不同級別的厚樸飲片GC指紋圖譜對比研究

譚淏雯，許臘英

·炮制制劑·

不同級別的厚樸飲片GC指紋圖譜對比研究

譚淏雯1，許臘英2*

目的：比較不同級別的厚樸飲片氣相指紋圖譜, 以相似度為評價指標， 探索不同級別的厚樸飲片的GC指紋圖譜的區(qū)別。方法：將厚樸按不同質地、厚度分為三個級別：質地大于0.60 g/cm3、厚度4～6 mm以上的為優(yōu)級，質地接近0.60 g/cm3、厚度2～4 mm以上的為一級，質地小于0.60 g/cm3、厚度2 mm以下的為統貨。 用氣相色譜法分別對不同質地、厚度的各4批次湖北恩施GAP示范基地的厚樸進行分析, 建立厚樸GC指紋圖譜共有模式，比較其區(qū)別。結果：經比較發(fā)現,不同質地、厚度的厚樸共有模式之間相似度差別明顯，表明各級別之間有特征性。結論：此方法靈敏度高、重現性好，可以直接區(qū)分各級別厚樸，為厚樸飲片分級方法提供參考依據。

厚樸飲片；GC指紋圖譜；質地；厚度

本項目研究的厚樸為木蘭科植物厚樸(Magnolia officinalisRehd. et Wils.)的干燥干皮、根皮及枝皮[1]。道地產區(qū)為四川、湖北等省。能行氣化濕、健脾和胃，臨床上用于濕滯傷中、脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳等癥。厚樸中的揮發(fā)油是其主要藥效成分之一,其中主要含B-桉油醇[2-3],含量＞95%。經現代藥理實驗研究證明,厚樸揮發(fā)油能引起胃液、唾液分泌,加快腸胃蠕動,有健胃作用等藥理活性[4-9]。有關厚樸成分研究的文獻很多，但大多都是關于不同產地厚樸飲片指紋圖譜區(qū)別的研究[10-16]，對不同質地、厚度的厚樸飲片GC指紋圖譜的研究幾乎沒有。本文通過對不同質地、厚度的厚樸飲片,以β桉油醇為指標，研究其GC指紋圖譜，來尋找質地、厚度與厚樸分級的關聯。

1 儀器、試劑與藥材來源

1.1 儀器與試劑

SHIMAD2UGC -14C氣相色譜儀, HP -5色譜柱(30 m*0.32 mm*0.25 um)。BP -211D型十萬分之一分析天平(西德Sartorius產)。所用試劑均為分析純;

β-桉油醇 對照品由中國生物制品檢驗檢定所提供，批號：11002-201105。

1.2 藥材

實驗用厚樸藥材購于湖北省恩施GAP示范基地,經湖北中醫(yī)藥大學鑒定教研室張林碧教授鑒定為木蘭科植物厚樸(Magnolia of fi cinalis Rehd. etW ils)的干燥樹皮、根皮和枝皮。

根據厚樸藥材的不同質地和厚度，將厚樸藥材分為三個級別：質地大于0.60 g.cm-3、厚度4～6 mm以上的為優(yōu)級，質地接近0.60 g.cm-3、厚度2～4 mm以上的為一級，質地小于0.60 g.cm-3、厚度2 mm以下的為統貨。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱∶ HP -5柱(30 m*0.32 mm*0.25 um); 柱前壓：50 kpa,柱流速：1.743 ml*min-1,分流比40：1，尾吹5圈，氣化室溫度：250 ℃，檢測器：280 ℃。程序升溫：起始溫度50 ℃（2 min）以6 ℃*mim-1升至116 ℃（2 min），再以1 ℃*min-1升至118 ℃（2 min）,再以10 ℃*min-1升至220 ℃（15 min）[6-8]。

2.2 樣品溶液的制備

稱取厚樸粉末各約50 g,按《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則2204揮發(fā)油測定方法,加300 mL純化水浸泡30 min,自揮發(fā)油測定器上端加純化水至溢入燒瓶中止，加正己烷2 mL,加熱到沸并保持微沸5 h,停止加熱1 h后分取正己烷液,得厚樸樣品溶液備用。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取0.3 mg的β桉油醇對照品溶于25 mL正已烷溶劑中，搖均備用。

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度試驗 取同一供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，連續(xù)進樣5次，將數據導入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”(2004A版)，設定匹配模板，將譜峰自動匹配，生成對照，然后進行譜峰差異性評價和整體相似性評價，考察色譜峰相似度的一致性，結果其主要共有峰面積RSD＜2%，表明儀器精密度良好。結果見圖1，表1。

表1 厚樸飲片氣相指紋圖譜精密度試驗相似度分析結果

50.99980.9995 0.9996 0.9998 1.0000 0.9998對照0.9997 0.9997 0.9998 0.9999 0.9998 1.0000

圖1 厚樸飲片譜精密度試驗GC圖

2.4.2 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，在室溫下放置，分別在0、2、4、8、12 h進行測定，將數據導入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”(2004A版)，設定匹配模板，將譜峰自動匹配，生成對照，然后進行譜峰差異性評價和整體相似性評價，考察色譜峰相似度的一致性，結果其主要共有峰面積RSD＜2%，表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定，結果見圖2，表2。

表2 厚樸飲片氣相指紋圖譜穩(wěn)定性試驗相似度分析結果

圖2 厚樸飲片穩(wěn)定性試驗GC圖

2.4.3 重現性試驗 取同一供試品，平行5份，按供試品溶液制備方法制備，按2.1項下色譜條件測定，將數據導入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”(2004A版)，設定匹配模板，將譜峰自動匹配，生成對照，然后進行譜峰差異性評價和整體相似性評價，考察色譜峰相似度的一致性，結果其主要共有峰面積RSD＜2%表明試驗方法重現性較好，結果見圖3，表3。

表3 厚樸飲片氣相指紋圖譜重現性試驗相似度分析結果表

50.9990 0.99850.9989 0.9980 1.0000 0.9995對照0.9993 0.9989 0.9993 0.9989 0.9995 1.0000

圖3 厚樸飲片GC指紋圖譜重現性試驗色譜圖

2.5 測定法

分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，在上述色譜條件下測定，記錄色譜圖，即得。

2.5.1 厚樸GC指紋圖譜和共有峰的建立 分別取不同厚度、質地的厚樸各10個供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定。記錄各樣品色譜圖。所有組分在45 min內洗脫出柱，共計出峰數71個，其中共有峰數目為34個見圖4，經比較從中選定15個共有峰作為構成厚樸指紋圖譜的穩(wěn)定的特征峰。

圖4 厚樸飲片氣相指紋圖譜

共有峰定性 通過比較樣品與對照品出峰保留時間及結合文獻研究確認， 21號峰為α -丁香烯，22號峰為γ-杜松烯，23號峰為α一芹子烯，24號峰為γ-芹子烯，27號峰為丁香烯氧化物，29號峰為茅蒼術醇，30號峰為β-桉醇，32號峰為均三異丙苯。見圖5、圖6、表4。

圖5 β-桉醇GC對照品圖譜

圖6 厚樸干皮揮發(fā)油總離子流圖

表4 厚樸干皮揮發(fā)油總離子流數據

2.5.2 共有模式的生成及相似度的計算 將圖譜導入國家藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”(2004A版)進行數據，設定時間窗寬度為0.5 min，以中位數法生成對照指紋圖譜，建立共有模式（即對照圖譜），各樣品與該共有模式比較，結果見圖7、表5。

圖7 各級別共有模式相似度及疊加圖

表5 相似度結果

2.5.3 結果 根據厚樸藥材的三個級別（ 優(yōu)級 → 一級 → 統貨）分別分析GC共有模式圖譜峰：

a組峰：A3-A4的峰面積比值0.5、0.6、0.8，呈逐漸增大趨勢。

b組峰：A6-A7-A8的峰面積比值（14：7：100）、（20：20∶100）、（14：16：100），6.7號峰峰面積比值逐漸減小趨勢2→1→(＜1)。

c組峰：A11-A12-A13-A14的峰面積比值（0.7：1.4：3.7：1）、（1.5：1.8：5.5：1）、（3：3.5：5：1）內部比例不同，峰形不同。

d組峰：A15-A17的峰面積比值3、2、1.5 呈逐漸減小趨勢。

3 討論

分析三種級別的厚樸藥材的GC共有模式，各級別共有模式34個峰，將優(yōu)級厚樸前15個強峰作為特征峰，其他級別相應的這15個峰作為分子，各共有模式34個峰面積總和作為分母算得面積的比值，數據等級明顯，符合等級分級標準。

三種等級的共有模式之間的相似度很差，區(qū)別明顯，表明各級別之間各具有特征性，可以直接區(qū)分各級別厚樸飲片。

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Comparative study on GC fingerprints of Houpo of different levels

/TAN Hao-wen1, XU La-ying2/ / (1. NO.1 Middle School Affiliated to Central China Normal University, Wuhan 430223, Hubei; 2. Pharmacy School, Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065, Hubei)

Objective:The GC fingerprints of Houpo of different levels were compared. Similarity was used as the evaluation index to explore the difference of different levels of Houpo GC fingerprints.Method:According to different texture and thickness,Houpo was divided into three levels∶ premium class with the texture greater than 0.60 g/cm3and thickness larger than 4 ～ 6mm;first class with texture close to 0.60 g/cm3and thickness of 2 ～ 4mm; fair average quality with texture less than 0.60 g/cm3, and thickness less than 2 mm. GC was applied to analyze four batches Houpo of different textures and thickness from Enshi GAP demonstration base. And the common pattern of GC fingerprints of Houpo was established to compare the difference among them.Result:The similarity of Houpo GC common pattern of different texture and thickness had significant difference which indicated that the different characteristic of Houpo existed among different levels.Conclusion:The sensitivity of this method is high and reproducibility is good. It can directly distinguish the different levels of Houpo, and can provide reference for Houpo classification method.

Houpo; GC fingerprint; texture; thickness

R283.1

A

1674-926X(2017)06-007-04

國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)科研專項基金（201007012-2）

1.華中師范大學第一附屬中學，武漢，湖北，武漢430223；2.湖北中醫(yī)藥大學藥學院，武漢，湖北，武漢 430065

譚淏雯，（2000- ），女，學生。Tel∶13986249486 Email∶450208495@qq.com

許臘英，（1952- ），女，教授，主要從事中藥飲片標準化研究工作。Tel∶18971211681 Email∶xulaying@163.com

2017-3-3

(責任編輯：傅舒)