含量，再用二甲苯萃取8-羥基喹啉，用氣相色譜法測定8-羥基喹啉的含量，并換算出喹啉銅的含量[1]。此方法不僅費時、繁瑣，而且準確度易受到影響。后者用甲醇做溶劑，由于喹啉銅微溶于甲醇，實驗中一般稱取少量喹啉銅溶于大量甲醇，并經(jīng)過長時間加熱超聲使其充分溶解。然而，過小的稱樣量和過量稀釋試樣，不僅會對產(chǎn)品分析的準確度和精密度產(chǎn)生影響，還會造成試劑的浪費，增加分析成本。另外，過長的超聲提取時間也不能滿足快速分析的要求。

雖然喹啉銅不溶于水和一般有機溶劑，但較易溶于冰乙酸，在20倍冰乙酸中全溶。因此，以冰乙酸為助溶劑，選擇甲醇＋冰乙酸＋0.8%氯化鈉水溶液為流動相，并以流動相為稀釋劑對喹啉銅原藥進行定量分析。該方法操作簡單、快捷，分離效果好，準確度和精密度均能達到定性和定量分析的要求，且成本低。方法適用于企業(yè)開展常規(guī)含量檢測。

1 試驗部分

1.1 試劑和溶液

甲醇：色譜純；2次蒸餾水：2級水，電導率（25℃）≤0.10 mS/m；冰乙酸：分析純，已知質(zhì)量分數(shù)≥99.5%；氯化鈉：分析純，已知質(zhì)量分數(shù)≥99.5%；喹啉銅標樣：已知質(zhì)量分數(shù)98.2%，國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心提供；喹啉銅原藥，柳州市惠農(nóng)化工有限公司提供。

1.2 儀器

液相色譜儀：島津LC-20AT高效液相色譜儀，帶可變波長紫外檢測器；威瑪龍色譜工作站；色譜柱：WondaCract ODS-2 C18不銹鋼色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；過濾器：濾膜孔徑約0.45 μm。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：V（甲醇）∶V（冰乙酸）∶V（0.8%氯化鈉水溶液）=28∶2∶70；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：245 nm；進樣體積：20 μL。喹啉銅保留時間約為5.2 min。標樣和試樣的高效液相色譜圖分別見圖1、圖2。該操作條件是典型的色譜條件，可根據(jù)不同儀器和不同色譜柱進行適當?shù)恼{(diào)整，以獲得最佳分離效果。

圖1 標樣液相色譜圖

圖2 試樣液相色譜圖

1.4 標樣溶液的配制

稱取0.05 g喹啉銅標樣，精確至0.000 2 g，置于50 mL容量瓶中，用2 mL冰乙酸溶解后，再用流動相稀釋到刻度，超聲波振蕩5 min，冷卻至室溫。用移液管準確吸取該溶液1.0 mL于50 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm濾膜過濾，濾液備用。

1.5 試樣溶液的配制

稱取含喹啉銅0.05 g的試樣，精確至0.000 2 g，置于50 mL容量瓶中，用2 mL冰乙酸溶解后，再用流動相稀釋到刻度，超聲波振蕩5 min，冷卻至室溫。用移液管準確吸取該溶液1.0 mL于50 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm濾膜過濾，濾液待測。

1.6 測定

在上述色譜操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰2針的喹啉銅峰面積相對變化＜1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。用外標法計算其含量。

1.7 計算

將測得的2針試樣溶液及試樣前后2針標樣溶液中喹啉銅峰面積分別進行平均，試樣中喹啉銅質(zhì)量分數(shù)w（%）按下式計算。

式中：A1—標樣溶液中喹啉銅峰面積的平均值；A2—試樣溶液中喹啉銅峰面積的平均值；m1—標樣的質(zhì)量，g；m2—試樣的質(zhì)量，g；P—標樣中喹啉銅的質(zhì)量分數(shù)，%。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

通過島津LC-20AT高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得喹啉銅紫外波長掃描圖（圖3）。從圖中可以看出，喹啉銅最大吸收波長在252 nm處，在205 nm處也有較大吸收。為了盡量減少溶劑的干擾，將檢測波長定為250 nm。

圖3 喹啉銅紫外色譜圖

色譜柱選擇常規(guī)的WondaCract ODS-2 C18不銹鋼色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。依據(jù)喹啉銅理化性質(zhì)，用冰乙酸溶解，并用流動相稀釋樣品，以甲醇、冰乙酸和氯化鈉水溶液作為流動相。為了得到更好的分離效果和峰形，將流動相按不同比例在色譜柱上進行試驗，最終確定流動相甲醇＋冰乙酸＋0.8%氯化鈉水溶液的體積比28∶2∶70。在流速1.0 mL/min時，有效成分色譜峰峰形對稱，無雜質(zhì)峰干擾，基線平穩(wěn)，能在短時間得到分析結果，提高了工作效率。

2.2 分析方法線性相關性試驗

量取1.4中配制的標樣母液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL，分別置于5個50 mL容量瓶中，用流動相稀釋到刻度，搖勻過濾后待測。按1.3色譜操作條件分別進樣。以喹啉銅質(zhì)量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制線性相關曲線，如圖4。

圖4 喹啉銅線性關系圖

2.3 分析方法精密度試驗

分別稱取5個平行試樣（準確至0.000 2 g），按1.3色譜條件進行分析，計算喹啉銅的標準偏差和變異系數(shù)（表1）。

表1 分析方法精密度試驗結果

2.4 分析方法準確度試驗

稱取已知含量的樣品5份（0.050 8 g、0.051 3 g、0.049 7 g、0.050 3 g、0.049 2 g），精確至0.000 2 g，分別加入不同質(zhì)量的喹啉銅標樣，在1.3操作條件下進行分析。測得喹啉銅的平均回收率為99.84%，方法的準確度較高（表2）。

表2 分析方法準確度試驗結果

3 結論

試驗建立了高效液相色譜法檢測喹啉銅原藥中有效成分的質(zhì)量分數(shù)。試驗結果表明，本方法具有較高的準確度和精密度，線性關系良好，且簡便、快速，分離效果好，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應用研究中較為理想的分析方法。

[1]郭利豐,肖鳴,黃雅俊.33.5%喹啉銅懸浮劑的氣相色譜分析研究[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2011,10(5):38-40.

[2]周夢春,蔡磊明,趙凌宜,等.喹啉銅原藥高效液相色譜分析方法[J].農(nóng)藥,2008,47(12):891-892.

[3]李國平,單煒力,王國聯(lián).高效液相色譜法測定混劑中喹啉銅和噻菌靈[J].農(nóng)藥科學與管理,2005,26(9):38-40.

[4]章新,朱惠賢,王林,等.微柱高效液相色譜法測定Cu(HQ)2和HQ[J].云南民族大學學報:自然科學版,2005,14(2):123-124.

Analytical Method of Oxine-copper TC by HPLC

LIANG Yong-xing1,WU Yan-fei1,DENG Xin-yi1,LAN Hong-yan1,DENG Ming-juan1,DENG Ming-xue2*
(1.Liuzhou Huinong Chemical Co.,Ltd.,Guangxi Liuzhou 545616,China;2.Guangxi Academy of Specialty Crops,Guangxi Guilin 541004,China)

A method for separation and quantitative analysis of oxine-copper TC by HPLC was established.The oxine-copper TC was separated and determined using methanol,aceticacid and 0.8%sodium chloride aqueous solution as mobile phase,on ODS-2 C18column,with UV detector at 250 nm wavelength.The results showed that the linear correlation coefficient was 0.999 9,the standard deviation was 0.077 8,the variation coefficient was 0.08%,the average recovery was 99.84%.The method was simple,fast,and had high precision and accuracy.It was suitable for the analysis of oxine-copper TC.

oxine-copper;TC;HPLC;analysis

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.06.009

2017-06-28

廣西公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項（201504）

梁永星（1980—），男，廣西壯族自治區(qū)柳州市人，工程師，主要從事農(nóng)藥分析工作。E-mail：503768450@qq.com

鄧明學（1964—），男，廣西壯族自治區(qū)全州縣人，副研究員，主要從事柑橘病蟲害防治和農(nóng)藥應用技術研究。E-mail：dengmxgl@163.com

（責任編輯：顧林玲）