心水通膠囊中藥水提物的急性毒理學實驗研究

譚春江，張佳慧，曾建偉，吳巖斌，陳文列

·藥理毒理·

心水通膠囊中藥水提物的急性毒理學實驗研究

譚春江，張佳慧，曾建偉，吳巖斌，陳文列

目的：通過心水通膠囊中藥水提物小鼠灌胃實驗, 研究該藥物的毒理學反應。方法：分別以心水通膠囊中藥水提物最大濃度和動物的最大胃容納灌服給藥，連續觀察14 d，正常飲食組為對照組。觀察小鼠毛色體征、活動情況、體重變化、尿量及尿液成分變化，檢測血電解質、心肝腎功能以及部分內臟組織病理學變化。結果：心水通膠囊中藥水提物的最大耐受量為204.24 g?kg-1，按60 kg人計算，相當于成人臨床用量的近400倍。從第二天起，給藥各組小鼠的尿量比對照組明顯增多，且呈劑量依賴性；而外觀行為，飲食體重、大小便和分泌物、血電解質、心肝腎功能與對照組比較無顯著差異；給藥各組心、肝、脾、肺、腎的病理切片未發現典型的炎癥、增生或萎縮等病理學改變，形態與對照組相似。結論：心水通膠囊中藥水提物對受試動物未出現無明顯急性毒理學反應，可安全用于臨床。

心水通膠囊水提物;急性毒性;灌胃給藥;小鼠;最大耐受量

慢性心力衰竭常可辨為心陽不振，或心氣不足，或痰瘀互結，或水飲凌心等癥候，臨床上往往表現為虛實夾雜。心水通膠囊（XST）是由筆者的臨床經驗方，具有溫補心陽、活血祛瘀，行氣利水之功。前期臨床研究發現， XST對于慢性心力衰竭尤其是伴有利尿劑抵抗患者療效顯著，而且能有效改善患者心功能、提高生活質量, 但該藥物未經毒理實驗檢驗。為了明確該方藥對人體健康的影響, 我們對其進行了安全毒理學評價,為臨床用藥提供可靠的科學數據。

1 材料

1.1 受試藥物

為XST組成藥材的中藥飲片，由福建中醫藥大學附屬第三人民醫院中藥房提供。

1.2 試驗動物

SPF級ICR小鼠40只, 雌雄各半，體重20±2 g, 由福建中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.3 主要器材

灌胃器、燒杯、量筒、天平、北京DT5-1離心機、美國貝克曼Cx7全自動生化分析儀、URIT-500B尿液分析儀等。

2 實驗方法

2.1 中藥提取液的制備

按照XST膠囊的中藥配方比例購買中藥飲片，將總重量為2400 g的中藥飲片水煎煮，過濾，收集濾液轉至旋轉蒸發儀，將其濃縮至最大濃度（恰能通過灌胃針頭）為470 mL，每1 mL相當于生藥5.106 g,備用。

2.2 急性毒性實驗

SPF級ICR小鼠40只, 體重18～22 g，雌雄各半，置于小鼠代謝籠觀察，每籠2只飼育1 周，觀察各組動物活動、進食、糞便等情況均無異常后，采用臨床給藥途徑灌胃給藥，隨機分為4組：空白對照組(無任何處理) 和不同劑量藥物三組：第一組每天給藥1次, 第二組每天給藥2次, 第三組每天給藥3次, 按照小鼠每次灌胃給藥濃度為5106 mg?mL-1的中藥懸濁液0.4 mL/10 g給藥, 連續觀察14 d。同時觀察小鼠外觀、行為活動、呼吸、分泌物、排便、死亡及出現的癥狀,每2d稱一次體重。末次給藥后，每組取6只小鼠，雌雄各半，禁食不禁水16 h，將小鼠摘除眼球取血，分別檢測血電解質：鈉（Na）、鉀（K）、氯（Cl）、鈣（Ca）、磷（P）；腎功能：血清尿素氮( BUN) 、血肌酐（CRE）、血尿酸（UA）；肝功能：總蛋白（TP）總膽紅素( TBIL) 、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶( AST)、總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（ALP）；心功能：肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶(CKMB)和心肌肌鈣蛋白（TnI）。頸椎脫臼處死小鼠,對臟器進行全面肉眼尸檢，解剖稱取心、肝、脾、肺、腎的濕重，求出臟器系數(臟器重/體重，mg?g-1) ，將上述器官用甲醛溶液固定，常規病理切片，進行組織學檢查。余下的動物停藥1周后，按上述方法進行檢測，觀察有無藥物所致的延遲性變化。采用改良寇氏法計算LD50和95% 的可信區間，測定LD50; 若無法測定LD50，則測量最大耐受量。

3 結果

第一、二、三劑量各組小鼠的外觀皮毛光滑、行為活動自如，飲食正常, 體重增加, 大小便正常, 無異常分泌物, 無任何不良反應。觀察14 d后, 四組小鼠均未出現死亡現象。表1可見，在同一組別內，第2 d小鼠體重與第14 d小鼠體重比較有所增加，但無統計學意義（P＞0.05）；同一日內，給藥各組小鼠的體重變化與對照組沒有組間差異（P＞0.05）。表2所示，在同一日內，3個給藥組明顯比對照組增多，而且小鼠尿量呈劑量依賴性增多，尿中的紅/白細胞個數、尿蛋白和尿隱血4個組別之間沒有明顯差異，也不呈時間、劑量依賴性變化。給藥各組中腎功能、肝功能和心功能的指標與對照組比較無統計學意義，三個劑量組之間各指標也未見顯著差異（見表3、表4，P＞0.05）。解剖稱取各組小鼠心、肝、脾、肺、腎的濕重，各給藥組與對照組，或給藥組間比較，其臟器系數無統計學意義（數據略）。此外，觀察給藥2周和停藥后1周( 恢復期) 各給藥組的心、肝、脾、肺、腎的病理切片，均未見典型的炎癥、增生或萎縮等病理學改變，與對照組比較均未見異常改變。

表1 心水通膠囊對小鼠體重的影響(±s) g

表1 心水通膠囊對小鼠體重的影響(±s) g

注∶ 同一日中，給藥物各組小鼠體重與對照組小鼠體重比較無差異（P＞0.05）

第三組（n=10）第2d25.88±2.4025.17±2.3325.70±2.1725.53±2.232第4d25.60±2.5025.52±2.3126.42±2.9725.88±2.931第6d25.98±2.8224.91±1.9625.97±2.09426.64±2.97第8d26.20±2.6726.30±2.7227.39±3.1326.91±2.95第10d26.90±3.1126.87±2.8928.00±2.88727.75±3.17第12d27.63±2.7127.17±2.6828.23±3.1428.06±3.14第14d27.93±3.1427.85±2.6129.14±3.1729.06±3.29時間對照組（n=10）第一組（n=10）第二組（n=10）

表2 心水通膠囊對小鼠尿液的影響(±s)

表2 心水通膠囊對小鼠尿液的影響(±s)

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注：與對照組比較，*P＜0.05

表3 心水通膠囊對小鼠血液生化指標的影響( ± s)

表3 心水通膠囊對小鼠血液生化指標的影響( ± s)

注：對照組與各藥物干預組之間或藥物組之間比較，各項指標無差異（P＞0.05）

CRE(mmol?L-1)組別BUN(mmol?L-1)UA(mmol?L-1)TBIL(mmol?L-1)TP(g?L-1)AST(U?L-1)ALT(U?L-1)ALP(U?L-1)CK(U?L-1)CKMB(U?L-1)TnI(μg?L-1)對照組n=108.15±1.219.2±1.1111.9±3.73.25±1.255.1±3.2112.9±2.343.7±2.2137±5.81170.80±20.4530.5±12.30.2±0.01第一組n=108.32±1.123.5±1.7113.2±7.23.12±1.155.7±3.5127.5±2.141.2±3.2145±6.71150.10±17.5593.3±14.50.3±0.02第二組n=108.03±1.515.9±2.188.2±5.32.12±1.153.2±5.285±2.241.1±4.2143±8.81122.43±12.3578.1±10.30.2±0.01第三組n=107.65±1.218.21±2.286.5±4.52.20±1.251.4±4.2111.7±3.228.8±2.7139±5.61155.30±11.2501.3±7.80.2±0.01

表4 心水通膠囊對小鼠血電解質的影響( ± s)

表4 心水通膠囊對小鼠血電解質的影響( ± s)

注：對照組與各藥物干預組之間或藥物組之間比較，各項指標無差異（P＞0.05）

檢測項目（mmoL?L-1）對照組（n=10）第一組（n=10）第二組（n=10）第三組（n=10）Na 123.22±11.40123.22±11.40118.17±12.33118.17±12.33125.11±11.34125.11±11.34120.17±13.22120.17±13.22 K 4.21±2.504.21±2.503.52±1.313.52±1.314.12±1.114.12±1.113.92±1.233.92±1.23 Cl 102.23±2.50102.23±2.5098.62±7.3198.62±7.3192.22±6.2192.22±6.21100.23±7.56100.23±7.56 Ca 2.11±2.822.11±2.822.91±0.962.91±0.962.11±0.762.11±0.762.55±0.372.55±0.37 P 2.72±2.672.72±2.673.30±1.723.30±1.723.10±1.523.10±1.522.89±1.242.89±1.24

4 討論

XST是筆者的臨床驗方，于2013年12月4日授予國家發明專利（專利號：ZL201210197892X）。該藥物具有溫陽益氣，活血祛瘀，利水消腫之功。前期臨床證實，該藥物能顯著改善慢性心力衰竭患者的心功能。不僅具有利水消腫，改善慢性心力衰竭癥狀，提高患者生存質量，改善預后。而且能顯著改善利尿劑抵抗現象，恢復利尿劑的敏感性，取得了較好的近期和遠期的臨床效果[1]。此外，我們課題組在缺氧誘導的人心肌細胞實驗中發現，XST水提物能提高心肌細胞缺氧的耐受性，藥物干預組細胞的形態和超微結構比對照組細胞有明顯改善。進一步研究發現，該藥物能降低脂質過氧、抑制自由基產生，改善細胞缺氧再灌注損傷，提高細胞抗氧化能力，提高細胞的存活率[2]。近期發現，該藥物水提物能上調心肌細胞的水通道蛋白-1 ( aquaporin-1)，改善細胞膜的通透性，緩解缺血區心肌細胞的水腫，心肌細胞對缺血的耐受性明顯增強，心肌細胞的損傷減少，對缺氧損傷性細胞具有較好的保護作用[3]。近期我們在臨床研究中發現，該藥物還能作用于腎小管中水通道蛋白-2 ( aquaporin-2) ，抑制水的重吸收，從而起到利尿效果，改善鈉水潴留癥狀[4]。

本次實驗采用模擬臨床口服給藥途徑，最高藥物濃度( 能順利通過灌胃針頭) 和最大胃容納量0.4 mL/10g給小鼠灌胃，連續觀察14 d，未見死亡，未測出LD50。急性毒性試驗表明，XST的最大耐受量為204.24 g?kg-1，相當于成人臨床用量的400 倍，該藥物最大劑量未見毒性及動物死亡現象。

在本次實驗中，3個劑量連續給小鼠灌胃14 d，也未見小鼠的外觀皮毛、行為變化，飲食情況出現異常, 大小便及分泌物也未見異常。XST水提物能增加小鼠尿液的排尿量，但對尿液性質和血電解質未見不良影響，對心肝腎功能，以及心、肝、脾、肺、腎等臟器系數及病理學組織也未發現異常影響。提示XST對上述器官無病理性損害。停藥1周后再次檢查上述各項目，3個劑量組之間以及與對照組之間無顯著差別，表明該藥物耐受性好，也無延遲毒性反應。本實驗數據說明，該藥物在規定劑量下服用是安全可靠，為臨床安全性用藥提供了實驗依據。

[1] 譚春江,陳文列,林久茂,等.心水通膠囊對慢性心力衰竭患者利尿劑抵抗的臨床研究[J].中華中醫藥學刊,2011,29(4)∶837.

[2] 蕭璐,譚春江,吳巖斌.心水通膠囊水提物對缺氧損傷性人主動脈內皮細胞LDH、MDA和SOD的影響[J].中醫藥學報.2013,41(6)∶47.

[3] Chunjiang Tan,Yanbin Wu,Wenlie Chen,et al. Xinshuitong capsule ameliorates hypertrophy of cardiomyocytes via aquaporin pathway in the ischemia–reperfusion rat hearts.International[J] .Journal of Cardiology, 2011,152∶ S54.

[4] Chunjiang Tan,Lu Xiao,Songming Chen.Xinshuitong Capsule via aquaporin-2 enhances Xinshuitong Capsule via aquaporin-2 enhances the diuretic effect in the chronic heart failure patients[J]. JACC.

Experimental research on the acute toxicology of the water-extracts of Xinshuitong Capsule

/TAN Chun-jiang, ZHANG Jia-hui, ZENG Jian-wei, WU Yan-bin, CHEN Wen-lie//(Academy of Integrative Medicine, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, Fujian)

Objective:The acute toxicology was investigated after intragastric administration of the water extract of Xinshuitong Capsule to mice.Method:The difference concentrations of water extract according to the maximum stomach volume were intragastricly administered for continuous 14 days. The normal diet group was used as the control group. The alterations of the hair color, activity, weight, urine volume and its compositions were observed. The blood electrolytes change, the functions of heart, liver and kidney and some visceral histopathology changes were detected.Result:The maximum tolerance dosage of the water extract of Xinshuitong Capsule was 204.24 g?kg-1, which was equivalent to nearly 400 times of adults (60 kg) clinical dosage. From the second day to the end of the experiments, the urine volume in the treated groups was significantly increased compared with that of the control group in a dose-dependent manner. However, the mice appearance, behavior, diet, weight, urine compositions, secretions, blood electrolytes, heart, liver and kidney functions showed no significance difference compared with the control group. No signs of typical in flammation, hyperplasia, shrink or other pathological changes in heart, liver, spleen, lung and kidney were found in each drug group. And the pathological condition was similar to the control group.Conclusion:The water extract of Xinshuitong Capsule has no obvious acute toxicological reactions which can be safely applied in clinic.

Water-extracts of Xinshuitong Capsule; acute toxicology; intragastric administration; mice; maximum tolerance of medicine

R 285.5

A

1674-926X(2017)06-014-03

福建省科技廳對外合作重點項目（2014I0012）；福建省衛生和計劃生育委員會（wzzy20131）；福建中醫藥大學校管重點學科專項（X2014137）

福建中醫藥大學中西醫結合研究院，福州 福建350122

譚春江，男，副研究員，主要從事中西醫結合心血管疾病的研究Tel∶0591-22861166 Email∶tchunj@126.com

陳文列，男，研究員，主要從事中西醫結合研究Tel∶0591-22861166 Email∶chen.wl@163.com

2017-06-29

（責任編輯：陳思敏）