基于2015年版《中華人民共和國藥典》探討真偽大黃鑒別的關鍵指標土大黃苷的最佳檢測方法

宋曉莉+張桂杰+趙建剛+陳明霞+劉曄+連增林+李鎬

摘要：目的 建立操作簡便、專屬性強的大黃中土大黃苷檢查方法。方法 通過對比聚酰胺、硅膠薄層色譜法（TLC）和高效液相色譜法（HPLC）檢測大黃藥材中的土大黃苷的研究，考察鑒別正、偽品大黃的最佳方法。結果 采用聚酰胺、硅膠TLC方法檢查大黃中土大黃苷的耐用性較差，HPLC更適用于土大黃苷的檢測。結論 本研究確定的HPLC方法準確可靠，可用于大黃藥材的質量控制，為藥典用大黃的真偽鑒別提供參考。

關鍵詞：大黃；土大黃苷；薄層色譜法；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.12.021

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2017）12-0085-03

Optimum Detection Method for the Key Indicators of Authenticity for Rhaponticin Identification in Rhei Radix et Rhizoma Based on 2015 Edition of Chinese Pharmacopoeia SONG Xiao-li1， ZHANG Gui-jie1， ZHAO Jian-gang2， CHEN Ming-xia2， LIU Ye2， LIAN Zeng-lin1，3， LI Gao1 （1. Pharmacy College of Yanbian University， Yanji 133000， China； 2. Beijing Handian Pharmaceutical Co.， Ltd.， Handian Group， Beijing 102600， China； 3. Institute of Biological Chinese Medicine， Beijing Yichunag Industry Research Institute of Biological Technology， Beijing 101111， China）

Abstract： Objective To establish a simple and specific method for the determination of rhaponticin in Rhei Radix et Rhizoma. Methods A comparison of the methods of polyamide， silica gel TLC and HPLC in the determination of rhaponticin was studied to investigate the optimum way to identify authentic Rhei Radix et Rhizoma. Results The durability of polyamide and silica gel TLC method for the determination of rhaponticin in Rhei Radix et Rhizoma was poor. HPLC method was more suitable for the detection of rhaponticin. Conclusion HPLC method is accurate and reliable， and can be used for the quality control of Rhei Radix et Rhizoma and provide references for the authenticity of Rhei Radix et Rhizoma.

Key words： Rhei Radix et Rhizoma； rhaponticin； TLC； HPLC

近年來，由于商業利益的驅動，市場上出現了許多中藥偽品，其中包括用量大、使用范圍廣的大黃。蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根及根莖為藥典規定的正品大黃[1]。而同屬波葉組植物華北大黃、天山大黃等則為偽品大黃。為去偽存真，建立操作簡便、靈敏度高、專屬性強的鑒別方法是保證安全用藥的重要手段。

基金項目：北京市科技計劃“十病十藥”中藥專項（Z161100001816007）

通訊作者：連增林，E-mail：zenglinlian@aliyun.com；

李鎬，E-mail：gli@ybu.edu.cn

有研究顯示，正品大黃中均不含土大黃苷，而偽品大黃中的土大黃苷為其特征成分[2]，因此，以該成分為關鍵指標鑒別大黃真偽切實可行。本試驗通過將2015年版《中華人民共和國藥典》收載的檢測方法與其他文獻建立的方法進行比較，建立一種鑒別真偽大黃的最佳檢測方法，為大黃的安全使用提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 Infinity高效液相色譜儀，TB-215D電子分析天平（Denver），KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），聚酰胺薄膜（武漢鑫思銳科技有限公司），硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號20170106）。

土大黃苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110794-201607）；對照藥材掌葉大黃（批號121249-201304）、唐古特大黃（批號120902-201311）、藥用大黃（批號120984-201202）、華北大黃（批號121676-201201），中國食品藥品檢定研究院；掌葉大黃藥材（甘肅，批號1610055）；甲醇（北京化工廠，批號20161212），乙醇（北京化工廠，批號20160928），娃哈哈純凈水（批號20170315）。endprint

2 方法與結果

2.1 聚酰胺薄層色譜法

2.1.1 藥典方法 取掌葉大黃藥材粉末0.1 g，加甲醇10 mL，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）20 min，過濾，作為供試品濃溶液；取供試品濃溶液1 mL，加甲醇稀釋至10 mL，作為供試品稀溶液。另取土大黃苷對照品，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，作為對照品濃溶液；取1 mL對照品濃溶液，加甲醇稀釋至10 mL，作為對照品稀溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5 ?L，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸（30∶5∶5∶20∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果顯示，對照品稀溶液和供試品稀溶液色譜圖清晰度不足；供試品濃溶液色譜中，在對照品色譜相應的位置不顯相同顏色的藍色斑點；但供試品色譜的清晰度仍然不足，而且與對照品相應位置的供試品斑點辨識較困難。

2.1.2 改進方法 取藥用大黃、掌葉大黃、唐古特大黃和華北大黃粉末各0.1 g，加甲醇10 mL，超聲處理20 min，過濾，作為供試品溶液。另取土大黃苷對照品，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5 ?L，分別點于同一聚酰胺薄膜上，采用5個展開劑，分別為甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸（30∶5∶5∶20∶0.1）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶7∶1∶1）、甲苯-甲酸乙酯-甲酸-甲醇（30∶10∶0.1∶20）、醋酸-水（1∶3）、醋酸-水（1∶1），展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果顯示，各供試品斑點顏色明顯；藥用大黃、掌葉大黃、唐古特大黃供試品色譜中，在對照品色譜相應的位置不顯相同顏色的藍色斑點，但與對照品相應位置的供試品斑點辨識較困難；華北大黃供試品色譜中，在對照品色譜相應的位置顯相同顏色的藍色斑點，主斑點附近無干擾。

2.2 硅膠薄層色譜法

取“2.1.2”項下供試品溶液及對照品溶液各5 ?L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（10∶3.5∶0.2∶0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果顯示，各供試品斑點清晰度較聚酰胺板要差；藥用大黃、掌葉大黃、唐古特大黃供試品色譜中，在對照品色譜相應的位置不顯相同顏色的藍色斑點；華北大黃供試品色譜中，在對照品色譜相應的位置顯相同顏色的藍色斑點，主斑點附近無干擾。樣品在硅膠板顯色時間較短。

2.3 高效液相色譜法

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為Kromasil 100-5 C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流動相為甲醇-水（33∶67），流速1.0 mL/min，檢測波長320 nm，柱溫30 ℃。在上述條件下，供試品中土大黃苷色譜峰與其他雜質峰分離度>1.5。色譜圖見圖1。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取土大黃苷對照品適量，加稀乙醇制成每1 mL含土大黃苷50 ?g的溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取大黃對照藥材0.1 g，精密稱定，精密加入稀乙醇10 mL，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）20 min，過濾，取續濾液1 mL，加稀乙醇至10 mL，即得。

2.3.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 ?L，注入液相色譜儀，測定。

2.3.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 ?L，重復進樣6次，測得土大黃苷含量，計算RSD=1.2%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩定性試驗 取土大黃苷對照品及華北大黃供試品溶液，分別在0、2、4、6、12、24 h進樣10 ?L，其峰面積RSD分別為0.45%、0.56%，結果表明對照品溶液和樣品溶液穩定性良好。

3 討論

土大黃苷為二苯乙烯的衍生物，屬于茋苷[3]，在紫外光下顯亮藍色強熒光，溶于稀乙醇、熱丙酮和熱水，微溶于乙醚、乙醇、丙酮和冷水，對光和熱極不穩定。采用藥典方法專屬性不強，容易誤判。有文獻報道，采用HPLC檢測土大黃苷可提高檢測敏感性[4-7]。為此，本研究采用HPLC對土大黃苷進行了檢測，發現主峰附近無干擾，易于判別，操作相對簡便，能夠準確判斷大黃的真偽。

本試驗建立的HPLC方法能得到檢測峰分離度高、質量好的色譜圖，可以準確地檢測出大黃中的土大黃苷，該方法靈敏度高、準確、合理、可靠，能有效控制大黃藥材的質量，鑒別大黃真偽，從而保證用藥的安全性。建議將HPLC收載為《中華人民共和國藥典》“大黃”項下土大黃苷的檢查方法之一，為大黃的去偽存真提供更加有效的技術支持。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：23.

[2] 肖培根.新編中藥志[M].北京：化學工業出版社，2002：66.

[3] 徐穎，郭增軍，譚林.土大黃苷研究進展[J].中國現代應用藥學，2009， 26（7）：549-552.

[4] 沈于蘭，楊敏智，欒潔，等.對大黃中土大黃苷檢測方法的改進[J].中國藥事，2010，24（5）：493-495.

[5] 陳國清，申蘭慧.牛黃消炎片、婦樂顆粒中摻入土大黃的鑒別方法研究[J].西北藥學雜志，2010，25（6）：434-435.

[6] 彭乃煥.RP-HPLC同時測定三黃片中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、土大黃苷含量[J].中成藥，2009，31（12）：1860-1862.

[7] 沈兵，傅靜芝，高洪琳.RP-HPLC法檢測炎可寧片中土大黃苷方法的探討[J].中國藥事，2010，24（9）：901-902.

（收稿日期：2017-07-18）

（修回日期：2017-08-21；編輯：陳靜）endprint