Foxp3基因多態性與妊娠期高血壓的相關性

謝文杰　陳晞明　易春　陳永權　伍金雷　崔樹春　宋代富　陳盛強　戴文軍

【摘要】 目的 通過對叉狀頭/翅膀狀螺旋轉錄因子3（Foxp3）多態性基因位點的序列分析， 探討Foxp3基因多態性分布及基因型變異對妊娠期高血壓（HDCP）發病的易感性， 以闡明其在DHCP發生中的分子機制。方法 選取186例妊娠期高血壓患者， 設為病例組；另選取同期251例本院住院的正常孕婦， 設為對照組。分析兩組Foxp3-6054、924位點的基因多態性與HDCP的相關性。結果 兩組研究對象年齡比較， 差異無統計學意義（P>0.05）， 兩組高血壓家族史、孕周、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）比較， 差異具有統計學意義（P<0.05）。Foxp3-924基因多態性檢測中兩組基因頻率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。病例組患者中T/T基因型及T等位基因頻率明顯少于對照組， 差異具有統計學意義（P<0.05）；病例組A/A基因型頻率明顯多于對照組， 差異具有統計學意義（P<0.05）。Logistic回歸分析提示AT+TT型可減少HDCP的發生風險（OR=0.367， 95%CI為0.218， 0.617， P<0.05）， 而聯合基因型AA+AT可增加罹患HDCP的風險（OR=2.518， 95%CI為1.654， 3.832， P<0.05）。結論 Foxp3-6054位點基因型及等位基因頻率在HDCP組與正常妊娠組間存在顯著性差異， Foxp3-6054位點多態性可能參與HDCP的發生， 而Foxp3-924基因多態性可能與HDCP無關。

【關鍵詞】 叉狀頭/翅膀狀螺旋轉錄因子3；妊娠期高血壓；基因多態性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.33.006

Correlation between Foxp3 gene polymorphism and hypertensive disorder complicating pregnancy XIE Wen-jie， CHEN Xi-ming， YI Chun， et al. Department of Internal Medicine-Cardiovascular， Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University， Guangzhou 510150， China

【Abstract】 Objective To investigate the distribution of forkhead / winged helix transcription factor 3 （Foxp3） gene polymorphism and the susceptibility of genotype variation to hypertensive disorder complicating pregnancy （HDCP） in order to clarify the molecular mechanism of pregnancy induced hypertension. Methods There were 186 patients with pregnancy induced hypertension as case group， and concurrent 251 normal pregnant women as control group. The correlation between gene polymorphism and HDCP of Foxp3-6054 and 924 loci and HDCP in two groups was analyzed. Results Both groups had no statistically significant difference in mean age （P>0.05）. Both groups had statistically significant difference in family history of hypertension， gestational age， systolic blood pressure （SBP）， diastolic blood pressure （DBP） （P<0.05）. Both groups had no statistically significant difference in gene frequency in Foxp3-924 gene polymorphism detection （P>0.05）. The case group had obviously less T/T genotype and T allele frequency than the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The case group had obviously more A / A genotype frequency than the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Logistic regression analysis suggested that AT + TT could reduce the risk of HDCP （OR=0.367， 95%CI as 0.218， 0.617， P<0.05）， and combined genotype AA + AT could increase the risk of developing HDCP （OR=2.518， 95%CI as 1.654， 3.832， P<0.05）. Conclusion Foxp3-6054 locus genotype and allele frequency were significantly different between HDCP group and normal pregnancy group. Foxp3-6054 polymorphism might be involved in the occurrence of HDCP， and Foxp3-924 gene polymorphism might be related to HDCP Irrelevant.endprint

【Key words】 Forkhead / winged helix transcription factor 3； Hypertensive disorder complicating pregnancy； Gene polymorphism

妊娠期高血壓（hypertensive disorder complicating pregnancy，

HDCP）是妊娠期特有的疾病， 其發病率高達5%～12%， 是孕產婦及新生兒高病死率的主要病因之一[1]， 嚴重影響母嬰健康， 主要表現為一過性血壓升高及蛋白尿等。妊娠是一種半同種異體移植現象， 妊娠的成功與否取決于母胎之間雙向免疫調節的平衡， 在母胎免疫耐受中起著重要作用的是CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞（Treg）細胞[1， 2]。有研究表明[3， 4]， Foxp3基因可以調節CD4+CD25+Treg細胞的發育及功能， 并且能介導其活化對機體產生負反饋， 目前國內外對HDCP和Foxp3-6054， -924基因多態性之間相關性的研究還比較少， 本研究旨在分析Foxp3-6054， -924基因位點多態性在HDCP和正常孕婦之間的差異， 從而探討HDCP發生中的分子遺傳學機制。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2013年10月～2014年9月本院產科收治入院的186例HDCP患者， 設為病例組， 均符合《婦產科學》第8版的HDCP疾病的診斷標準， 排除慢性高血壓及自身免疫等疾病；另選取同期251例本院住院的正常孕婦， 設為對照組。

1. 2 研究方法 以EDTA抗凝管留取兩組靜脈血3 ml， 置于4℃保存， PCR擴增Foxp3-6054、Foxp3-924基因， 按順序加入0.5 μl模版DNA、5 μl Buffer、1 μl 25 mmol/L的dNTP混合物、0.5 μl上、下游引物、0.25 μl Taq聚合酶， 最后加H2O至25 μl。Foxp3-6054 基因引物：上游引物F1 5'-ACCTTTAAGTCTTCTGCCATTTATTCTATTATTT-3'；F2 5'-CCTTTAAGTCTTCTGCCATTTATTCCTATTATTA-3'；下游引物R5'-TGATTATCAGCGCACACACTCAT-3'；Foxp3-924 基因引物：上游引物P1 5'-CTGGCTCTCTCCCCAACTG；A-3'， P2 5'-CTGGCTCTCTCCCCAACTGC-3'；下游引物R 5'-ACAGAGCCCATCATCAGACTCTCTA-3'。

1. 3 觀察指標 觀察比較兩組的基礎資料（年齡、高血壓家族史、孕周、SBP、DBP）、Foxp3-924基因型頻率及等位基因頻率、Foxp3-6054位點基因型頻率及等位基因頻率分布情況， 分析Foxp3基因多態性與HDCP相關性。

1. 4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。采用Logistic回歸分析兩組基因型與等位基因的相關性， 以優勢比及其95%可信區間表示其相對危險度。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 基礎資料 兩組研究對象年齡比較， 差異無統計學意義（P>0.05）， 兩組高血壓家族史、孕周、SBP、DBP比較， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 Foxp3-924基因型頻率及等位基因頻率 病例組A/A、A/G、G/G表型頻率分別為：45.7%、41.9%、12.4%， 對照組分別為44.2%、41.0%、14.7%；病例組A、G基因頻率分別為：61.7%和38.3%， 對照組分別為：60.5%和39.5%。Foxp3-924基因多態性檢測中兩組基因頻率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2. 3 Foxp3-6054位點基因型頻率分布 病例組Foxp3-6054位點的基因分型為A/A、A/T、T/T， 其基因分型存在多態性， 其表型頻率分別為：24.7%、51.6%、23.7%， 對照組分別為10.8%、45.4%、43.8%；病例組A、T基因頻率分別為：50.4%和49.6%。對照組分別為：38.6%和61.4%。病例組患者中T/T基因型及T等位基因頻率明顯少于對照組， 差異具有統計學意義（P<0.05）；病例組A/A基因型頻率明顯多于對照組， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表3。

2. 4 Foxp3-6054 Logistics回歸分析 6054位點聯合基因型AT+TT可以減少罹患HDCP的風險（P<0.05）；聯合基因型AT+AA顯著增加罹患HDCP的風險（P<0.05）。見表4。

3 討論

HDCP是妊娠特有的疾病之一， 是孕產婦和圍生期嬰兒死亡的主要病因。目前HDCP的確切病因仍不完全清楚， 但國內外學者一致認為HDCP的發病機制可能是由多因素共同參與的， 其中一個重要因素是機體免疫機制失衡：CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞參與妊娠期高血壓疾病炎癥免疫過度激活的調控， 并且在母胎免疫耐受中起著重要作用[5]。前期研究表明[6， 7]， HDCP患者外周血中CD4+CD25+Treg的數目和功能明顯低于正常妊娠者， 提示CD4+CD25+Treg細胞減少可能參與了HDCP的發生。Foxp3是CD4+CD25+Treg細胞發育和功能維持的一個重要調節因子[8， 9]，作為CD4+CD25+Treg細胞的功能性轉錄因子在機體免疫耐受及內環境穩定中發揮著重要作用：調節性T細胞的減少可以打破機體內負向調控機制， 使母胎免疫耐受失衡， 從而導致疾病的發生。本研究從分子遺傳學機制方面對HDCP患者外周血中Foxp3表達水平進行分析， 進一步闡明了Foxp3基因多態性在HDCP發病機制中的重要作用。endprint

通過對HDCP病例組患者外周血中Foxp3-6054及924各基因位點的多態性進行檢測， 結果顯示， Foxp3-924基因多態性檢測中兩組基因頻率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。病例組患者中T/T基因型及T等位基因頻率明顯少于對照組， 差異具有統計學意義（P<0.05）；病例組A/A基因型頻率明顯多于對照組， 差異具有統計學意義（P<0.05）。Logistic回歸分析提示AT+TT型可減少HDCP的發生風險（OR=0.367， 95%CI為0.218， 0.617， P<0.05）， 而聯合基因型AA+AT可增加罹患HDCP的風險（OR=2.518， 95%CI為1.654， 3.832， P<0.05）。因此認為， HDCP可能與Foxp3-6054基因多態性有關， 而與Foxp3-924基因多態性無關， 與前期研究結果一致[10]。

總之， Foxp3-6054位點基因型及等位基因頻率在HDCP組與正常妊娠組間存在顯著性差異， Foxp3-6054位點多態性可能參與HDCP的發生， 而Foxp3-924基因多態性可能與HDCP無關。

參考文獻

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[10] Chen X， Gan T， Liao Z， et al. Foxp3 （-/ATT） Polymorphism Contributes to the Susceptibility of Preeclampsia. Plos One， 2013， 8（4）：e59696.

[收稿日期：2017-09-18]endprint